智秀娟，馬挺軍，丁　　軻，李　　棟

（1.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)工學(xué)院，北京100083；2.北京農(nóng)學(xué)院食品科學(xué)與工程學(xué)院，農(nóng)產(chǎn)品有害微生物及農(nóng)殘安全檢測(cè)與控制北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，食品質(zhì)量與安全北京實(shí)驗(yàn)室，北京102206）

大孔吸附樹脂分離純化苦蕎總皂苷的研究

智秀娟1，2，馬挺軍2，丁軻2，李棟1，*

（1.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)工學(xué)院，北京100083；2.北京農(nóng)學(xué)院食品科學(xué)與工程學(xué)院，農(nóng)產(chǎn)品有害微生物及農(nóng)殘安全檢測(cè)與控制北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，食品質(zhì)量與安全北京實(shí)驗(yàn)室，北京102206）

為優(yōu)化大孔吸附樹脂分離純化苦蕎總皂苷的工藝條件，通過靜態(tài)吸附解吸實(shí)驗(yàn)篩選出適合分離純化苦蕎總皂苷的大孔吸附樹脂SP700，其飽和吸附量為（25.241±0.590）mg皂苷/g樹脂。研究了樣液濃度、吸附時(shí)間對(duì)吸附容量的影響，乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)解吸得率的影響，并進(jìn)行了動(dòng)態(tài)實(shí)驗(yàn)，確定了SP700型大孔樹脂分離純化苦蕎總皂苷的最佳工藝條件為：最佳上樣濃度約0.586mg/mL，流速2BV/h，樹脂比樣液體積為1∶1，動(dòng)態(tài)洗脫實(shí)驗(yàn)中，上樣后用體積分?jǐn)?shù)分別為50%和70%的乙醇溶液進(jìn)行分段洗脫，洗脫流速為2BV/h，用量為2～3BV，洗脫得率最高可達(dá)到88.9%，洗脫液蒸干后所得固形物中皂苷含量較提取液固形物中皂苷含量提高了約2倍。

苦蕎，皂苷，分離純化，大孔吸附樹脂

蕎麥多生長(zhǎng)于高寒、高海拔山區(qū)，是蓼科蕎麥屬的雙子葉假禾本科作物，在中國(guó)、印度、俄羅斯、波蘭、巴西、韓國(guó)、日本及美國(guó)等眾多國(guó)家均有種植，耐寒、耐旱、耐貧瘠，生長(zhǎng)周期短，是一種綠色生態(tài)作物，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值豐富［1］。皂苷是苷元為三萜或螺旋甾烷類化合物的一類糖苷，主要分布于陸地高等植物中，也少量存在于海星和海參等海洋生物中，是天然產(chǎn)物化學(xué)庫的重要組成之一，具有廣泛的藥理作用和重要的生物活性，如抗腫瘤［2］、抗病毒［3］、防治心血管疾?。?］、降血糖［5-6］、免疫調(diào)節(jié)等，其功能價(jià)值已引起藥物學(xué)、功能食品學(xué)和化學(xué)工業(yè)工作者的廣泛關(guān)注。

天然產(chǎn)物分離純化的方法很多，如柱層析、大孔吸附樹脂法、高速逆流色譜法等，其中大孔吸附樹脂分離純化技術(shù)是一種快速、經(jīng)濟(jì)、有效的純化方法，具有物理化學(xué)穩(wěn)定性高，選擇性好，再生處理方便，使用周期長(zhǎng)，成本低廉等優(yōu)點(diǎn)［7］，近年來廣泛應(yīng)用于天然產(chǎn)物的分離純化研究和生產(chǎn)，如張若潔等［8］用大孔吸附樹脂純化蘆筍總皂苷，張小飛等［9］對(duì)大孔樹脂分離純化穿山龍薯蕷總皂苷的工藝進(jìn)行了優(yōu)化研究，丁軻等［10］研究了酸棗仁中三萜總皂苷的大孔樹脂分離純化工藝，均取得了較理想的純化效果。目前，國(guó)內(nèi)外有關(guān)苦蕎中提取分離活性物質(zhì)研究報(bào)道已有很多，但是對(duì)其中皂苷類成分進(jìn)行分離純化的研究卻鮮有報(bào)道，僅黃海燕對(duì)苦蕎乙醇提取物進(jìn)行了分離純化并分析了其中所含有效成分的功能活性［11］。

為提高苦蕎總皂苷的得率，節(jié)約資源，本文通過考察6種不同極性的大孔吸附樹脂對(duì)苦蕎總皂苷的靜態(tài)吸附和解吸性能，篩選出最合適的SP700型樹脂，對(duì)其靜態(tài)及動(dòng)態(tài)吸附性能進(jìn)行了研究，為大孔吸附樹脂法富集、純化苦蕎總皂苷提供可行的工藝路線。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

苦蕎（黑豐一號(hào)） 由山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院提供，于60℃真空干燥至恒重，粉碎后過60目篩保存?zhèn)溆?；大孔吸附樹脂日本三菱化學(xué)公司生產(chǎn)，均經(jīng)過前處理，密封后放入冰箱待用；薯蕷皂苷標(biāo)準(zhǔn)品（＞95%） 百靈威科技有限公司；香草醛（99.0%） 北京化學(xué)試劑公司；石油醚（30～60℃）、無水乙醇、正丁醇、高氯酸等其余常規(guī)試劑均為分析純。

TU1810型紫外可見分光光度計(jì)北京普析通用儀器有限公司；BT-100N型數(shù)顯恒流泵、CBS-B型程控多功能全自動(dòng)部分收集器上海滬西分析儀器廠有限公司；HH-S型數(shù)顯恒溫水浴鍋江蘇常州翔天實(shí)驗(yàn)儀器廠；HZS-HA型恒溫振蕩器哈爾濱市東明醫(yī)療儀器廠；RE52-98型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上海亞榮生化儀器廠；H35型冷卻水循環(huán)器北京萊伯泰科儀器有限公司；GL-20B型臺(tái)式離心機(jī)上海安亭科學(xué)儀器廠。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1苦蕎總皂苷粗品的制備將苦蕎籽粒脫殼粉碎后過60目篩，以石油醚（30～60℃）于50℃索氏提取8h，干燥至恒重得脫脂苦蕎粉末。精確稱取一定量的脫脂原料，以1∶12的固液比，用70%的乙醇水溶液于50℃置于磁力攪拌器上保持恒定的轉(zhuǎn)速回流提取提取1h，4000r/min離心10min除去殘?jiān)?，濃縮提取液，濃縮后的提取液用蒸餾水溶解后加石油醚等體積萃取3次脫脂，取下層水相加水飽和正丁醇等體積萃取3次，合并正丁醇相，濃縮干燥，取干燥品以蒸餾水復(fù)溶后待用。

1.2.2苦蕎總皂苷濃度的測(cè)定方法

1.2.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作參照張小飛等［9］的方法，并略有改進(jìn)：精密稱取干燥至恒重的薯蕷皂苷對(duì)照品10.0mg，用甲醇溶解并定容至25mL，搖勻，配制成質(zhì)量濃度為0.4mg/mL的薯蕷皂苷標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別準(zhǔn)確量取該標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7mL于25mL具塞試管中，在70℃水浴上蒸干甲醇后取出，依次加入5%的香草醛-冰醋酸溶液0.2mL，高氯酸0.8mL，于70℃水浴上封口加熱15min，迅速在冰水中冷卻，再加入5mL的冰醋酸搖勻，以香草醛-冰醋酸溶液∶高氯酸∶冰醋酸=1∶4∶25的混合溶液作為空白對(duì)照，于最大吸收波長(zhǎng)454nm處測(cè)得吸光值（A），以吸光值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，薯蕷皂苷標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得擬合回歸方程：x=4.2937A－0.8523（R2=0.9989），薯蕷皂苷標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量含量在0～46.7μg/mL范圍內(nèi)與吸光值線性關(guān)系良好。

1.2.2.2含量的測(cè)定參照1.2.2.1中的步驟處理樣液后，測(cè)定吸光值A(chǔ)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線分別計(jì)算苦蕎提取液中總皂苷的含量，取平均值。

1.2.3樹脂的篩選

1.2.3.1不同樹脂的吸附容量的測(cè)定分別準(zhǔn)確稱取預(yù)處理后的SP700、SP825、HP20、HP2MGL、SP70、SP207大孔樹脂各1.0g，置于50mL的具塞三角瓶中，精確加入制備好的苦蕎總皂苷提取液（樣液濃度0.586mg/mL）50mL，以150r/min的速度在室溫下振蕩吸附24h，至吸附平衡，抽濾，按照1.2.2中的方法測(cè)定濾液中的總皂苷濃度，按照公式（1）計(jì)算上述6種樹脂的飽和吸附容量［10］。

式中：Q為飽和吸附容量（mg/g干樹脂）；C0為苦蕎皂苷在樣液中的初始濃度（mg/mL）；Ce為苦蕎皂苷在吸附殘液中的濃度，即平衡濃度（mg/mL）；V1為加入的吸附溶液的體積（mL）；m為干樹脂用量（g）。

1.2.3.2不同樹脂的解吸得率的測(cè)定實(shí)驗(yàn)中選用毒性低、易濃縮回收的乙醇作解吸溶劑。向上述1.2.3.1中充分吸附后的各份樹脂中加入體積分?jǐn)?shù)為90%的乙醇50mL，密塞，以150r/min的速度于室溫下振蕩解吸24h，至解吸平衡，抽濾，按照1.2.2中的方法測(cè)定濾液中總皂苷濃度，利用公式（2）計(jì)算各種樹脂的解吸得率［10］。

式中：D為苦蕎總皂苷的解吸得率（%）；Cx為解吸液中苦蕎皂苷的濃度（mg/mL）；V2為解吸液體積（mL）；Q為吸附容量（mg/g干樹脂）；m為干樹脂用量（g）。

1.2.4SP700對(duì)苦蕎總皂苷的靜態(tài)吸附-解吸條件優(yōu)化

1.2.4.1最佳樣液濃度的確定分別準(zhǔn)確稱取預(yù)處理后的6份SP700大孔樹脂各1.0g，置于50mL的具塞三角瓶中，精確加入初始樣液濃度分別為0.147、0.293、0.440、0.586、0.733、0.879mg/mL的苦蕎總皂苷提取液50mL，按照與1.2.3.1中相同的操作方法使其充分吸附后抽濾，按照1.2.2中的方法檢測(cè)濾液中苦蕎總皂苷的濃度，計(jì)算其吸附率。之后對(duì)上述充分吸附后的樹脂按照1.2.3.2中相同的操作，解吸至平衡后抽濾，測(cè)定濾液中總皂苷的濃度，按照公式（2）計(jì)算解吸得率，考察室溫下不同樣液濃度對(duì)吸附解吸效果的影響，以確定最佳樣液濃度［12］。

1.2.4.2吸附平衡時(shí)間的確定精密稱取SP700樹脂1.0g各3份，置于三角瓶中，分別加入苦蕎總皂苷提取液50mL（最佳樣液濃度由1.2.4.1確定），于搖床中以150r/min的轉(zhuǎn)速，室溫下振蕩吸附，每隔30或60min取其上清液，按照1.2.2中的方法檢測(cè)其中苦蕎總皂苷的含量，以吸附時(shí)間為橫坐標(biāo)，吸附容量為縱坐標(biāo)繪制其吸附動(dòng)力學(xué)曲線，以考察不同的吸附時(shí)間對(duì)吸附容量的影響［10］，確定吸附平衡時(shí)間。

1.2.4.3洗脫液最佳體積分?jǐn)?shù)的確定精密稱取SP700樹脂1.0g各5份，置于三角瓶中，分別加入苦蕎總皂苷提取液50mL（最佳樣液濃度由1.2.4.1確定），按照1.2.3.1中的操作充分吸附后，再按照1.2.3.2中的方法在室溫下用不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇溶液（10%、30%、50%、70%、90%）50mL對(duì)其進(jìn)行解吸，按照公式（2）計(jì)算其解吸得率，以確定解吸液的最佳體積分?jǐn)?shù)［13］。

1.2.5SP700大孔樹脂動(dòng)態(tài)吸附-解吸條件優(yōu)化

1.2.5.1最佳上樣量的確定將已預(yù)處理過的SP700大孔吸附樹脂15mL，濕法裝柱（Φ10mm×200mm），上樣，對(duì)層析柱下端流出液間隔取樣，每3mL一管，并編號(hào)，直至達(dá)到飽和吸附，測(cè)定每管樣品中苦蕎皂苷的含量，計(jì)算泄漏率，以流出液的樣品標(biāo)號(hào)為橫坐標(biāo)，泄漏率為縱坐標(biāo)繪制泄露曲線［9］，根據(jù)漏點(diǎn)，確定最佳上樣液體積。

確定泄露點(diǎn)的計(jì)算公式：

式中：C0為流出液總皂苷濃度；C為上樣液中總皂苷濃度。

1.2.5.2梯度洗脫實(shí)驗(yàn)取50mL苦蕎總皂苷樣液，采用1.2.4.1中確定的最佳樣液濃度，1.2.5.1中確定的最佳上樣量進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)，控制流速為2BV/h［10，14］，使其流經(jīng)SP700大孔吸附樹脂柱，達(dá)到上樣終點(diǎn)后，先用2～3BV的蒸餾水洗掉雜質(zhì)及殘留在柱中的提取液，然后以不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，第一洗脫模式為10%（40min）→30%（40min）→50%（40min）→70%（40min）→90%（60min），洗脫流速為2BV/h，洗脫液每5mL收集一管，每一濃度的乙醇用量以洗脫液吸光度減小至恒定時(shí)為限，測(cè)定其皂苷濃度，以確定適合除去雜質(zhì)和洗脫皂苷的乙醇體積分?jǐn)?shù)。根據(jù)第一梯度洗脫模式的結(jié)果調(diào)整第二洗脫模式梯度為：50%（30min）→70%（110min）。洗脫得率以合并后的分段洗脫液中皂苷總量占上樣液中皂苷總量的比例計(jì)。

1.3數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Means±SD）表示，重復(fù)次數(shù)n=3，以Microsoft Excel 2007軟件繪圖，SAS9.2軟件進(jìn)行ANOVA單因素方差分析來檢驗(yàn)平均值之間的顯著性差異，p＜0.05。

2　結(jié)果與分析

2.1樹脂篩選結(jié)果

經(jīng)過測(cè)定，6種大孔樹脂對(duì)苦蕎總皂苷的靜態(tài)吸附容量和解吸得率的分析結(jié)果如圖1所示，數(shù)據(jù)分析顯示，6種樹脂對(duì)苦蕎總皂苷的吸附與解吸能力差異顯著，其中SP700、SP207、SP825對(duì)苦蕎總皂苷的吸附性能較好，SP70、SP700、HP20解吸性能較好。評(píng)價(jià)樹脂性能的優(yōu)劣，要綜合考查其對(duì)該成分的吸附容量和解吸得率，吸附容量反映樹脂對(duì)其的吸附能力，解吸得率則反映該物質(zhì)被吸附之后能否被充分洗脫下來，顯著性分析表明SP700樹脂對(duì)苦蕎總皂苷的吸附與解吸性能均為最好，因此優(yōu)選SP700大孔吸附樹脂作進(jìn)一步研究。

圖1　不同類型樹脂的吸附容量與解吸得率Fig.1　The adsorption capacity and desorption ratio of different macroporous resin

表1　不同濃度樣液下SP700的吸附與解吸性能Table 1　The SP700 adsorption and desorption performance of different concentrations of sample solution

2.2SP700樹脂靜態(tài)吸附-解吸條件優(yōu)化

2.2.1上樣液濃度的確定表1實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，不同樣液濃度下SP700樹脂對(duì)苦蕎總皂苷的吸附與解吸性能差異顯著，樣液中總皂苷的質(zhì)量濃度控制在約0.586mg/mL左右時(shí)，其吸附容量和解吸得率均較好，繼續(xù)增加初始樣液的初始濃度時(shí)，吸附容量和解析得率的變化不明顯。與謝宏等［15］在優(yōu)化人參籽皂苷時(shí)的數(shù)據(jù)趨勢(shì)相吻合，當(dāng)樣液濃度大于0.586mg/mL時(shí)，隨著濃度的繼續(xù)增大，吸附量基本保持穩(wěn)定，這亦與李淑珍等［12］的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象相吻合。這說明雖然樣液濃度的增加有利于提高樹脂的吸附效率，但是隨著濃度的繼續(xù)增加，樣液粘度變大，混濁現(xiàn)象嚴(yán)重，一則容易堵塞樹脂孔隙而影響吸附和解吸［12］，增大在動(dòng)態(tài)吸附過程中上樣的流動(dòng)阻力，不利于操作；二則會(huì)加重對(duì)樹脂的污染，縮短樹脂的使用壽命［10］，結(jié)合不同樣液濃度下的解吸得率，確定實(shí)驗(yàn)用最佳樣液濃度約為0.586mg/mL。

2.2.2吸附平衡時(shí)間的確定經(jīng)過測(cè)定，0.568mg/mL的樣液濃度下，不同的吸附時(shí)間下SP700的吸附情況如圖2所示。

圖2　不同吸附時(shí)間下的SP700吸附量Fig.2　The SP700 adsorption quantity under different adsorption time

由圖2可知，SP700樹脂的吸附容量隨著吸附時(shí)間的增加而增大，在吸附進(jìn)行6h后吸附容量基本穩(wěn)定，不再增加，達(dá)到吸附平衡狀態(tài)，此時(shí)其飽和吸附容量約為（25.241±0.590）mg/g。為了使樹脂充分吸附達(dá)到飽和吸附量，參考丁軻及張若潔［8-10，12］等人的實(shí)驗(yàn)方法，并結(jié)合夜間無法持續(xù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的實(shí)際情況，在靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)中吸附時(shí)間均選擇24h。

2.2.3不同乙醇體積分?jǐn)?shù)下SP700樹脂的解吸性能經(jīng)過測(cè)定，不同乙醇體積分?jǐn)?shù)下SP700樹脂的解吸性能如圖3所示。

圖3　不同乙醇體積分?jǐn)?shù)下SP700樹脂的解吸得率Fig.3　The SP700 desorption ratio of different ethanol volume fraction

由圖3可知，隨乙醇濃度的增大，解吸得率明顯增加，50%以下的乙醇溶液對(duì)SP700大孔樹脂中的總皂苷的解吸得率很小，90%乙醇解吸效果最佳，大量的皂苷類成分在該部位得到富集，可見較高濃度的乙醇溶液有利于苦蕎總皂苷的解吸，因此在靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)中使用90%的乙醇作為解吸劑；但同時(shí)考慮到乙醇濃度越高，洗脫能力越強(qiáng)，隨目標(biāo)成分洗下的雜質(zhì)也越多［16］，且在洗脫過程中易揮發(fā)，因此在動(dòng)態(tài)實(shí)驗(yàn)的梯度洗脫模式中選擇50%、70%作為洗脫梯度。

2.3SP700樹脂的動(dòng)態(tài)洗脫實(shí)驗(yàn)

考慮到實(shí)際樹脂純化是一個(gè)動(dòng)態(tài)的過程，與靜態(tài)吸附、解吸有一定的差異［12］，對(duì)通過靜態(tài)實(shí)驗(yàn)篩選出的SP700樹脂，進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)。

2.3.1上樣流速與洗脫流速的選擇動(dòng)態(tài)實(shí)驗(yàn)中樣品溶液通過樹脂柱的流速過快，則樣品未完成吸附，便隨吸附液流出，造成吸附率減低［7］，上樣流速過慢則會(huì)影響生產(chǎn)效率，延長(zhǎng)生產(chǎn)周期，提高生產(chǎn)成本。因此該動(dòng)態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)中設(shè)定上樣流速為2BV/h，以利于樣品的充分吸附。洗脫過程中，流速太快時(shí)，洗脫劑還未與被吸附的皂苷進(jìn)行充分作用便將其從大孔樹脂的吸附位點(diǎn)上置換出來，影響洗脫效率［7］，而流速太慢則使作業(yè)周期延長(zhǎng)，結(jié)合劉穎等［17］在大孔樹脂純化穿山龍總皂苷的實(shí)驗(yàn)中對(duì)最佳流速篩選的分析，確定動(dòng)態(tài)實(shí)驗(yàn)的洗脫流速為2BV/h。

2.3.2最佳上樣量的確定根據(jù)圖4繪制的泄露曲線確定最佳上樣量，一般來說當(dāng)泄漏率達(dá)到10%左右時(shí)可視為漏點(diǎn)［9］。圖4結(jié)果表明4號(hào)樣品時(shí)樹脂已經(jīng)開始發(fā)生輕微的泄露，隨著上樣量的增加，泄漏量增大，5號(hào)樣品的泄漏率已經(jīng)達(dá)到10%左右，此時(shí)上樣量為15mL，即樹脂比樣液體積為1∶1。當(dāng)動(dòng)態(tài)吸附過程到達(dá)穿透點(diǎn)（即漏點(diǎn)）時(shí)，吸附作用開始減弱，甚至消失，因此選擇合適的上樣量，可以提高樹脂對(duì)樣品的吸附性能。理論上講，上樣量越小，樹脂對(duì)樣品的吸附效果越好，但上樣量太小，樹脂的利用率太低，上樣量太大，樣品得不到有效吸附而被浪費(fèi)［18］，依據(jù)泄露曲線中穿透點(diǎn)的位置，確定最佳上樣量為15mL。

圖4　泄露曲線Fig.4　The dynamic penetration curve

2.3.3動(dòng)態(tài)解吸洗脫結(jié)果如圖5所示，從結(jié)果中可以看出，在第一梯度洗脫模式下，10%、30%、50%的乙醇幾乎未能洗脫皂苷，70%的乙醇洗脫皂苷的得率為72.3%，90%的乙醇洗脫皂苷的得率為13.6%，總的洗脫得率為85.9%。

根據(jù)上述第一梯度洗脫模式的實(shí)驗(yàn)結(jié)果調(diào)整為第二梯度洗脫模式，先用50%的乙醇洗去雜質(zhì)，再用70%的乙醇將皂苷洗脫下來，如圖6所示。經(jīng)測(cè)定，在這種模式下的洗脫得率可以達(dá)到88.9%，取得了較好的洗脫效果。洗脫液蒸干后所得固形物中皂苷含量較提取液固形物中皂苷含量提高了約2倍，確定采用第二種梯度洗脫方式。

圖5　第一梯度洗脫模式Fig.5　The first gradient elution curves in dynamic state

圖6　第二梯度洗脫模式Fig.6　The second gradient elution curves in dynamic state

3　結(jié)論

通過靜態(tài)吸附解吸實(shí)驗(yàn)篩選出適合分離純化苦蕎總皂苷的大孔吸附樹脂SP700，其飽和吸附量為（25.241±0.590）mg皂苷/g樹脂。研究SP700對(duì)苦蕎總皂苷的靜態(tài)及動(dòng)態(tài)吸附性能，確定SP700型大孔樹脂分離純化苦蕎總皂苷的最佳工藝條件為：最佳上樣濃度約0.586mg/mL，上樣流速2BV/h，樹脂比樣液體積為1∶1，動(dòng)態(tài)洗脫實(shí)驗(yàn)中，以體積分?jǐn)?shù)分別為50%和70%的乙醇溶液進(jìn)行分段洗脫，洗脫流速為2BV/h，用量為2～3BV，洗脫得率最高可達(dá)到88.9%，洗脫液蒸干后所得固形物中總皂苷含量較提取液固形物中總皂苷含量提高了約2倍，SP700樹脂分離純化苦蕎總皂苷的效果較好。

［1］Krko?ková B，Mrázová Z.Prophylactic components of buckwheat［J］.Food Research International，2005，38（5）：561-568.

［2］王吉，史桂英，袁耀宗，等.人參皂甙Rg3在體外對(duì)胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡的影響［J］.上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2009，29（11）：1336-1340.

［3］Chiang L C，Ng L T，Liu L T，et al.Cytotoxicity and antihepatitis B virus activities of saik-osaponins from bupleurum speies［J］.Planta Med，2003，69（8）：705-709.

［4］張榮，劉詠芳.人參皂甙Rg1對(duì)大鼠急性心肌梗死后血管再生及心功能的影響［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2009，38（7）：805-807.

［5］苗明三，孫艷紅，史晶晶，等.玉米須總皂苷對(duì)糖尿病模型大鼠生化指標(biāo)的影響［J］.中藥藥理與臨床，2006，22（3，4）：80-81.

［6］Norberg A，Hoa NK，Liepinsh E，et al.A novel insulinreleasing substance，phanoside，from the plant Gynostemma pentaphyllum［J］.Biological Chemistry，2004，279（40）：41361-41367.

［7］張立華，張?jiān)?，安春艷，等.石榴皮提取物的大孔樹脂純化及其抗氧化性能［J］.農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào)，2009，25（1）：142-147.

［8］張若潔，徐永霞，王魯峰，等.大孔樹脂純化蘆筍總皂苷的工藝研究［J］.中草藥，2012，43（6）：1097-1100.

［9］張小飛，劉潔瓊.大孔樹脂分離純化穿山龍薯蕷皂苷的工藝實(shí)驗(yàn)研究［J］.中南藥學(xué)，2012，10（5）：321-325.

［10］丁軻，崔瑩，陸晶晶，等.SP700大孔樹脂純化酸棗仁中三萜總皂苷的研究［J］.離子交換與吸附，2011，27（1）：33-42.

［11］黃海燕.苦蕎黃酮與皂苷的研究［D］.無錫：江南大學(xué)，2008.

［12］李淑珍，李進(jìn)，楊志江，等.大孔樹脂分離純化黑果枸杞總黃酮的研究［J］.食品科學(xué)，2009，30（1）：19-24.

［13］胡婉珊，郭琳博，李宇華，等.磨盤柿中多酚類物質(zhì)的提取及大孔樹脂純化工藝研究［J］.中國(guó)食品學(xué)報(bào)，2011，11（1）：112-118.

［14］韓本勇.仙人掌總皂苷提取純化工藝的研究［D］.昆明：昆明理工大學(xué)，2008.

［15］謝宏，劉鏡，宋宸.大孔吸附樹脂提純?nèi)藚⒆言碥展に噧?yōu)化［J］.食品工業(yè)，2014，35（3）：176-179.

［16］吳業(yè)飛，劉仲華.大孔吸附樹脂對(duì)雪菊黃酮的分離純化工藝研究［J］.湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014（9）：62-65.

［17］劉穎，劉樹民，于棟華，等.大孔樹脂純化穿山龍總皂苷的工藝優(yōu)化［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2011，30（5）：635-637.

［18］吳紹康，沈先榮，梅威威，等.大孔吸附樹脂分離純化枇杷花總黃酮工藝研究［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2014，32（9）：2185-2188.

Study on separation and purification of total saponins from tartary buckwheat with macroporous resin

ZHI Xiu-juan1，2，MA Ting-jun2，DING Ke2，LI Dong1，*
（1.College of Engineering，China Agriculture University，Beijing 100083，China；2.Faculty of Food Science and Engineering，Beijing University of Agriculture，Beijing Key Laboratory of Agricultural Product Detection and Control of Spoilage Organisms and Pesticide Residue，Beijing Laboratory of Food Quality and Safety，Beijing 102206，China）

In order to optimize process condition of separation and purification of total saponins from tartary buckwheat with macroporous resin.The appropriate SP700 resin was choosed，which the saturated adsorption capacity was up to（25.241±0.590）mg saponins/g resin through the static adsorption and desorption test.The influence of sample liquid concentration，adsorption time on the adsorption capacity，and the effect of ethanol volume fraction on the yield of desorption were studied in the static test.And in the dynamic test，the optimal purification conditions of using SP700 resin to absorb and purify total saponins from tartary buckwheat were as follows：the best concentration of sample solution 0.586mg/mL，velocity 2BV/h，the ratio of resin and sample solution 1∶1，in the dynamic elution experiment，segmented elution was carried with 50%and 70%ethanol solution respectively elution velocity 2BV/h，dosage 2～3BV，elution rate was up to 88.9%，the content of saponins in eluent was 2 fold as that in sample solution.

tartary buckwheat；saponin；separation and purification；macroporous resin

TS201.2

B

1002-0306（2015）12-0226-05

10.13386/j.issn1002-0306.2015.12.039

2014－11－18

智秀娟（1975-），女，在讀博士研究生，講師，研究方向：農(nóng)產(chǎn)品加工及貯藏工程。

李棟（1973-），男，教授，研究方向：農(nóng)產(chǎn)品加工及貯藏工程。

國(guó)家燕麥?zhǔn)w麥產(chǎn)業(yè)體系建設(shè)專項(xiàng)資助（CARS-08-D-2）。