徐燈耿麗麗李寧劉曉輝盧凡張杰

（1.湖北工業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境學(xué)院，武漢 450068；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所 植物病蟲害生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100193）

飼喂Bt水稻的褐家鼠腸道中cry1Ab/Ac基因和蛋白的殘留檢測(cè)

徐燈1，2耿麗麗2李寧2劉曉輝2盧凡1張杰2

（1.湖北工業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境學(xué)院，武漢 450068；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所 植物病蟲害生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100193）

分別用含有轉(zhuǎn)cry1Ab/Ac基因水稻和親本水稻的飼料飼喂野生褐家鼠，旨在檢測(cè)外源cry1Ab/Ac基因和蛋白在褐家鼠雌鼠雄鼠空腸、回腸、盲腸中的殘留情況。檢測(cè)結(jié)果顯示，飼喂轉(zhuǎn)基因水稻50 d和110 d的雌雄褐家鼠腸道3個(gè)部位中沒(méi)有檢測(cè)到cry1Ab/Ac基因殘留，在體外消化實(shí)驗(yàn)中過(guò)量外源基因全長(zhǎng)及片段在4 h后開(kāi)始逐步降解，約12 h全部降解。3個(gè)腸道部位提取的蛋白進(jìn)行ELISA和Western blot分析，結(jié)果顯示腸道內(nèi)容物中無(wú)Cry1Ab/Ac蛋白殘留。因此外源基因和蛋白不會(huì)在飼喂了轉(zhuǎn)基因水稻的野生褐家鼠腸道中殘留。

轉(zhuǎn)基因水稻；褐家鼠；基因、蛋白殘留；體外消化

全球轉(zhuǎn)基因作物的商業(yè)化和大規(guī)模種植在一定程度上緩解了糧食緊缺問(wèn)題，給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶了巨大效益［1］，轉(zhuǎn)基因作物實(shí)際運(yùn)用過(guò)程中還需兼顧其安全性，以保證轉(zhuǎn)基因作物不會(huì)對(duì)生態(tài)環(huán)境及其他動(dòng)植物產(chǎn)生非預(yù)期效應(yīng)。水稻是我國(guó)重要的糧食作物，然而蟲害的發(fā)生嚴(yán)重制約我國(guó)水稻經(jīng)濟(jì)發(fā)展，其中水稻螟蟲危害占總蟲害發(fā)生面積一半以上，是危害水稻并導(dǎo)致水稻減產(chǎn)的重要原因［2］。轉(zhuǎn)cry1Ab/Ac基因水稻（TT51）是我國(guó)華中農(nóng)業(yè)大學(xué)培育的具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的轉(zhuǎn)基因水稻品種，該水稻對(duì)二化螟、三化螟、稻縱卷葉螟等害蟲具有較強(qiáng)抗性［3］，于2009年獲得農(nóng)業(yè)部頒發(fā)的轉(zhuǎn)基因生物生產(chǎn)應(yīng)用安全證書［4］，并在2014年續(xù)期成功，更加有助于對(duì)其進(jìn)一步商業(yè)化種植及推廣。

轉(zhuǎn)基因作物作為飼料對(duì)動(dòng)物的影響是轉(zhuǎn)基因作物安全性評(píng)價(jià)的重要內(nèi)容。轉(zhuǎn)基因作物經(jīng)動(dòng)物取食后，在動(dòng)物腸道中的消化降解、殘留情況可能會(huì)間接影響到動(dòng)物體的發(fā)育，外源基因及蛋白也可能存在向重要器官和血液中轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)；如果動(dòng)物體中存在外源基因和蛋白殘留，食物鏈下一營(yíng)養(yǎng)級(jí)也會(huì)暴露于低劑量Bt蛋白。為評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)基因水稻對(duì)嚙齒類動(dòng)物的影響，本研究以褐家鼠作為野生嚙齒類動(dòng)物的典型代表進(jìn)行研究，褐家鼠個(gè)體大、數(shù)量多、分布廣、繁殖力強(qiáng)，其取食活動(dòng)容易造成糧食污染嚴(yán)重威脅到農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、食品工業(yè)及人類健康安全［5］。鼠類作為目前世界上種類和數(shù)量最多的哺乳動(dòng)物是生態(tài)環(huán)境中食物鏈的中間環(huán)節(jié)，能為次級(jí)消費(fèi)者提供食物來(lái)源，在生態(tài)系統(tǒng)的物質(zhì)循環(huán)和能量流動(dòng)中發(fā)揮著重要作用，一定條件下其取食活動(dòng)也能夠?yàn)榉N子的傳播和萌發(fā)提供條件［6］，而且鼠類本身代謝循環(huán)快，因此在生態(tài)系統(tǒng)養(yǎng)分循環(huán)中起到重要作用，對(duì)于維持生態(tài)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能的穩(wěn)定性具有重要意義［7］。目前以實(shí)驗(yàn)用鼠作為轉(zhuǎn)基因生物安全評(píng)價(jià)方面的研究主要從急慢性毒理、免疫、生殖系統(tǒng)方面進(jìn)行評(píng)價(jià)，大部分研究結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)基因作物并不會(huì)對(duì)動(dòng)物體器官組織、生理指標(biāo)、生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生影響［8］，雖然有實(shí)驗(yàn)顯示大鼠在血生化、血常規(guī)指標(biāo)中出現(xiàn)了一些差異，但所有指標(biāo)均在該年齡段該品系大鼠的正常范圍之內(nèi)［9，10］。無(wú)論是轉(zhuǎn)基因作物中外源Bt蛋白［11］或是異源表達(dá)的Bt蛋白［12］都不會(huì)對(duì)鼠產(chǎn)生致敏性。迄今國(guó)內(nèi)外尚無(wú)轉(zhuǎn)cry1Ab/Ac基因水稻中外源基因及蛋白在野生褐家鼠體內(nèi)殘留研究的報(bào)道。褐家鼠其生存狀況與常規(guī)實(shí)驗(yàn)用鼠相比更復(fù)雜，取食及消化規(guī)律也有所不同。為進(jìn)一步豐富轉(zhuǎn)基因水稻TT51飼用安全性評(píng)價(jià)，本研究以飼喂轉(zhuǎn)Bt基因水稻50 d和110 d的褐家鼠為材料，采用小片段全覆蓋PCR檢測(cè)的策略，分析野生褐家鼠腸道內(nèi)容物中cry1Ab/Ac基因的殘留情況，同時(shí)采用ELISA和Western blot兩種方法檢測(cè)蛋白殘留。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料 供試水稻品種為華恢1號(hào)轉(zhuǎn)cry1Ab/Ac基因水稻，親本明恢63為對(duì)照組，由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)提供。

1.1.2 試劑 QIAamp Fast DNA Stool Mini Kit購(gòu)自QIGEN公司，QualiPlate試劑盒購(gòu)自Envirologix公司；PVDF膜購(gòu)自Promega公司；鼠源一抗由本實(shí)驗(yàn)室制備，二抗鼠抗羊lgG HRP購(gòu)自北京天德悅生物科技公司；胃蛋白酶（3 000 U/mg）購(gòu)自Sigma公司；PCR純化試劑盒，購(gòu)自Axygen公司。

1.2 方法

1.2.1 褐家鼠飼喂 野生褐家鼠分成4組，其中2組為雄鼠，每組12只；雌鼠2組，每組14只。分別有1組雄鼠和1組雌鼠飼喂轉(zhuǎn)基因水稻，另外1組雄鼠和1組雌鼠飼喂親本水稻。分組方式采用同一窩后代同性兩只鼠分成兩組的方式，分別飼喂轉(zhuǎn)基因水稻和親本水稻。在50 d和110 d分別從每個(gè)處理中取出褐家鼠，解剖褐家鼠，分別取胃、空腸、回腸、盲腸部位置于離心管中液氮冷凍保存。

1.2.2 褐家鼠腸道中外源基因殘留檢測(cè) 用QIAamp Fast DNA Stool Mini Kit試劑盒提取褐家鼠腸道內(nèi)容物DNA，按照說(shuō)明書中的方法提取，方法稍作改動(dòng)，200 mg腸道內(nèi)容物加入1 mL Inhibit Ex Buffer混勻，去除雜質(zhì)和PCR干擾物，加入蛋白酶K去除體系中的蛋白，用無(wú)水乙醇沉淀DNA，過(guò)QIAamp spin柱洗脫后加入200 μL 超純水。DNA提取后采用DNA定量?jī)x（Thermo公司）測(cè)定DNA樣品的濃度，并以O(shè)D260/280nm檢測(cè)DNA的純度。DNA樣品用超純水稀釋至40-50 ng/μL，-20℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

分別以cry1Ab/Ac基因以及水稻內(nèi)源蔗糖磷酸合酶基因SPS（sucrose phosphate synthase gene，U33175）［13］和 淀粉分 支 酶 基 因RBE4（starch branching enzyme gene，EF055878）［14］、褐家鼠內(nèi)源基因?yàn)镚APDH為對(duì)照設(shè)計(jì)引物25對(duì)，其中包括cry1Ab/Ac基因全長(zhǎng)引物1對(duì)和100 bp小片段引物9對(duì)、擴(kuò)增SPS基因100 bp小片段引物11對(duì)、擴(kuò)增RBE4基因全長(zhǎng)引物1對(duì)和100 bp小片段引物2對(duì)、擴(kuò)增GAPDH基因引物1對(duì)，除鼠內(nèi)源基因（表1）以外其他引物序列及擴(kuò)增長(zhǎng)度參照文獻(xiàn)［15］，所有引物由生工生物工程公司合成。

表1 引物序列及擴(kuò)增產(chǎn)物

擴(kuò)增cry1Ab/Ac基因PCR反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性5 min；94℃ 30 s，58℃ 30 s，72℃ 1 min 45 s，30個(gè)循環(huán)；72℃ 10 min。擴(kuò)增SPS基因PCR反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性5 min；94℃ 30 s，56℃30 s，72℃ 20 s，30個(gè)循環(huán)；72℃ 10 min。擴(kuò)增RBE4基因PCR反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性5 min；94℃ 30 s，54℃ 30 s，72℃ 30 s，30個(gè)循環(huán)；72℃ 10 min。擴(kuò)增GAPDH基因PCR反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性5 min；94℃ 30 s，59℃ 30 s，72℃ 20 s，30個(gè)循環(huán)；72℃ 10 min。PCR產(chǎn)物4℃保存，PCR反應(yīng)體系為模板1 μL，上下游引物各0.4 μL，Taq Mix 10 μL，超純水補(bǔ)至20 μL，設(shè)置水空白對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、待測(cè)樣品，每個(gè)樣品做3個(gè)重復(fù)，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。

1.2.3 體外消化cry1Ab/Ac基因模擬實(shí)驗(yàn) 體外消化模擬實(shí)驗(yàn)采用添加腸道內(nèi)容物和模擬胃液環(huán)境兩種方法。

1.2.3.1 添加內(nèi)容物方法 cry1Ab/Ac基因50 ng和水稻基因組10 μg加褐家鼠腸道內(nèi)容物5 mg以及對(duì)照組cry1Ab/Ac基因50 ng和水稻基因組10 μg分別在37℃溫浴0、4、8和12 h，溫浴后的產(chǎn)物用QIAamp DNA Stool Mini Kit試劑盒提取其中的DNA，DNA產(chǎn)物用根據(jù)cry1Ab/Ac基因所設(shè)計(jì)的10對(duì)引物檢測(cè)cry1Ab/Ac基因片段。

1.2.3.2 模擬胃液方法 同時(shí)將腸道內(nèi)容物替換成模擬胃液0.5 μL［16］（0.2 g NaCl，87.7 mg胃蛋白酶，鹽酸調(diào)pH1.2，加水至100 mL），分別在37℃溫浴0、4、8和12 h，混合反應(yīng)后的產(chǎn)物用PCR純化劑盒（Axygen公司）純化，PCR反應(yīng)條件同1.2.2，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。

1.2.4 褐家鼠腸道中的外源蛋白殘留檢測(cè) ELISA方法檢測(cè)褐家鼠腸道內(nèi)容物中的外源蛋白，檢測(cè)前用BCA方法定量總蛋白，試劑盒購(gòu)自北京艾德萊生物科技有限公司。Cry1Ab/Ac蛋白殘留檢測(cè)采用ELISA雙抗夾心法，檢測(cè)結(jié)果重復(fù)3次，QualiPlate試劑盒購(gòu)自美國(guó)Envirologix公司，方法按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，其中放置溫度均改為37℃，檢測(cè)結(jié)果用Western blot驗(yàn)證。Western blot方法如下：待測(cè)樣經(jīng)過(guò)SDS-PAGE分離后轉(zhuǎn)印至PVDF 膜上，將膜用TBS-T 溶液漂洗后用20 mL 5%脫脂奶粉封閉2 h，加入含一抗（0.5 μL）的TBS-T漂洗液15 mL，4℃孵育過(guò)夜或室溫1 h，加入含鼠抗兔IgG二抗（1 μL）的TBS-T漂洗液15 mL，室溫1 h，每步結(jié)束后漂洗膜3次，每次10 min，最后膜用顯色液顯色后拍照。

2 結(jié)果

2.1 褐家鼠腸道中外源基因殘留檢測(cè)

提取飼喂轉(zhuǎn)基因水稻及非轉(zhuǎn)基因水稻雌雄褐家鼠腸道內(nèi)容物總DNA，DNA定量?jī)x檢測(cè)DNA的純度（OD260/280nm）均在1.7-1.9，將總DNA樣品用超純水稀釋至40-50 ng/μL，每個(gè)樣品取1.0 μL用于檢測(cè)。PCR檢測(cè)的目標(biāo)基因包括cry1Ab/Ac基因全長(zhǎng)及100 bp小片段、水稻內(nèi)源基因SPS及REB4和褐家鼠內(nèi)源GAPDH基因，共25對(duì)引物，瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果（圖1-A和1-B）顯示，僅能擴(kuò)增出10個(gè)片段的相應(yīng)正對(duì)照，在腸道內(nèi)容物總DNA中，均未檢測(cè)到cry1Ab/Ac基因全長(zhǎng)和100 bp個(gè)小片段，其他擴(kuò)增小片段的8對(duì)引物也未獲得目的條帶（電泳圖未提供）。同樣，在空腸、回腸、盲腸內(nèi)容物提取的總DNA中，也檢測(cè)不到水稻內(nèi)源基因SPS及REB4（圖1-C、1-D和1-E）；但所有的內(nèi)容物總DNA中都可以檢測(cè)到褐家鼠內(nèi)源GAPDH基因（圖1-F）。

2.2 體外消化cry1Ab/Ac基因模擬實(shí)驗(yàn)結(jié)果

通過(guò)將過(guò)量cry1Ab/Ac基因與褐家鼠腸道內(nèi)容物孵育，分析外源基因體外降解規(guī)律。不加腸道內(nèi)容物對(duì)照處理中在12 h仍能擴(kuò)增出全長(zhǎng)cry1Ab/Ac基因；然而，cry1Ab/Ac基因在加入了腸道內(nèi)容物后，4 h開(kāi)始逐漸降解，12 h后檢測(cè)不到全長(zhǎng)cry1Ab/Ac基因（圖2-A）；但是在4 h和8 h時(shí)還能檢測(cè)出cry1Ab/Ac基因9個(gè)100 bp小片段，而到達(dá)12 h時(shí)，9個(gè)小片段都無(wú)法檢測(cè)到（圖2-B）。模擬胃液中，37℃ 4 h，cry1Ab/Ac基因已經(jīng)完全降解，同樣，cry1Ab/Ac基因9個(gè)100 bp小片段在4 h時(shí)完全降解（圖3）。

圖1 褐家鼠腸道內(nèi)容物提取的總DNA中cry1Ab/Ac基因的PCR檢測(cè)結(jié)果

圖2 添加內(nèi)容物體外消化cry1Ab/Ac基因全長(zhǎng)（A）及片段（B）

圖3 胃液體外消化cry1Ab/Ac基因全長(zhǎng)（A）及片段（B）

2.3 褐家鼠腸道中Cry1Ab/Ac蛋白殘留檢測(cè)

先用BCA法對(duì)提取的蛋白進(jìn)行定量，取20 μg可溶性總蛋白進(jìn)行ELISA檢測(cè)。用雙抗夾心法對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果（表2）顯示，50 d和110 d轉(zhuǎn)基因和非轉(zhuǎn)基因組中盲腸和直腸樣品50TW-M、 50TK-M、50TH-M、50TM-M、50TW-F、50TK-F、50TH-F、50TM-F、110CH-F、110CM-F、110TWM、110TH-M、110TM-M、110TW-F、110TH-F、110TM-F出現(xiàn)比較明顯的顯色反應(yīng)，檢測(cè)值表明其中可能存在Cry1Ab/Ac蛋白殘留。

對(duì)ELISA檢測(cè)結(jié)果中產(chǎn)生顏色反應(yīng)的樣品進(jìn)行SDS-PAGE和Western blot分 析，SDS-PAGE結(jié)果（圖4-A和圖5-A）顯示，在60 kD處50TM-M、110TM-F樣品存在疑似條帶，但Western blot分析結(jié)果表明這兩個(gè)樣品中并不存在Cry1Ab/Ac蛋白。

3 討論

轉(zhuǎn)基因作物中表達(dá)的外源蛋白在動(dòng)物腸道中的殘留是轉(zhuǎn)基因作物安全性評(píng)價(jià)的重要環(huán)節(jié)，Bt蛋白不會(huì)破壞嚙齒類動(dòng)物的腸道是因?yàn)椴溉閯?dòng)物腸道中沒(méi)有Bt蛋白的結(jié)合位點(diǎn)，但如果腸道中還存在蛋白殘留可能會(huì)對(duì)宿主產(chǎn)生致敏性［17］，外源基因殘留也可能存在向動(dòng)物體其他部位轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)，需要對(duì)轉(zhuǎn)Bt基因水稻中外源成分的降解情況進(jìn)行評(píng)估。

表2 ELISA檢測(cè)鼠腸道中Cry1Ab/Ac蛋白殘留結(jié)果

圖4 50 d轉(zhuǎn)基因和非轉(zhuǎn)基因飼喂褐家鼠腸道內(nèi)容物總蛋白的SDS-PAGE分析（A）及Western blot分析（B）

本研究采用多對(duì)引物同時(shí)對(duì)cry1Ab/Ac基因全長(zhǎng)及基因碎片進(jìn)行檢測(cè)，盡可能確保能完整覆蓋到全長(zhǎng)外源基因片段，在褐家鼠腸道內(nèi)容物中未檢測(cè)到cry1Ab/Ac基因的殘留，也有研究表明在飼喂轉(zhuǎn)基因大豆的嚙齒類動(dòng)物的兔體內(nèi)組織中檢測(cè)不到外源基因［18］。為了進(jìn)一步驗(yàn)證動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中外源基因在褐家鼠腸道中的降解情況，本研究進(jìn)行了體外模擬實(shí)驗(yàn)，將過(guò)量cry1Ab/Ac基因與褐家鼠腸道內(nèi)容物混合孵育，結(jié)果表明全長(zhǎng)cry1Ab/Ac基因從4 h開(kāi)始逐步降解，12 h時(shí)PCR擴(kuò)增為陰性，而全長(zhǎng)cry1Ab/Ac基因片段與肉雞腸道內(nèi)容物孵育時(shí)4 h后就檢測(cè)不到基因片段［15］。用9對(duì)擴(kuò)增100 bp小片段引物檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)，與全長(zhǎng)基因有相同的降解規(guī)律，12 h完全降解。胃液中外源基因則在更短的時(shí)間內(nèi)消化降解。

圖5 110 d轉(zhuǎn)基因和非轉(zhuǎn)基因飼喂褐家鼠腸道內(nèi)容物總蛋白的SDS-PAGE分析（A）及Western blot分析（B）

在ELISA檢測(cè)結(jié)果中一些非轉(zhuǎn)基因樣品也出現(xiàn)了明顯顏色反應(yīng)，原因是褐家鼠腸道內(nèi)容物中一些外源或內(nèi)源的污染物可能會(huì)引起顯色反應(yīng)，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生明顯影響，Chowdhury［19］和Einspanier［20］的研究結(jié)果也出現(xiàn)這樣的現(xiàn)象。進(jìn)一步Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)這些樣品中并沒(méi)有Bt蛋白殘留，與Lutz等［21］的研究結(jié)果一致。很多研究表明Bt蛋白容易在鼠腸道中消化從而不會(huì)對(duì)腸道組織產(chǎn)生影響［22］，更不會(huì)引起動(dòng)物體過(guò)敏反應(yīng)［12］，在動(dòng)物體吸收食物營(yíng)養(yǎng)成分過(guò)程中，動(dòng)物的血液［23］、內(nèi)臟組織［24，25］、肌肉組織［26］中也未檢測(cè)到外源蛋白的殘留。

上述研究充分說(shuō)明轉(zhuǎn)基因水稻中的外源基因和蛋白在褐家鼠腸道內(nèi)容物中無(wú)殘留，當(dāng)然還可以從免疫毒理學(xué)、生長(zhǎng)發(fā)育、繁殖性能等方面研究對(duì)轉(zhuǎn)Bt基因?qū)X類動(dòng)物的影響以全面評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)基因作物的安全性。

4 結(jié)論

本研究以野生褐家鼠為模型，分析了飼喂轉(zhuǎn)Bt水稻后雌雄褐家鼠腸道中的外源基因和蛋白的殘留情況。DNA和蛋白水平的分析表明，褐家鼠腸道內(nèi)容物中沒(méi)有cry1Ab/Ac基因和蛋白殘留，豐富了轉(zhuǎn)Bt水稻飼喂安全性評(píng)價(jià)體系。

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（責(zé)任編輯 馬鑫）

The Residue Detection of cry1Ab/Ac Gene and Protein in the Gut of Rattus norvegicus Feeding Transgenic Rice

Xu Deng1，2Geng Lili2Li Ning2Liu Xiaohui2Lu Fan1Zhang Jie2
（1. School of Resource & Environmental Engineering，Hubei University of Technology，Wuhan 450068；2. State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests，Institute of Plant Protection，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Beijing 100193）

The exogenous cry1Ab/Ac gene and protein residues in the jejunum， ileum， cecum of Rattus norvegicus feeding transgenic rice and parent rice were detected. The testing results showed that there were no residues of cry1Ab/Ac gene in 3 intestinal parts of R. norvegicus fed transgenic rice for 50 and 110 d， and overall length or fragment of exogenous cry1Ab/Ac gene gradually degraded after 4 h， and completely at 12 h in vitro. No residues of Cry1Ab/Ac protein were detected in contents of the above 3 parts of R. norvegicus using ELISA and Western blot method. In conclusion， the exogenous gene and protein of the transgenic rice were not remained in the intestines of R. norvegicus.

transgenic rice；Rattus norvegicus；gene and protein residues；digestion in vitro

10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.12.019

2015-04-26

轉(zhuǎn)基因生物新品種培育重大專項(xiàng)（2012ZX08011001）

徐燈，男，碩士，研究方向：轉(zhuǎn)基因生物安全評(píng)價(jià)；E-mail：xudg1230@163.com

張杰，男，博士，研究員，研究方向：生防微生物功能基因研究；E-mail：jzhang@ippcaas.cn盧凡，男，博士，教授，研究方向：藻類生物技術(shù)；E-mail：lulab99@gmail.com