王 輝楊樹東王樂奇張 力

（1 長春市食品藥品檢驗所，吉林 長春 130012；2 長春師范大學中心實驗室，吉林 長春 130032；3 吉林省鹿王制藥股份有限公司，吉林 吉林 132013）

HPLC法測定接骨定痛丸中士地寧的含量

王 輝1楊樹東1王樂奇2張 力3

（1 長春市食品藥品檢驗所，吉林 長春 130012；2 長春師范大學中心實驗室，吉林 長春 130032；3 吉林省鹿王制藥股份有限公司，吉林 吉林 132013）

目的 建立了HPLC法測定接骨定痛丸中士地寧的含量。方法 采用Aglilent SB C18色譜柱；柱溫：30 ℃；檢測波長為：260 nm；流動相A：0.01 mol/L庚烷磺酸鈉與0.02 mol/L磷酸二氫鉀等量混合溶液（用10%磷酸調(diào)節(jié)pH值2.8），B：乙腈，A∶B（21∶79），流速：1.0 mL/min。結(jié)果 士地寧標準溶液的峰面積與樣品質(zhì)量濃度在196.8～426.4 ng（r=1.000）范圍內(nèi)呈良好的線性關系,方法的檢出限為48 ng/mL。平均回收率為98.6%（n=6）（RSD=1.8%）。結(jié)論 本方法經(jīng)方法學驗證可用于接骨定痛丸中士的寧的含量測定。

HPLC；士地寧；接骨定痛丸

士地寧是馬錢子中的一種生物堿，馬錢子始載于《本草綱目》，系《中國藥典》收載品種[1-2]。士地寧是一種劇毒成分，也是具有生理活性的成分。用于偏癱、癱瘓及因注射鏈霉素引起的骨骼肌松弛、弱視癥等。試用于白細胞減少癥和再生不良性貧血，有一定的療效。近年研究發(fā)現(xiàn)士地寧對脊髓、延髓、大腦皮質(zhì)等神經(jīng)系統(tǒng)及消化系統(tǒng)有一定的藥理作用[3]。過量可使中樞興奮作用增強，導致全身骨骼肌攣縮，以至發(fā)生強直性驚厥。本文采用HPLC法測定接骨定痛丸中士地寧的含量，是控制其質(zhì)量的重要環(huán)節(jié)。

圖1　系統(tǒng)適用性試驗的HPLC色譜圖

1　儀器與試藥

HPLC1100（安捷倫）：二元泵，紫外檢測器，自動進樣器；士地寧對照品（中國藥品生物制品檢定所 批號：110705～200306，純度為97%）；樣品由吉林省德惠市萬寶鎮(zhèn)骨傷醫(yī)院 提供批號：070901，070902，070903 （規(guī)格每丸9 g）；乙腈為色譜醇，庚烷磺酸鈉、磷酸二氫鉀為分析純；實驗用水為超純水。

2　方法與結(jié)果

2.1對照品溶液及樣品溶液的制備

2.1.1士地寧對照品溶液：精密稱取士的寧對照品10 mg，置25 mL量瓶中，加三氯甲烷適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取3 mL，置25 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得（每1 mL中含士的寧0.048 mg）。

2.1.2樣品溶液制備：取重量差異項下的本品適量，剪碎，取約11 g，精密稱定，加濃氨試液3 mL混勻，放置30 min，精密加入三氯甲烷50 mL，密塞，稱定重量，置水浴中回流提取2 h，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補足減失的重量，搖勻，精密量取續(xù)濾液20 mL，置分液漏斗中，用硫酸溶液（3→100）提取5次，每次15 mL，合并硫酸液，加濃氨液調(diào)節(jié)pH值至9～10，用三氯甲烷提取5次每次20 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣用甲醇溶解后，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.1.3陰性對照樣品溶液的制備：按處方制備不含馬錢子粉的陰性對照樣品，按樣品溶液制備方法制成相應的陰性樣品溶液，精密量取溶液10 μL，注入液相色譜儀，色譜圖無相應的吸收峰。

2.1.4溶劑空白試驗：取含量測定項下所用的溶劑甲醇，按正文色譜條件測定。測定結(jié)果，在與士的寧相應的保留時間附近無干擾峰檢出。

2.2色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗。色譜柱：Aglilent SB C18柱；流動相：A：0.01 mol/L庚烷磺酸鈉與0.02 mol/L磷酸二氫鉀等量混合溶液（用10%磷酸調(diào)節(jié)pH值2.8），B：乙腈，A∶B（21∶79）為流動相；檢測波長為260 nm；柱溫為30 ℃；流速為1.0 mL/min；進樣量10 μL。理論板數(shù)按士的寧峰計算應不低于3000。士的寧與相鄰雜質(zhì)峰分離度＞1.5。在此條件下，溶劑空白、陰性對照、對照品和樣品色譜圖見圖1。

2.3線性關系考察：精密稱取士的寧對照品10 mg，25 mL量瓶中，加三氯甲烷適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取3 mL，置25 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得，作為對照品溶液（每1 mL中含士的寧0.048 mg）。精密吸取2.0、5.0、7.0、10、15、20 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積為縱坐標，進樣量（μg）為橫坐標，測得回歸方程為Y=3549.6X+10.362，相關系數(shù)r=1.000（n=6）。結(jié)果表明，士的寧進樣量在196.8～426.4 ng范圍內(nèi)，具有良好的線性關系。

2.4精密度試驗：精密量取系統(tǒng)適用性試驗項下供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀，連續(xù)測定6次，RSD為1.1%，重復性試驗結(jié)果結(jié)果表明，本法精密度良好。

2.5最低檢測限測定：按信噪比等于3（S/N=3），作為最低檢測限，測得接骨定痛丸中士地寧的檢測限為48 ng/mL。

2.6重現(xiàn)性試驗：取同一批號的樣品，精密稱定6份，分別依法提取制成供試液。按正文方法測定其含量。RSD為0.7%，重復性試驗結(jié)果結(jié)果表明，本法精密度良好。

2.7穩(wěn)定性試驗：照系統(tǒng)適用性試驗項下制備供試品溶液，每隔2 h進樣測定一次，共測定12 h，計算含量，RSD為1.4%，穩(wěn)定性試驗結(jié)果，供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8供試品回收率試驗：精密稱取批號為070901（已知含量0.11291 mg/g）的樣品6份，每份約10 g，分別精密加入對照品貯備液（0.3735 mg/mL）3.0 mL按正文方法制備及測定，計算加樣回收率，測得6次平均回收率為98.6%，RSD為1.8%，試驗結(jié)果表明：供試品回收率較高，RSD在規(guī)定范圍內(nèi)。

2.9樣品的士地寧測定：取樣品10批，按正文方法進行測定，記錄色譜圖至柱峰保留時間的2倍，計算十批含量，RSD為1.2%。

3　討 論

馬錢子有較明顯的療效，但因馬錢子治療劑量與中毒劑量較接近，不良反應較多[4-5]，限制馬錢子的廣泛應用，目前對馬錢子及提取物中主要成分的測定進行了廣泛的研究[6-8]，同時對復方藥中馬錢子也進行了研究[9-10]，研究證明用試劑三氯甲烷[11]，采用加熱回流法提取完全[6]。本文采用，加熱回流法提取，應用HPLC進行測定接骨定痛丸中士地寧的含量，實驗表明色譜條件和系統(tǒng)適應性實驗均符合，本方法靈敏度高，方便可行，可作為接骨定痛丸中馬錢子的士地寧的含量測定方法，即控制其毒性和保證療效。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京:化學工業(yè)出版社,2005: 34-35.

[2] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京:中國醫(yī)藥科技出版社, 2010:47-48.

[3] 屈艷格,陳軍,蔡寶昌.士的寧的研究進展[J].中國實驗方劑學雜志, 2011,17(24):247-251.

[4] 賈旋旋,李文,李俊松,等.馬錢子的毒性研究進展[J].中國中藥雜志,2009,34(18):2396-2399.

[5] 黃喜菇,曹冬.馬錢子研究進展[J].上海中醫(yī)藥雜志,2005,39(1):62-65.

[6] 管慶霞,王錄娜,李永吉,等.馬錢子不同提取方法的比較研究[J].中華中醫(yī)藥學刊,2009,27(4):815-816.

[7] 金紅寧,田金改,張莉,等.反相HPLC法測定馬錢子中士地寧和馬錢子堿的含量[J].中國藥事,2005,19(4):219-221.

[8] 刁國蘭,張貴華,馬云淑,等.HPLC法測馬錢子及其提取物中馬錢子堿和士地寧的含量[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2013,20(12):51-53.

[9] 楊艷嬌,劉雅敏,白月明,等.HPLC法測定骨痹舒片中士地寧和馬錢子堿的含量[J].風濕病與關節(jié)炎,2003,12:39-41.

[10] 那微,張清波,張淑華,等.HPLC測定骨筋丸系列品種中馬錢子堿和士地寧[J].中成藥,2012,34(4):759-762.

[11] 湯淮波,張令君,李湘玲,等.不同溶劑提取馬錢子中士地寧與馬錢子堿的實驗研究[J].中醫(yī)藥導報,2009,15(11):52-53.

Determination of Strychnine in Jiegudingtong pill by HPLC

WANG Hui1, YANG Shu-dong1, WANG Yue-qi2, ZHANG Li3
(1 Changchun Institute for Food and Drug Control, Changchun 130012, China; 2 Central Laboratory, Changchun Normal University, Changchun 130032, China; 3 Jilin King Deer Pharmaceutical Co.Itd., Jilin 132013, China)

Objective An HPLC method for the determination of strychnine in Jie gu ding tong pill was established. Methods The procedure was performed on an Aglilent SB C18column at 30 ℃,and detected at 260nm.The mobile phase A:0.01 mol/Lsodium heptanes ulfonate and 0.02 mol/L of potassium phosphate monobasic amount of mixture(the pH was adjusted to 2.8 by 10% phosphoric acid) and B:acetonitrile, A∶B(21∶79), with the flow rate at 1.0 mL/min. Results Strychnine was in good linear at 196.8-426.4 ng(r=1.000)respectively. The lowest detection limit of related (S/N=3) was 48 ng/mL. The recovery was 98.6%(n=6)(RSD=1.8%). Conclusion The methodology validation showed that this method is simple,accurate and reliable for the quality control strychnine in Jiegudingtong pill.

HPLC; Strychnine; Jiegudingtong pill

R282.710.3

B

1671-8194（2015）32-0033-02