施新顏 王賢軍 王真 陳宇

·檢測診斷·

細(xì)菌預(yù)成酶聯(lián)合檢測在陰道微生態(tài)評價中的應(yīng)用價值

施新顏 王賢軍 王真 陳宇

目的 探討需氧菌性陰道炎（AV）、細(xì)菌性陰道病（BV）五項聯(lián)合檢測在陰道微生態(tài)評價中的應(yīng)用價值。方法 用傳統(tǒng)方法對5000例健康體檢者陰道分泌物進(jìn)行清潔度、陰道pH、革蘭染色檢查作陰道菌群分析；同時應(yīng)用AV、BV五項聯(lián)合檢測進(jìn)行細(xì)菌預(yù)成酶測定。結(jié)果 5000例體檢者中傳統(tǒng)方法檢測陰道菌群正常2675例（53.5%），陰道菌群異常2325例（46.5%）；陰道菌群異常組細(xì)菌預(yù)成酶檢測結(jié)果陽性率明顯高于陰道菌群正常組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 AV、BV五項聯(lián)合檢測靈敏度高，操作簡便，可以作為快速篩查方法應(yīng)用于臨床，結(jié)合陰道清潔度等指標(biāo)可系統(tǒng)評價陰道微生態(tài)狀況。

陰道微生態(tài) 預(yù)成酶 菌群正常 菌群異常

近年來，陰道微生態(tài)檢測越來越受到關(guān)注，傳統(tǒng)陰道微生態(tài)診斷標(biāo)準(zhǔn)一般依據(jù)曾忠銘等［1］提出的通過菌群密集度、菌群多樣性、優(yōu)勢菌及機(jī)體炎性反應(yīng)等指標(biāo)進(jìn)行陰道菌群的評價。作者自2012年3月至2013年9月對本院健康體檢的女性陰道分泌物標(biāo)本5000例進(jìn)行陰道pH測定、AV、BV五項檢測及顯微鏡鏡檢。探討AV、BV五項細(xì)菌預(yù)成酶檢測在陰道微生態(tài)分析中的應(yīng)用價值。

1　材料與方法

1.1一般資料 2012年3月至2013年9月杭州市第一人民醫(yī)院健康體檢的女性5000例。已婚，月經(jīng)干凈≥3d，檢查前＜1周未使用陰道藥物，未進(jìn)行陰道灌洗，＜3d無性生活。

1.2儀器及試劑 北京中生金域五項聯(lián)合測定試劑盒（AV、BV）；革蘭染色試劑（龍膽紫、碘溶液、脫色液和沙黃溶液）。儀器：OLYMPUS CX22型生物顯微鏡；pH3.8～5.4精密pH試紙。顯微鏡鏡檢指標(biāo)包括清潔度、革蘭染色；五項檢測包括：過氧化氫濃度、白細(xì)胞酯酶、唾液酸苷酶、凝固酶、β-葡萄糖醛酸苷酶。

1.3方法 （1）標(biāo)本采集：以無菌拭子從陰道后穹隆及上1/3刮取少量分泌物，將棉簽置入盛有少量0.9%氯化鈉液的試管內(nèi)；另取一根棉簽于相同部位刮取分泌物，置于試管內(nèi)。（2）檢測步驟：濕片顯微鏡觀察：檢查清潔度及滴蟲、念珠菌、線索細(xì)胞等，檢測方法參照《全國臨床檢驗操作規(guī)范》［2］（第3版）。涂片后革蘭染色，觀察菌群密集度、菌群多樣性、優(yōu)勢菌及炎性反應(yīng)。陰道分泌物微生物預(yù)成酶測定：檢測過氧化氫濃度、唾液酸苷酶、白細(xì)胞酯酶、凝固酶和β-葡萄糖醛酸苷酶五項指標(biāo)。（3）pH3.8～5.4精密pH試紙測試陰道pH。（4）陰道微生態(tài)評價：陰道菌群正常［3］：菌群密集度Ⅱ～Ⅲ級，菌群多樣性Ⅱ～Ⅲ級；優(yōu)勢菌：革蘭陽性大桿菌；炎性反應(yīng)：白細(xì)胞0～5個/高倍視野；清潔度為：Ⅰ～Ⅱ度。菌群失調(diào)：優(yōu)勢菌革蘭陽性大桿菌減少或缺如，被其他革蘭陽性球菌、革蘭陽性小桿菌、革蘭陰性桿菌等取代。菌群抑制：優(yōu)勢菌缺如，菌群多樣性在≤Ⅰ級或完全無細(xì)菌。菌群增殖過度：優(yōu)勢菌仍為革蘭陽性大桿菌，但菌群密集度高，多達(dá)Ⅲ～Ⅳ級，是乳桿菌過度增殖狀態(tài)［4］。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理：采用SPSS12.0軟件。計數(shù)資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.15000例陰道分泌物五聯(lián)檢測結(jié)果 見表1。

表1　5000例陰道分泌物五聯(lián)檢測結(jié)果［n（%）］

2.2菌群正常、菌群異常預(yù)成酶陽性率比較 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2　菌群正常、菌群異常預(yù)成酶陽性率比較［n（%）］

3　討論

女性陰道是一個復(fù)雜的微生態(tài)體系，由陰道內(nèi)的微生態(tài)菌群、局部免疫、機(jī)體的內(nèi)分泌調(diào)節(jié)功能及解剖結(jié)構(gòu)共同組成。健康女性陰道中可分離出數(shù)十種微生物，其與宿主、環(huán)境之間構(gòu)成了相互制約、相互協(xié)調(diào)、動態(tài)平衡的陰道微生態(tài)系統(tǒng)，G+乳桿菌占陰道微生物＞95%，形成一種健康的陰道微生態(tài)［5］。通過革蘭染色顯微鏡鏡檢觀察菌群密集度、菌群多樣性、優(yōu)勢菌及白細(xì)胞和膿細(xì)胞評價陰道菌群是微生態(tài)診斷的主要方法。近年來，傳統(tǒng)方法結(jié)合細(xì)菌預(yù)成酶測定結(jié)果評價陰道微生態(tài)越來越受到重視，研究認(rèn)為，引起陰道微生態(tài)失衡的細(xì)菌有兩類，一類由厭氧菌和兼性厭氧菌引起，臨床上稱細(xì)菌性陰道病（BV）；另一類由需氧菌引起，臨床上稱需氧菌性陰道炎（AV）［6］。AV和BV均存在明顯的陰道菌群結(jié)構(gòu)改變，其特點是二者的乳酸桿菌，特別是產(chǎn)過氧化氫的乳酸桿菌明顯減少，存在不同程度的G+小桿菌、G+球菌、G-桿菌增多。本文通過對5000例健康體檢女性陰道分泌物革蘭染色鏡檢評估陰道菌群，發(fā)現(xiàn)無陰道感染癥狀女性53.5%陰道菌群正常，46.5%陰道菌群異常，提示部分體檢人群無自覺癥狀，但已存在某種程度的微生態(tài)失調(diào)，甚至有部分已檢到明確病原體滴蟲、真菌。由于生活水平和城市文明程度的提高，檢到明確病原體在體檢人群中所占比例較低，占1.7%，更多的是微生態(tài)失調(diào)，從而提示臨床更多地關(guān)注陰道內(nèi)微生態(tài)。基于革蘭染色顯微鏡鏡檢操作費時，綜合考慮工作量、診治時效等因素，很難作為常規(guī)檢測開展。而臨床工作中，常規(guī)白帶濕片檢查除檢到明確的病原體滴蟲、真菌等，會造成部分無明確病原體而微生態(tài)失衡病例的漏檢。可見，探索一種簡單、快速、系統(tǒng)評價陰道微生態(tài)的方法，對于處于亞臨床感染的患者進(jìn)行微生態(tài)檢查和評價，可有助于預(yù)防陰道感染的發(fā)生。本實驗通過AV、BV五項檢測發(fā)現(xiàn)：菌群異常組（包括菌群失調(diào)、菌群抑制、菌群增殖過度、檢到病原體）各項指標(biāo)的陽性率均高于菌群正常組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。 菌群失調(diào)組由于G+乳桿菌缺如，存在不同程度的G+小桿菌、G+球菌、G-桿菌增多；故過氧化氫檢出率＜10%。相應(yīng)的唾液酸苷酶、凝固酶、β-葡萄糖醛酸苷酶陽性率上升，且唾液酸苷酶陽性356例在顯微鏡下均檢到線索細(xì)胞，提示唾液酸苷酶與線索細(xì)胞有較高的檢出符合率，可以輔助診斷BV。菌群抑制組鏡下細(xì)菌總量較少，但由于G+乳桿菌也減少或缺如，過氧化氫檢測顯示乳桿菌功能喪失、白細(xì)胞酯酶陽性率增高，提示白細(xì)胞破壞，陰道黏膜受損。經(jīng)統(tǒng)計年齡＞55歲289例，占83.5%，提示無癥狀圍絕經(jīng)期女性陰道微生態(tài)狀況不容樂觀，是否為引起老年性陰道炎的主要因素有待研究。菌群過度增殖組優(yōu)勢菌是G+乳桿菌，但由于菌群密集度高，是乳桿菌增殖過度狀態(tài)，造成陰道上皮細(xì)胞溶解破裂，從而導(dǎo)致陰道炎的各種癥狀，例如外陰瘙癢、燒灼感、大量陰道分泌物，通過顯微鏡鏡檢可見大量G+乳桿菌及上皮細(xì)胞碎片。這也是臨床大多數(shù)患者因白帶增多就診的原因，這種病癥近年來被稱為細(xì)胞溶解性陰道?。?］。

1 曾忠銘， 潘令嘉， 周殿元， 等.臨床微生態(tài)學(xué)及其理論基礎(chǔ).中國微生態(tài)學(xué)雜志， 1999， 11（6）：321～331 .

2 葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜. 全國臨床檢驗操作規(guī)程，第三版. 南京： 東南大學(xué)出版社，2006. 725～870.

3 廖秦平.女性陰道微生態(tài)及陰道微生態(tài)評價.實用婦產(chǎn)科雜志，2010，26（ 2）： 81～83.

4 賀銳，張翀，趙翠生，等.1500例女性陰道微生態(tài)狀況分析.中國微生態(tài)學(xué)雜志，2011，23（12）：1130～1131.

5 李蘭娟.感染微生態(tài)學(xué).北京： 人民衛(wèi)生出版社，2002. 422～424.

6 Donders GGG，Vereecken A，Bosmans E，et al.Definition of a type of abnormal vaginal flora that is distinct from bacterial vaginosis：Aerobic vaginitis.Bjog-an International Journal of Obstetrics and Gynaecology，2002， 109（1）：34～43.

7 王沖，曾忠銘.細(xì)胞溶解性陰道病研究進(jìn)展.中國婦幼保健雜志，2009，24（28）： 4048～4049.

浙江省衛(wèi)計委課題（2011ZHB007）

310006 杭州市第一人民醫(yī)院檢驗科（施新顏 王賢軍）310008 杭州市婦產(chǎn)科醫(yī)院檢驗科（王真 陳宇）