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        ESAT-6 INF-γ和ADA在結(jié)核性腦膜炎早期診斷中的應(yīng)用

        2015-10-19 12:39:08陳子松李磊周杭杰應(yīng)玲紅
        浙江臨床醫(yī)學(xué) 2015年7期
        關(guān)鍵詞:結(jié)腦輕癥腦膜炎

        陳子松 李磊 周杭杰 應(yīng)玲紅

        ESAT-6 INF-γ和ADA在結(jié)核性腦膜炎早期診斷中的應(yīng)用

        陳子松 李磊 周杭杰 應(yīng)玲紅

        目的 探討早期分泌性靶抗原-6(ESAT-6)、干擾素-γ(INF-γ)和腺苷脫氨酶(ADA)在結(jié)核性腦膜炎患兒早期診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測ESAT-6和INF-γ水平,采用酶動(dòng)力學(xué)終點(diǎn)法檢測ADA水平,并將各組結(jié)果進(jìn)行對比分析。結(jié)果 結(jié)核性腦膜炎患兒急性期ESAT-6、INF-γ和ADA濃度均顯著高于其恢復(fù)期水平和對照組(P<0.05)。重癥組ESAT-6、INF-γ和ADA濃度均顯著高于輕癥組,輕癥組明顯高于對照組(P<0.05)。單項(xiàng)檢測陽性率較低,三項(xiàng)聯(lián)合檢測能提高陽性檢出率。結(jié)論 ESAT-6、INF-γ和ADA對結(jié)核性腦膜炎患兒早期診斷具有重要的臨床價(jià)值,三者聯(lián)合檢測能減少漏診。

        結(jié)核性腦膜炎 早期分泌性靶抗原-6 干擾素-γ 腺苷脫氨酶

        結(jié)核性腦膜炎(結(jié)腦)是由結(jié)核分枝桿菌引起的腦膜非化膿性炎癥,其臨床癥狀不典型,但病情進(jìn)展迅速,及時(shí)診斷和合理治療是降低病死率和減輕后遺癥的關(guān)鍵。隨著免疫學(xué)的發(fā)展,較多免疫因子在臨床上受到重視,腦脊液中早期分泌性靶抗原-6(ESAT-6)、干擾素-γ(INF-γ)和腺苷脫氨酶(ADA)濃度升高與結(jié)腦發(fā)病有密切聯(lián)系,現(xiàn)報(bào)道如下。

        1 臨床資料

        1.1一般資料 2010年10月至2013年9月在本院就診的患兒32例,其中男18例,女14例;年齡3個(gè)月~14歲,平均(7.5±4.0) 歲。嚴(yán)格按照《實(shí)用兒科學(xué)》第7版診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]。對照組25例為同期住院患兒,男13例,女12例;年齡5個(gè)月~14歲,平均(7.0±4.5)歲。排除中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病。

        1.2標(biāo)本采集和保存 所有患兒于入院后24h內(nèi)(頭痛、發(fā)熱、腦膜刺激證)無菌條件下腰椎穿刺留取腦脊液2ml,2000r/min離心10min,取上清液貯存于-20℃冰箱。結(jié)腦患兒經(jīng)抗結(jié)核治療有效,臨床癥狀體征好轉(zhuǎn),腦脊液細(xì)胞數(shù)、蛋白、糖和氯化物基本恢復(fù)正常為恢復(fù)期,此時(shí)留取腦脊液2ml,標(biāo)本處理和貯存方法同上。1.3 檢測方法和試劑 采用ELISA方法檢測ESAT-6和INF-γ水平,用酶動(dòng)力學(xué)終點(diǎn)法檢測ADA水平。ESAT-6試劑盒由上海百沃科貿(mào)有限公司提供,INF-γ試劑盒由北京晶美生物工程有限公司提供,ADA試劑盒購自北京利德曼公司。

        1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以(x±s)表示,組間比較采用t檢驗(yàn), P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1結(jié)腦組急性期、恢復(fù)期和對照組ESAT-6、INF-γ和ADA檢測結(jié)果 見表1。

        表1 結(jié)腦組三項(xiàng)指標(biāo)檢測結(jié)果

        表1 結(jié)腦組三項(xiàng)指標(biāo)檢測結(jié)果

        注:與恢復(fù)期和對照組比較,*P<0.01

        組別nEAST-6(ng/ml)INF-γ(pg/ml)ADA(U/L)結(jié)腦組32急性期63.5±19.2*58.0±21.4*15.1±6.5*恢復(fù)期12.0±3.810.7±4.56.3±3.7對照組2510.6±2.99.2±2.35.2±2.1

        2.2結(jié)腦組患者重癥組、輕癥組和對照組ESAT-6、INF-γ和ADA檢測結(jié)果 見表2。

        表2 結(jié)腦組三項(xiàng)指標(biāo)檢測結(jié)果

        表2 結(jié)腦組三項(xiàng)指標(biāo)檢測結(jié)果

        注:與輕癥組比較, *P<0.05;與對照組比較, #P<0.05

        組別nEAST-6(ng/ml)INF-γ(pg/ml)ADA(U/L)重癥組1287.1±28.6*76.5±29.3*24.7±10.8*輕癥組2048.2±15.5#42.4±18.9#10.0±6.3#對照組2510.6±2.99.2±2.35.2±2.1

        2.3結(jié)腦組ESAT-6、INF-γ和ADA單獨(dú)和三項(xiàng)聯(lián)合檢測結(jié)果 單獨(dú)檢出陽性率較低,三項(xiàng)聯(lián)合檢測能提高陽性檢出率。見表3。

        表3 三項(xiàng)指標(biāo)單獨(dú)和三項(xiàng)聯(lián)合檢測結(jié)果比較

        3 討論

        結(jié)腦的傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室診斷主要是腦脊液常規(guī)、涂片找結(jié)核分枝桿菌和結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng),前者陽性率低,后者培養(yǎng)時(shí)間長,均不能滿足臨床要求。結(jié)腦發(fā)病后,在結(jié)核分枝桿菌的刺激下,腦脊液中ESAT-6、INF-γ和ADA等表達(dá)水平顯著升高,故檢測其濃度的動(dòng)態(tài)改變有助于對結(jié)腦的及時(shí)診斷。

        EAST-6由結(jié)核分枝桿菌在早、中期分泌并釋放于菌體外的一組蛋白,編碼EAST-6的基因序列是卡介苗傳代過程中丟失的一段基因,位于RD1區(qū), 該基因序列在卡介苗和非致病性環(huán)境分枝桿菌中缺失,因此,EAST-6具有結(jié)核分枝桿菌特異性[2]。結(jié)核分枝桿菌直接分泌的ESAT-6濃度較低,但結(jié)核分枝桿菌被單核巨噬細(xì)胞吞噬并在細(xì)胞內(nèi)生長后,ESAT-6蛋白的量會(huì)明顯增高[3]。一旦腦脊液中檢測到高濃度的EAST-6表達(dá),其不僅代表有結(jié)核分枝桿菌感染,更表明結(jié)核分枝桿菌在體內(nèi)大量繁殖。吳曉牧等[4]采用ELISA檢測腦脊液中ESAT-6,敏感度為76.09%,特異度為98.18%。

        INF-γ是主要由活化的T細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生,具有調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)作用的一個(gè)免疫調(diào)節(jié)因子。INF-γ是一種非常重要的促炎性細(xì)胞因子,能夠促進(jìn)巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞等免疫細(xì)胞增殖和活性。ESAT-6是刺激淋巴細(xì)胞分泌INF-γ的重要抗原分子,因此檢測ESAT-6及其刺激后產(chǎn)生的INF-γ對結(jié)腦的診斷有重要幫助[5]。INF-γ具有雙重作用,高濃度的INF-γ加強(qiáng)免疫反應(yīng),對中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷加重;另一方面,免疫有利于機(jī)體對結(jié)核分枝桿菌的清除[6]。ADA是一種巰基酶其是嘌呤核苷酸代謝的關(guān)鍵酶。體液免疫和細(xì)胞介導(dǎo)免疫在結(jié)腦的病理生理產(chǎn)生過程中起到關(guān)鍵作用,ADA活性可以用來作為鑒別診斷結(jié)核與其他感染性和非感染性疾病的指標(biāo)[7]。本資料結(jié)果表明,結(jié)腦患兒急性期ESAT-6、INF-γ和ADA濃度均顯著高于其恢復(fù)期水平,亦顯著高于對照組(P<0.05)。重癥組ESAT-6、INF-γ和ADA濃度均顯著高于輕癥組,輕癥組顯著高于對照組(P<0.05)。單項(xiàng)檢測陽性率較低,三項(xiàng)聯(lián)合檢測能提高陽性檢出率。

        綜上所述,ESAT-6、INF-γ和ADA在結(jié)腦患兒早期診斷中具有重要的應(yīng)用價(jià)值,三者聯(lián)合檢測能彌補(bǔ)單項(xiàng)檢測的缺陷,提高結(jié)腦的檢出率。

        1 胡亞美,吳瑞萍,主編.諸福棠實(shí)用兒科學(xué)(上冊).第7版.北京:北京衛(wèi)生出版社,2002.759~762.

        2 何俊瑛,劉士甫,朱艷霞,等.腦脊液單核細(xì)胞內(nèi)EAST-6檢測對結(jié)核性腦膜炎的診斷意義. 腦與神經(jīng)疾病雜志,2010,18(3):209~212.

        3 徐苗,王國治,羅永艾.ESAT-6蛋白在結(jié)核病診斷中的研究進(jìn)展.國外醫(yī)學(xué)內(nèi)科學(xué)分冊,2006,33(11):481~484.

        4 吳曉牧,劉麗娟,許志強(qiáng),等.早期診斷結(jié)核性腦膜炎的新方法:檢測濃縮腦脊液中CFP-10和ESAT-6.中國免疫學(xué)雜志,2012,28(4):347~350.

        5 程言博,周延龍,董艷,等.ESAT-6誘導(dǎo)的外周血單個(gè)核細(xì)胞γ-干擾素反應(yīng)對結(jié)核性腦膜炎的診斷價(jià)值.徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2012,32(7):448~450.

        6 李志惠,崔丹,趙杰,等.結(jié)核性胸膜炎胸液結(jié)核分枝桿菌特異性INF-γ與ADA的關(guān)系.河北醫(yī)藥,2013,35(21):3232~3233.

        7 陳仕檢,石勝良,張躍齡,等. 結(jié)核性和非結(jié)核性腦膜炎患者腦脊液中ADA及NSE表達(dá)水平的對比分析. 內(nèi)科,2013,8(1):16~18.

        321300 浙江省永康市婦幼保健院

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