馬濤

VEGF/VEGFR在缺血再灌注損傷中神經(jīng)保護(hù)作用分析

馬濤

目的 探討VEGF/VEGFR在腦缺血再灌注損傷中神經(jīng)保護(hù)作用。方法 108只SD大鼠,隨機(jī)分為對(duì)照組、假手術(shù)組、抗體組(VEGFR), 各36只。對(duì)腦動(dòng)脈缺血再灌注損傷模型(MCAO)進(jìn)行制備,假手術(shù)組無(wú)缺血現(xiàn)象, 在造模前20 min抗體組側(cè)腦室予以VEGF抗體注射, 對(duì)照組、假手術(shù)組均予以等量生理鹽水注射, 造模后1、3、7 d對(duì)三組Bederson評(píng)分予以比較。結(jié)果 VEGFR抗體組Bederson評(píng)分明顯高于對(duì)照組和假手術(shù)組, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 針對(duì)腦缺血再灌注損傷, VEGF的活化早刺激下, 使VEGFR表達(dá)不斷上調(diào), 加速血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖, 促進(jìn)形成新生血管。

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；Bederson評(píng)分；腦缺血再灌注損傷；腦內(nèi)皮細(xì)胞

VEGF是指血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子, 對(duì)于內(nèi)皮細(xì)胞而言, 是一種強(qiáng)力絲裂劑, 促進(jìn)新生血管生長(zhǎng)作用非常強(qiáng)大, 此內(nèi)源性血管生成因子, 具有較強(qiáng)的作用和特異性, 缺血性腦損傷出現(xiàn)后, 在再生血管的作用下, 有助于缺血半暗帶的血供盡早恢復(fù), 對(duì)神經(jīng)功能的恢復(fù)具有較好的促進(jìn)作用［1］。本次研究選取108只SD大鼠, 隨機(jī)分為對(duì)照組、假手術(shù)組和抗體組(VEGFR), 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本次研究選取108只SD大鼠, 隨機(jī)分為對(duì)照組、假手術(shù)組、抗體組(VEGFR), 各36只。體質(zhì)量為(250±30)g；試劑：VEGFR2兔抗大鼠IgG多抗、VEGFR兔抗大鼠IgG 、VEGF兔抗大鼠IgG多抗；CY3山羊抗兔二抗、內(nèi)參Actin蛋白。

1.2 方法 制備栓線：采用尼龍線(長(zhǎng)約3 cm、直徑為0.28 mm), 使用油性筆在2 cm處做標(biāo)記, 使用硅膠包裹侵泡消毒后的尼龍線, 之后放在肝素鹽水中(100 U/ml)備用。

1.2.1 制備動(dòng)物模型 對(duì)腦動(dòng)脈缺血再灌注損傷模型(MCAO)進(jìn)行制備, 假手術(shù)組無(wú)缺血現(xiàn)象, 在造模前20 min抗體組側(cè)腦室予以VEGF抗體注射, 對(duì)照組、假手術(shù)組均予以等量生理鹽水注射。模型制備：栓線放入后, 使用消毒鋼尺對(duì)血管外線長(zhǎng)度進(jìn)行測(cè)量, 對(duì)栓線進(jìn)入的實(shí)際長(zhǎng)度進(jìn)行計(jì)算,確保顱內(nèi)栓線插入后, 深度為18～20 mm, 距離穿刺點(diǎn)5 mm外,將殘留栓線剪斷, 隱藏于胸鎖突肌下, 缺血后60 min將栓線拔出, 采用Bederson評(píng)分, ＞2分確定為梗死, 對(duì)照組與抗體組均使用Bederson評(píng)分。

1.2.2 制備腦組織 采用水合氯醛(10%)對(duì)大鼠腹腔進(jìn)行注射麻醉, 準(zhǔn)備小杯并放入液氮, 斷頭取腦必須迅速, 接著放入小杯中, 腦組織在10～20 s后迅速冰結(jié)成塊, 接著放入冰箱(-80℃)中備用。

采用Western blot 對(duì)缺血半暗帶區(qū)VEGFR的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)：采用TBS漂洗組織樣品后, 加入 RIPA 緩沖液裂解液,BCA 法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度, 加熱變性、轉(zhuǎn)膜, 5%脫脂奶粉封閉1～2 h, VEGFR 兔抗大鼠IgG多抗(1/400)雜交過(guò)夜, TBST洗膜后加入 HRP 標(biāo)記山羊抗兔二抗(1/5 000)孵育1 h, TBST洗膜后進(jìn)行 ECL 化學(xué)發(fā)光法顯影。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示, 采用t檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

VEGFR抗體組Bederson評(píng)分明顯高于對(duì)照組和假手術(shù)組, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

表1 三組大鼠的Bederson評(píng)分比較(s, 分)

表1 三組大鼠的Bederson評(píng)分比較(s, 分)

注：與假手術(shù)組比較, aP＜0.05；與對(duì)照組比較, bP＜0.05

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3 討論

修復(fù)神經(jīng)系統(tǒng)缺血再灌注損傷, 最好的方法就是血管再生, 這需要對(duì)平滑肌細(xì)胞、血管周細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞的眾多作用的調(diào)節(jié)因子, 進(jìn)而構(gòu)成信號(hào)網(wǎng)絡(luò), 其中對(duì)血管系統(tǒng)具有特定作用的重要信號(hào)因子包括：一種是VEGF/VEGFR信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)；另一種是促血管生成素, 缺血性腦損傷出現(xiàn)后, 容易形成動(dòng)脈血管閉塞, 導(dǎo)致局部腦組織出現(xiàn)缺氧、缺血現(xiàn)象,但在側(cè)支循環(huán)中仍有缺血半暗帶存在, 且存活有大量神經(jīng)元。如果血液能夠迅速恢復(fù), 此種損傷便具有可逆性, 而側(cè)支循環(huán)及新生血管對(duì)其具有決定性作用, 腦缺血再灌注損傷時(shí),VEGF與VEGFR的充分結(jié)合, 對(duì)內(nèi)皮血管遷移、增生、形成微血管管型結(jié)構(gòu)及生成成熟血管具有較好的促進(jìn)作用［2］。

VEGF及其受體對(duì)新生血管的生成具有較好的特異性,因此, 缺血再灌注后出現(xiàn)的腦損傷, 較為關(guān)注的研究熱點(diǎn)就是VEGF/VEGFR對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用。當(dāng)前, 一些可能性的作用機(jī)制主要有：在缺氧、缺血情形下, VEGF及其受體蛋白的表達(dá)會(huì)不斷上升, 增加生物活性得以激活后, 對(duì)內(nèi)皮增殖具有促進(jìn)作用, 進(jìn)而對(duì)內(nèi)皮凋亡產(chǎn)生較好的阻礙作用；VEGF對(duì)骨髓源性內(nèi)皮前體細(xì)胞活化具有較好的誘導(dǎo)作用,當(dāng)骨髓進(jìn)入血液循環(huán)后, 將會(huì)使血管的增生能力得以增強(qiáng)。同時(shí)在血管的生成過(guò)程中, 整合素也具有重要作用, 并積極參與內(nèi)皮增殖作用中。在本次研究中, 腦缺血再灌注大鼠,術(shù)后第1天便可以檢測(cè)到VEGFR表達(dá), 在之后的3～5 d, 其表達(dá)達(dá)到高峰, 此時(shí)處于缺血半暗帶的VEGFR2也會(huì)快速表達(dá)。可見(jiàn), 增加供氧量及血液再灌注, 對(duì)腦神經(jīng)保護(hù)作用的恢復(fù)效果較好。

綜上所述, 針對(duì)腦缺血再灌注損傷, 早VEGF的活化刺激下, 使VEGFR表達(dá)不斷上調(diào), 加速血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖, 促進(jìn)形成新生血管。

［1］ 宓丹, 馬賢德, 王建.眼針對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠VEGF/VEGFR系統(tǒng)表達(dá)的影響.山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版), 2013, 51(2):22-26.

［2］ 劉軻, 李建生, 高劍峰, 等.腦脈通對(duì)老齡大鼠腦缺血再灌注微血管生成及VEGF/VEGFR系統(tǒng)表達(dá)的影響.中華中醫(yī)藥雜志, 2010(12):2088-2092.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.33.211

110015 沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬中心醫(yī)院麻醉科

2015-06-11］

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