張勇 張小峰

n-3脂肪酸對重癥急性胰腺炎早期調控機制研究

張勇 張小峰

目的 探討n-3脂肪酸對大鼠重癥急性胰腺炎(SAP)早期調控機制。方法 30只SD大鼠隨機分為正常組(開腹后翻動胰腺數(shù)次后尾靜脈注射生理鹽水)、治療組(造模成功后, 尾靜脈注射n-3脂肪酸)和SAP組(造膜成功后, 尾靜脈注射生理鹽水), 各10例, 并3 h取材。觀察血清丙二醛(MDA)、淀粉酶(AMY)、超氧化物歧化酶(SOD), 胰腺核因子κB(NF-κB)及病理損傷。結果 SAP組血清MDA、AMY、胰腺NF-κB及病理損傷明顯高于治療組和正常組(P＜0.05), 治療組這些指標均高于正常組(P＜0.05)；而SOD在正常組明顯高于治療組和SAP組(P＜0.05), 治療組明顯高于SAP組(P＜0.05)。結論 n-3脂肪酸是一種免疫調理營養(yǎng)脂肪乳劑, 早期具有調節(jié)炎癥反應, 減少氧自由基生產, 減輕胰腺組織損傷, 對胰腺炎具有一定保護作用。

n-3脂肪酸；胰腺炎；核因子κB

胰腺炎是臨床上常見的危重疾病, 病情發(fā)展快, 病死率高。一直以來是外科臨床值得進一步探討的課題, 至今其發(fā)病機制尚未完全闡明。本實驗探討n-3脂肪乳在大鼠胰腺炎早期中的調控作用, 以進一步認識SAP的發(fā)病機制, 并為SAP的治療尋找新的有效靶點?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料來源 取SPF級SD大鼠30只, 體重200～250 g。?；悄懰徕c購自美國Sigma公司, MDA、AMY、SOD等試劑盒購自上?？泼羯锟萍加邢薰? n-3脂肪乳購自上海三共制藥有限公司。

1.2 分組和模型制備 隨機將大鼠分為正常組、治療組和SAP組, 各10只。SAP造模方法：大鼠術前禁食12 h, 不禁水, 6%水合氯醛(0.35 ml/100 g)腹腔注射麻醉。在無菌操作下行腹正中切口切開大鼠腹部, 暴露十二指腸及主胰管。無損傷血管夾閉膽總管、胰管末端, 以4.5號頭皮針經(jīng)十二指腸乳頭逆行穿刺膽胰管末端, 緩慢勻速注射4%?；悄懰徕c(0.1 ml/100 g), 注射時間為2～3 min, 完畢后拔除頭皮針, 保留5 min后移去血管夾。0.5 h后取胰腺病理組織行HE染色,提示有出血壞死改變, 為造模成功。SAP組：造模成功后尾靜脈注射0.9%生理鹽水0.2 ml/(kg·d)；治療組：造模成功后尾靜脈注射n-3脂肪酸0.2 ml(kg·d)；正常組：開腹后翻動胰腺數(shù)次后給予尾靜脈注射0.9%生理鹽水0.2 ml(kg·d)。1.3 標本檢測方法 胰腺組織HE染色和病理評分, HE染色后光鏡下觀察, 并根據(jù)Schmidt 等［1］評分；AMY采用碘—淀粉比色法；采用硫代巴比妥酸(TBA)法檢測血清MDA水平；采用黃嘌呤氧化酶法測定SOD；免疫組化檢測胰腺組織中NF-κB。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示, 采用t檢驗；計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

NF-κB在正常組織中基本上不表達, 在SAP組和治療組胰腺組織中主要在細胞核中表達或細胞核伴胞質中表達。3 h SAP組血清MDA、AMY、NF-κB及病理損傷明顯高于治療組和正常組, 差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05), 治療組這些指標顯著均高于正常組, 差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；而SOD在正常組明顯高于治療組和SAP組, 差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05), 治療組明顯高于SAP組, 差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 三組大鼠3 h的IL-1、血清MDA、SOD水平、胰腺組織病理損和NF-κB陽性表達(±s)

表1 三組大鼠3 h的IL-1、血清MDA、SOD水平、胰腺組織病理損和NF-κB陽性表達(±s)

注：與正常組比較, aP＜0.05；與治療組比較, bP＜0.05

超氧化物歧化酶(SOD)(nmU/L)NF-κB陽性率(%)丙二醛(MDA)(nmmol/L)胰腺病理評分(分)SAP組10 5537±824ab 42.67±5.88ab 42.12±10.13ab 15.32±4.57ab 8.44±0.65ab治療組10 3724±102a 89.34±8.38a 17.24±5.40a 8.12±1.57a 6.22±0.52a正常組10310±26105.25±10.32 3.54±0.23 4.03±0.562.12±0.24

3 討論

SAP是臨床上常見的危重疾病, 病情發(fā)展快, 且易并發(fā)全身炎癥反應綜合征和多器官功能障礙綜合征, 病死率高。n-3脂肪酸是人體必需的脂肪酸, 其中以二十碳五烯酸( EPA) 和二十二碳六烯酸( DHA)尤為重要。EPA 和DHA 可被細胞色素P450 環(huán)氧化酶( CYP450) 代謝, 生成類二十烷酸和其他自體活性物質, 發(fā)揮生物學作用。

本實驗可見n-3脂肪酸經(jīng)尾靜脈注入后, 具有早期炎癥反應調節(jié)作用［2］, 能降低氧自由基反應, 減少血清MDA、AMY水平。NF-κB是一類能與多種細胞基因的啟動、增強子位點結合以啟動其轉錄的蛋白質, 現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)許多炎性反應相關基因都有其位點, 包括作為iNOS合成路徑上的關鍵控制點控制著 iNOS的表達, 通過影響NO合成而發(fā)揮炎性反應調控作用。從免疫組化可以明顯看出, NF-κB在重癥胰腺炎胰腺組織細胞核表達明顯增強, 而治療組明顯減少(P＜0.05), NF-κB的［3］活化可很大程度地促進細胞因子的表達。n-3脂肪酸阻斷NF-κB激活信號通路, 抑制NF-κB活性, 減少趨化因子和黏附分子產生, 抑制NO, 減少炎性細胞因子等, 對胰腺損傷有一定的治療作用。

同時還具有保護細胞膜, 提高SOD水平, 能發(fā)揮其降低早期過度的炎癥反應。降低白細胞介素-1(IL-1)、白細胞介素-6(IL-6)［4］、腫瘤壞死因子α(TNF-α), 降低血清MDA,抑制NF-κB激活［5］、減少脂質過氧化反應, 減少胰腺組織損傷。對上述過程的進一步認識 , 將有助于更全面的了解急性胰腺炎及其并發(fā)癥的病理生理機制。為臨床治療該疾病提供了一條新思路。

［1］ Schmidt J, Rattner DW, Lewandrowski K, et al.A better model of acute pancreatitis for evaluating therapy.Ann Surg, 1992, 215(1):44-56.

［2］ Gdula-Argasińska J, Czepiel J, Wo?niakiewicz A, et al.n-3 Fatty acids as resolvents of inflammation in the A549 cells.Pharmacol Rep, 2015, 67(3):610-615.

［3］ Algül H, Treibei M, Lesina M, et al.Pancreas-specific RelA/p65 truncation increases susceptibility of acini to inflammationassociated cell death following cerulein pancreatitis.Clin Invest,2007, 117(6):1490-1501.

［4］ Andric T, Weiss TW, Huber K, et al.Effects of diet and/or n-3 fatty acid supplementation on components of the interleukin-6 transsignalling system in elderly men.Scand J Clin Lab Invest, 2015,16(5):1-6.

［5］ Daak AA, Elderdery AY, Elbashir LM, et al.Omega 3 (n-3) fatty acids down-regulate nuclear factor-kappa B (NF-κB) gene and blood cell adhesion molecule expression in patients with homozygous sickle cell disease.Blood Cells Mol Dis, 2015, 55(1):48-55.

Research of n-3 fatty acid for early regulatory mechanism in severe acute pancreatitis

ZHANG Yong,

ZHANG Xiao-feng.Second Department of General Surgery, Affiliated Ningde City Hospital of Fujian Medical University, Ningde 352100, China

Objective To investigate n-3 fatty acid for early regulatory mechanism in severe acute pancreatitis (SAP).Methods A total of 30 SD rats were randomly divided into normal group (normal saline by tail intravenous injection after pancreas flipped for several time in laparotomy), treatment group (n-3 fatty acid by tail intravenous injection after molding) and SAP group (normal saline by tail intravenous injection after molding), with 10 cases in each group.Observations were made on serum methane dicarboxylic aldehyde (MDA), amylase (AMY), superoxide dismutase (SOD), pancreas nuclear factor κB(NF-κB), and pathological damage.Results SAP group had obviously higher serum MDA, AMY, pancreas NF-κB,and pathological damage than treatment group and normal group (P＜0.05).These indexes were also higher in treatmentgroup than in normal group (P＜0.05).Normal group had much higher SOD than treatment group and SAP group (P＜0.05).Treatment group had much higher SOD than SAP group (P＜0.05).Conclusion As a nutrition fat emulsion for immune regulation, n-3 fatty acid can regulate early inflammatory reaction, reduce occurrence oxygen radical, and decrease pancreatic tissue damage.It also contains certain protective effect for pancreatitis.

n-3 fatty acid; Pancreatitis; Nuclear factor κBB

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.33.210

352100 福建醫(yī)科大學附屬寧德市醫(yī)院普外二科

2015-07-30］