朱帥俊 翁欽永 吳文偉 (福建醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科，福建 福州 35000)

阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征為一種常見的慢性病，在老年人群中有較高的發(fā)病率〔1〕。研究顯示，該病與體內(nèi)多臟器功能受損相關(guān)，為高血壓、冠心病、腦卒中、糖尿病等多種慢性病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素〔2〕。阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征主要病理生理學(xué)改變?yōu)橐归g反復(fù)性慢性間歇低氧(CIH)，可明顯提升糖尿病發(fā)生率〔3〕，但引發(fā)機(jī)體糖代謝異常的相關(guān)機(jī)制仍未明確。內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)為內(nèi)源性信號(hào)轉(zhuǎn)遞系統(tǒng)的一種，在調(diào)節(jié)糖代謝方面具有重要作用〔4〕。但內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)在阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征患者體內(nèi)糖代謝異常中發(fā)揮的作用和相關(guān)機(jī)制仍未知。本研究探討內(nèi)源性大麻系統(tǒng)對(duì)CIH大鼠糖代謝的影響機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 10周齡健康Wistar大鼠60只，均為雄性，體重230～260 g，購于福建醫(yī)大實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)SCXK(閩)200420002。隨機(jī)分為4 w正常對(duì)照組、CIH組、CIH聯(lián)合利莫那班組;6 w正常對(duì)照組、CIH組、CIH聯(lián)合利莫那班組，每組各10只。

1.2 儀器與試劑 山羊抗兔CB1受體多克隆抗體、兔抗大鼠CB1受體多克隆抗體購于艾美捷科技有限公司;SP免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒購于北京北瑞達(dá)醫(yī)藥科技有限公司;利莫那班購于武漢同興生物科技有限公司;日本東芝TBA-40FR全自動(dòng)生化分析儀;瑞士羅氏Cobase411型電化學(xué)發(fā)光儀。

1.3 暴露方法 將6組大鼠分別放入型號(hào)相同的自制低氧艙，CIH組、CIH聯(lián)合利莫那班組均循環(huán)充入不同流速的純氮?dú)夂蛪嚎s空氣，每次循環(huán)2 min，將低氧艙中的氧氣濃度在30 s內(nèi)從21.0%，下降到最低的8.0%，再于40 s內(nèi)恢復(fù)到21.0%之后保持常規(guī)通氧到下個(gè)循環(huán)為止。大鼠每日暴露時(shí)間10∶00～16∶00，共6 h。CIH聯(lián)合利莫那班組在造模之前腹腔注射利莫那班，1 mg·kg-1·d-1;正常對(duì)照組充入氧氣濃度為21.0%的壓縮空氣。

1.4 空腹血糖(FPG)、血清胰島素、血清C肽測(cè)定 分別于實(shí)驗(yàn)第4、6周，相應(yīng)大鼠在空腹?fàn)顟B(tài)下給予10%水合氯醛(0.2 ml/100 g)麻醉后，抽取股靜脈血4 ml。取其中2 ml使用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)空腹血糖(FPG)含量，另外2 ml使用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)胰島素和C肽水平。

1.5 肝臟CB1受體表達(dá)檢測(cè) 采用免疫組化法測(cè)定大鼠肝臟CB1受體表達(dá)水平，將大鼠處死后立即分離肝臟，制作石蠟切片。選用兔抗大鼠CB1受體多克隆抗體為一抗，稀釋100倍;山羊抗兔CB1受體多克隆抗體為二抗。取每張染色切片的5個(gè)視野進(jìn)行觀察和采集，使用Image-pro plus 6.0軟件檢測(cè)該受體染色呈陽性的吸光度平均值。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS16.0軟件，計(jì)量資料組間比較進(jìn)行方差分析，兩兩比較進(jìn)行t檢驗(yàn)，相關(guān)性進(jìn)行Spearman分析。

2 結(jié)果

2.1 各組FPG、胰島素和C肽水平比較 4 w和6 w CIH組FPG、胰島素和C肽水平均明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.05);6 w CIH組FPG、胰島素和C肽水平均明顯高于4 w CIH組(P＜0.05);6 w CIH聯(lián)合利莫那班組FPG、胰島素和C肽水平均明顯高于4 w CIH聯(lián)合利莫那班組(P＜0.05)。見表1。

表1 各組FPG、胰島素和C肽水平比較(±s，n=10)

表1 各組FPG、胰島素和C肽水平比較(±s，n=10)

與正常對(duì)照組比較:1)P＜0.05，與4 w CIH 組比較:2)P＜0.05;與4 w CIH 聯(lián)合利莫那組比較:3)P＜0.05

分組FPG(mmol/L)血清胰島素(U/L)血清C肽(μg/L)6.59±0.348.95±1.821.34±0.376 w 正常對(duì)照組 6.62±0.389.07±1.241.39±0.444 w CIH 組 9.03±0.511) 16.61±2.841) 3.42±0.281)6 w CIH 組 10.55±0.421)2)20.14±3.751)2)5.34±0.361)2)4 w CIH 聯(lián)合利莫那班組 7.73±0.2711.80±2.462.15±0.306 w CIH 聯(lián)合利莫那班組 9.22±0.303) 14.72±2.733) 3.77±0.243)4 w正常對(duì)照組

2.2 大鼠肝臟CB1受體表達(dá)情況 4、6 w正常對(duì)照組CB1受體吸光度值為(0.225±0.037)、(0.232±0.041)，4、6 w CIH 組CB1 受體吸光度值為(0.285±0.037)、(0.338±0.026)，4、6 w CIH聯(lián)合利莫那班組 CB1受體吸光度值為(0.253±0.016)、(0.310±0.027)。CB1 受體在4、6 w CIH 組陽性表達(dá)水平明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.05)。4、6 w CIH聯(lián)合利莫那班組CB1受體陽性表達(dá)水平明顯低于CIH組(P＜0.05)。見圖1。

2.3 大鼠肝組織CB1受體表達(dá)與FPG、胰島素和C肽水平相關(guān)性 大鼠肝組織CB1受體表達(dá)與FPG、胰島素和C肽水平之間呈明顯正相關(guān)(r=0.967、0.869、0.938，P=0.016、0.020、0.009)。

圖1 大鼠肝組織CB1受體表達(dá)情況(×400)

3 討論

目前已有研究證實(shí)，阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征患者存在血糖上升、胰島素抵抗、腹型肥胖等多種與代謝綜合征有關(guān)的臨床癥狀，病情進(jìn)一步發(fā)展會(huì)引發(fā)糖代謝異常和2型糖尿病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加〔5〕，但具體發(fā)病機(jī)制仍未明確。

前期研究顯示，阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征患者存在內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)紊亂，主要表現(xiàn)為CB1受體表達(dá)水平提升〔6〕。本次研究亦顯示CIH能夠提升大鼠肝臟組織CB1受體表達(dá)水平，并隨著低氧時(shí)間的變長而強(qiáng)度逐漸增加。由于內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)主要通過CB1受體來對(duì)機(jī)體多種生理功能發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，因此對(duì)CB1受體的表達(dá)能夠有效反映出內(nèi)源性大麻系統(tǒng)功能的改變。本次研究顯示，CIH能夠通過誘導(dǎo)大鼠肝臟CB1受體過度表達(dá)來引發(fā)糖代謝紊亂。其原因可能為:(1)通過CIH增強(qiáng)機(jī)體的交感神經(jīng)系統(tǒng)，激活炎性和氧化應(yīng)激通路，進(jìn)而引發(fā)內(nèi)源性大麻系統(tǒng)紊亂，使糖代謝出現(xiàn)紊亂。(2)通過下丘腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)及骨骼肌、肝臟等外周組織這兩種不同機(jī)制來引起胰島素抵抗及高胰島素血癥。

利莫那班為一種高特異性的CB1受體拮抗劑。研究顯示，使用利莫那班能夠有效緩解機(jī)體糖代謝異常和胰島素抵抗〔7〕。預(yù)試驗(yàn)顯示，當(dāng)利莫那班給藥劑量低于1 mg·kg-1·d-1時(shí)無法減弱CB1受體表達(dá)水平，因此本次實(shí)驗(yàn)中在造模前給予大鼠利莫那班發(fā)揮藥效的最低劑量1 mg·kg-1·d-1進(jìn)行干預(yù)。結(jié)果顯示，干預(yù)后大鼠肝臟CB1受體表達(dá)水平明顯降低，說明內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)紊亂能夠使CIH引起的糖代謝紊亂加強(qiáng)?？赡軝C(jī)制為:(1)治療初期可通過拮抗中樞神經(jīng)CB1受體來抑制食欲，進(jìn)而降低攝入食物量;(2)治療后期可通過拮抗骨骼肌、肝臟等外周CB1受體來調(diào)節(jié)機(jī)體能量代謝，降低內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)紊亂和糖尿病的發(fā)生率。

綜上所述，CIH可增強(qiáng)大鼠肝臟CB1受體表達(dá)，使FPG、胰島素和C肽水平升高;利莫那班干預(yù)治療能夠有效改善糖代謝相關(guān)指標(biāo)的異常狀態(tài)。但本次研究中未深入研究利莫那班藥效與給藥劑量之間的關(guān)系;此外，給予利莫那班后部分糖代謝指標(biāo)降低，但未完全恢復(fù)正常水平，可能與阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征引發(fā)的糖代謝紊亂還存在有除內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)之外的其他通路有關(guān)。

1 韓書芝，李 沖，蘇 力，等.阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征患者血清內(nèi)脂素的水平〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2013;33(10):2358-60.

2 劉志青，傅柳英，李樂之，等.阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征患者抑郁狀況及相關(guān)因素分析〔J〕.中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2010;35(10):1106-11.

3 李志剛，錢鳳文，崔如眾，等.持續(xù)氣道正壓通氣治療老年阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征合并糖尿病的臨床分析〔J〕.天津醫(yī)藥，2014;(9):912-4.

4 郭慶畬.內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)在2型糖尿病與肥胖中生化機(jī)制〔J〕.醫(yī)學(xué)綜述，2009;15(10):1458-61.

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6 郭超花，王 強(qiáng).內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)與阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征〔C〕.//首屆睡眠呼吸障礙性疾病多學(xué)科研討會(huì)論文集，2009:157-61.

7 趙維元.中樞類大麻受體拮抗劑利莫那班對(duì)2型糖尿病周圍神經(jīng)病變療效的實(shí)驗(yàn)分析〔J〕.神經(jīng)疾病與精神衛(wèi)生，2011;11(2):140-3.