張建宇 黃義彬 張莉

摘要：建立了固相萃取-高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定蔬菜中8種氨基甲酸酯農(nóng)藥（涕滅威亞砜、涕滅威砜、滅多威、三羥基克百威、涕滅威、克百威、甲萘威和抗蚜威）殘留的方法。蔬菜樣品采用乙腈提取，經(jīng)氨基小柱凈化，以（乙腈∶甲醇=8∶3，V/V）-水為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速1.0 mL/min，柱溫40 ℃，C18柱分離，檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm。結(jié)果表明，8種農(nóng)藥在蔬菜中的加標(biāo)回收率為75.3%～112.5%，相對(duì)偏差小于6%。該方法簡(jiǎn)便快速、準(zhǔn)確度高，符合實(shí)際應(yīng)用需要。

關(guān)鍵詞：蔬菜；氨基甲酸酯；固相萃??；高效液相色譜

中圖分類號(hào)：O657.7+2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2015）14-3510-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.14.046

Detecting Eight Kinds of Carbamate Pesticides in Vegetables by SPE-HPLC

ZHANG Jian-yu， HUANG Yi-bin， ZHANG Li

（Agricultural product quality safety supervision and Testing Center of Guiyang，Guiyang， 550004， China）

Abstract： The 8 kinds of carbamate pesticides （including aldicarb sulfoxide， aldicarb sulfone， methomyl， 3-hydroxy carbofuran， aldicarb， carbofuran， carbaryl， pirimicarb） in vegetables by solid phase extraction-high performance liquid chromatography （SPE-HPLC） was investigated. The samples were extracted by acetonitrile and purified by amino solid phase extraction column， and separated gradiently with the mobile phase consisting of acetonitrile methanol mixer（8∶3，V/V） and water on the column of C18 at 40 ℃， the flow rate was 1.0 mL/min，and the wavelengh was detected at 220 nm. The results showed that the recovery rate of 8 kinds of pesticides in vegetable was 75.3%～112.5%，RSD was less than 6%. This method is simple， rapid， accurate for detecting carbamate pesticide residues in vegetables.

Key words： vegetables； carbamate； SPE； HPLC

氨基甲酸酯類農(nóng)藥是一類高效、廣譜、低毒的殺蟲劑，具有分解快、殘留期短、選擇性強(qiáng)等特點(diǎn)，使用廣泛[1-4]。目前，氨基甲酸酯類農(nóng)藥的檢測(cè)方法主要為柱后衍生熒光檢測(cè)HPLC法[5-10]，但該方法需要配套柱后衍生系統(tǒng)和使用衍生化試劑，檢測(cè)成本居高不下。本研究運(yùn)用固相萃取技術(shù)對(duì)樣品的前處理過(guò)程進(jìn)行優(yōu)化，以HPLC紫外檢測(cè)法建立一種蔬菜中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的檢測(cè)技術(shù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Waters e2695 高效液相色譜儀，TOMTEC全自動(dòng)勻漿機(jī)、EVAP-112氮吹儀，上海安譜CNW氨基固相萃取小柱500 mg、色譜純甲醇、乙腈和二氯甲烷（美國(guó)Tedia）。

1.2 方法

1.2.1 提取與凈化 將25.0 g經(jīng)粉碎均質(zhì)后的蔬菜置于勻漿機(jī)中加入50 mL乙腈，勻漿2 min后過(guò)濾，收集濾液至100 mL具塞比色管中，加入6 g氯化鈉振蕩1 min后，室溫靜置30 min。吸取上層清液10.0 mL于小燒杯中，80 ℃氮吹至近干，用2.0 mL丙酮溶解，待凈化。加樣前將氨基柱用4.0 mL甲醇+二氯甲烷（1∶99，V/V）預(yù)洗活化，當(dāng)溶劑液面到達(dá)柱吸附層表面時(shí)，立即加入提取液，用15 mL離心管收集洗脫液。用2.0 mL甲醇+二氯甲烷（1∶99，V/V）沖洗燒杯后過(guò)柱，并重復(fù) 1 次，50 ℃氮吹至近干，甲醇溶解定容至2.0 mL，搖勻后過(guò)0.2 μm濾膜備用。

1.2.2 色譜條件 C18柱（250 mm×4.6 mm，5.0 μm），柱溫40 ℃，流動(dòng)相為（乙腈∶甲醇=8∶3，V/V）和水，梯度洗脫見表1，流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取液的選擇

分別比較甲醇、乙腈和丙酮的提取效果，結(jié)果表明，甲醇提取效果不佳，丙酮提取雜質(zhì)較多，干擾較大；乙腈毒性小、提取效果好、干擾少、操作簡(jiǎn)單且加標(biāo)回收率較高。本試驗(yàn)先用乙腈提取所需組分，再加入過(guò)量氯化鈉鹽析，使水相和有機(jī)相充分分離，從而使氨基甲酸酯農(nóng)藥進(jìn)入乙腈相。因此，本試驗(yàn)選取乙腈作為提取液。

2.2 凈化條件的選擇

固相萃取法是一種基于液相色譜分離機(jī)制的前處理方法，已廣泛應(yīng)用于農(nóng)藥殘留檢測(cè)工作。本試驗(yàn)采用C8、苯基柱和氨基固相柱凈化除雜，結(jié)果表明氨基固相小柱的凈化效果最佳。

2.3 色譜條件的選擇

流動(dòng)相對(duì)組分分離效果影響顯著。本試驗(yàn)選用甲醇-水和乙腈-水作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，結(jié)果發(fā)現(xiàn)無(wú)論是甲醇-水和乙腈-水體系都無(wú)法分離出8種目標(biāo)物：甲醇-水體系中出峰較晚的3種物質(zhì)無(wú)法有效分離，而乙腈-水體系中出峰較早的4種物質(zhì)無(wú)法有效分離。筆者先試驗(yàn)了不同體積比例的有機(jī)相體系（乙腈：甲醇分別為4∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶4），然后將有機(jī)相和水梯度洗脫，構(gòu)成三元流動(dòng)相體系，確定有機(jī)流動(dòng)相體系為乙腈∶甲醇=8∶3，然后再和水相混合進(jìn)行梯度洗脫，成功分離出8種目標(biāo)物組分。

8種目標(biāo)物組分有不同的最大吸收波長(zhǎng)，經(jīng)試驗(yàn)分別選取216、218、220、222、224、226和228 nm。最終確定選擇220 nm。

2.4 回收率和精密度

在上述條件下，在蔬菜樣品中加入0.5、1.0和4.0 mg/kg 3種濃度水平的添加回收試驗(yàn)，每種濃度水平重復(fù)3次，結(jié)果見表2。在3種添加水平上，8種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的平均回收率為75.3%～112.5%，RSD低于6%，符合農(nóng)藥多殘留檢測(cè)要求。

2.5 檢出限

按S/N=3計(jì)算，9 種氨基甲酸酯殺蟲劑及其代謝物的檢出限分別為：涕滅威亞砜0.02 mg/kg，涕滅威砜0.02 mg/kg，滅多威0.01 mg/kg，三羥基克百威0.02 mg/kg，涕滅威0.005 mg/kg，克百威0.01 mg/kg，甲萘威0.01 mg/kg，抗蚜威0.02 mg/kg。

3 小結(jié)

該試驗(yàn)采用乙腈提取蔬菜樣品中的目標(biāo)物，經(jīng)氨基小柱進(jìn)行固相萃取凈化。以（乙腈∶甲醇=8∶3，V/V）-水為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速1.0 mL/min，柱溫 40 ℃，C18柱分離，檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm，可實(shí)現(xiàn)蔬菜中8種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的檢測(cè)。該方法分離效果好、準(zhǔn)確度和精密度高，操作簡(jiǎn)單易行，勿需衍生和熒光檢測(cè)，適宜基層機(jī)構(gòu)檢測(cè)蔬菜中多種氨基甲酸酯類農(nóng)藥。

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