張彥飛等

[摘要] 目的 建立中藥茺蔚子中鹽酸水蘇堿的高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器測定方法。 方法 Asahipak NH2P 50 4E色譜柱（4.6 mm × 250 mm），流動相為乙腈-0.2%磷酸溶液（84∶16），體積流量1 mL/min，柱溫30℃。 結果 鹽酸水蘇堿在0.487～4.383 μg范圍內(nèi)線性關系良好，r = 0.9999，平均回收率為97.96%，RSD為0.92%。 結論 該法靈敏度高，專屬性強，可作為中藥茺蔚子中鹽酸水蘇堿的定量測定方法。

[關鍵詞] 茺蔚子；鹽酸水蘇堿；高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器法

[中圖分類號] R284.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2015）05（c）-0124-04

[Abstract] Objective To establish HPLC-ELSD determination method of the hydrochloric acid stachydrine in Motherwort Fruit. Methods The separation by HPLC-ELSD was performed on Asahipak NH2P 50 4E column （4.6 mm × 250 mm） with acetonitrile-0.2% phosphoric acid solution （84∶16） as mobile phase， 1 mL/min of flow rate and 30℃ of column temperature. Results Hydrochloric acid stachydrine at 0.487-4.383 μg had good linear relationship， r = 0.9999， the average recovery was 97.96%， RSD was 0.92%. Conclusion The method is sensitive， specific， it can be used as quantitative determination method of the hydrochloric acid stachydrine in Motherwort Fruit.

[Key words] Motherwort Fruit； Hydrochloric acid stachydrine； HPLC-ELSD

中藥茺蔚子又名益母草子，為唇形科植物益母草Leonurus japonicus Houtt.的干燥成熟果實。藥材多秋季果實成熟時采割地上部分，曬干，打下果實，除去雜質(zhì)。該中藥首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，味辛、苦，性微寒。歸心包、肝經(jīng)，具有活血調(diào)經(jīng)、清肝明目的功能。生茺蔚子長于清肝明目，用于目赤腫痛或目生翳膜[1-2]。

茺蔚子中含有益母草寧堿、水蘇堿及脂肪油，油中主要成分為油酸及亞麻酸，另含維生素A樣物質(zhì)，其中鹽酸水蘇堿是含量較高、活性較強的單體生物堿[3-5]，2010年版《中國藥典》對茺蔚子中鹽酸水蘇堿含量進行規(guī)定來評價藥材質(zhì)量[6]，本文對其提取方法、色譜條件進行優(yōu)化，采用蒸發(fā)光散射檢測器進行測定。本試驗以吉林省10個不同產(chǎn)地的中藥茺蔚子為研究對象，采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器法測定其鹽酸水蘇堿的含量，建立了可靠穩(wěn)定、重復性好的含量測定方法，為更方便、簡單、有效地控制中藥茺蔚子的質(zhì)量提供了科學依據(jù)，為適應國際市場，我國的中藥企業(yè)應制訂相應的規(guī)范化質(zhì)量標準。

1 儀器與試藥

LC-10ATvP型高效液相色譜儀（日本島津），蒸發(fā)光散射檢測器（上海分析儀器有限公司），空氣壓縮泵（天津市分析儀器廠），超聲波提取器（上海分析儀器有限公司），85-2A數(shù)顯測速恒溫磁力攪拌器（金壇市榮華儀器制造有限公司），80-2型電動離心機（江蘇金壇訕金國勝實驗儀器），百萬分之一電子天平，十萬分之一電子天平，超純水系統(tǒng)，水為超純水，磷酸、乙腈為色譜純，乙醇。

10批茺蔚子藥材采自吉林省各產(chǎn)地藥材[7-9]，均經(jīng)長春中醫(yī)藥大學姜大成教授鑒定為真品，鹽酸水蘇堿對照品（批號：110710-201310）規(guī)格為20 mg，購買于中國藥品生物制品檢定所。

2 方法與結果

2.1 鹽酸水蘇堿對照品溶液的制備

取鹽酸水蘇堿對照品，精密稱4.87 mg，完全轉(zhuǎn)入10 mL棕色容量瓶中，先加一定量70%乙醇溶解，待溶解完全后，定容至刻度，充分搖勻，即得（每毫升含鹽酸水蘇堿對照品0.487 mg）。

2.2 試驗供試品溶液的制備

取研磨后的茺蔚子粉末過四號篩，取過篩后的藥材粉末約0.25 g，精密稱定后記錄其準確重量，完全轉(zhuǎn)入干燥后的50 mL具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇25 mL，加塞，精密稱定重量，記錄，置入超聲提取器中處理（頻率40 kHz，功率250 W）30 min，待完全放冷后，再精密稱定其重量，使用70%乙醇補足與第一次稱量相比減少的重量，充分搖勻，置入漏斗中濾過，棄除濾液，精密取一定量續(xù)濾液，70%乙醇定容后即為供試品溶液[10-14]。

2.3 試驗色譜條件

以氨基鍵合聚合物為填充劑（色譜柱型號：Asahipak NH2P-50 4E 4.6 mm × 250 mm）；以乙腈-0.2%磷酸溶液（84∶16）為流動相，體積流量1 mL/min，柱溫30℃；蒸發(fā)光散射檢測器，該色譜條件下茺蔚子中鹽酸水蘇堿峰的分離度>1.5，拖尾因子在0.95～1.05。見圖1。

2.4 方法學考察

2.4.1 線性關系 分別精密吸取“2.1”項下鹽酸水蘇堿對照品溶液1、3、5、7、9 μL進入相應液相色譜儀，分別記錄相應峰面積值，橫坐標為進樣量（μg）取對數(shù)后的值，縱坐標為峰面積積分值取對數(shù)后的值[15-18]，制作標準曲線見圖2。相應的回歸方程為Y = 1.5503X + 2.1495，r = 0.9999，鹽酸水蘇堿線性范圍為0.487～4.383 μg，進樣量的對數(shù)與峰面積的對數(shù)之間有良好的線性關系。