曹恒濤　趙江紅

【摘 要】 目的：建立天麻頭痛片中歐前胡素和異歐前胡素的含量測(cè)定方法。方法：采用高效液相色譜儀，waters Symmetry C18色譜柱（4.6×250mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-乙腈-水為梯度洗脫；流速：1.0ml/min；柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：250nm。結(jié)果：歐前胡素在1.424～71.2μg/ml的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，加樣回收率為102.9%，RSD為1.45%；異歐前胡素在1.337～66.85μg/ml的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，加樣回收率為102.5%，RSD為1.85%。結(jié)論：所建立的方法可以用來(lái)檢測(cè)天麻頭痛片中歐前胡素和異歐前胡素的含量。

【關(guān)鍵詞】 高效液相色譜；天麻頭痛片；歐前胡素；異歐前胡素

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2015）12-0005-02

天麻頭痛片具有養(yǎng)血祛風(fēng)、散寒止痛的功效，臨床用于治療頭痛、血虛頭痛，血瘀頭痛。方中天麻為君藥，治一切頭風(fēng)；白芷祛風(fēng)散寒、通竅止痛，為臣藥。2010版《中國(guó)藥典》[1]測(cè)定了天麻頭痛片中天麻素的含量，但對(duì)白芷中起止痛作用的香豆素類成分含量未曾測(cè)定。歐前胡素和異歐前胡素是白芷的香豆素類的代表性成分[2]，本文采用HPLC測(cè)定天麻頭痛片中歐前胡素和異歐前胡素的含量，為完善天麻頭痛片的質(zhì)量控制提供了快速準(zhǔn)確地測(cè)定方法。

1 儀器與材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器 Waterse 2695高效液相色譜儀（美國(guó)waters公司）；MSA225-000-DU型電子天平（德國(guó)賽多利斯公司）。

1.2 試劑與樣品 歐前胡素（批號(hào)：110827-201109，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；異歐前胡素（批號(hào)：110826-201214，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；甲醇、乙腈（色譜純，J.T.BAKER）；超純水為Molecular純水機(jī)制備；天麻頭痛片（批號(hào)：121203，遼寧中醫(yī)學(xué)院制藥有限公司；批號(hào)：130401，沈陽(yáng)東新藥業(yè)有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Waters Symmetry C18柱（4.6×250mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈∶甲醇∶水；檢測(cè)波長(zhǎng)：250 nm；流速：1.0 ml/min；柱溫：25℃。流動(dòng)相梯度如表1。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取歐前胡素與異歐前胡素對(duì)照前，加甲醇配置成濃度分別為0.01424mg/ml及0.01337mg/ml的混合對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取樣品10片，除去糖衣后，研細(xì)，精密稱取1g，精密加入甲醇50ml，稱定重量，超聲提取30min，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，即得。

2.4 陰性對(duì)照樣品的制備 按處方制備不含白芷的藥物，按照“2.3”項(xiàng)的方法制備陰性對(duì)照樣品溶液。

2.5 線性關(guān)系的考察 分別取混合對(duì)照品溶液1、5、10、20、30、40、50μl，按“2.1”色譜條件測(cè)定峰面積。以峰面積（Y，A）和進(jìn)樣量（X，μg）做標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，歐前胡素在1.424～71.2uμg/ml范圍內(nèi)成良好的線性關(guān)系，回歸方程為y= 47253X+1520.6，r=0.9999；異歐前胡素在1.337～66.85μg/ml范圍內(nèi)成良好的線性關(guān)系，回歸方程為y= 44432X+347.82，r=0.9999。

2.6 精密度 取混合對(duì)照品溶液，進(jìn)樣6次。測(cè)得歐前胡素、異歐前胡素峰面積值的RSD分別為0.81%、0.98%。表明儀器的精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取混合標(biāo)準(zhǔn)液，分別在0、2、5、12、24、30h進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。測(cè)得歐前胡素、異歐前胡素峰面積值的RSD分別為0.81%、0.98%，表明供試品溶液在30h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一樣品制備的供試品溶液6份，按“2.1”色譜條件進(jìn)樣，計(jì)算樣品中歐前胡素和異歐前胡素含量。歐前胡素含量的RSD為0.70%，異歐前胡素含量的RSD為1.41%。表明實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率測(cè)定 取片劑30片，除去糖衣后，研細(xì)，精密稱取1.2g 6份，分別精密加入歐前胡素0.4272mg，異歐前胡素0.1337mg，精密加入甲醇50ml，稱定重量，超聲提取30min，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，進(jìn)樣，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.10 樣品測(cè)定 取樣品2份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測(cè)定，計(jì)算樣品中歐前胡素與異歐前胡素的含量。天麻頭痛片（批號(hào)：121203）的歐前胡素含量為0.33mg/g、異歐前胡素含量為0.13mg/g ；天麻頭痛片（批號(hào)：130401）的歐前胡素含量為0.39mg/g，異歐前胡素含量為0.13mg/g。

3 討論

3.1 波長(zhǎng)的選擇 歐前胡素在249nm和300nm有最大吸收，異歐前胡素在251和310nm處有最大吸收。本文選擇250nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)，同時(shí)測(cè)定歐前胡素與異歐前胡素能夠具有較好的靈敏度。

3.2 流動(dòng)相的選擇 實(shí)驗(yàn)中比較了甲醇-水梯度洗脫和乙腈-水梯度洗脫，發(fā)現(xiàn)兩種方法在待測(cè)峰處均有小雜峰難以分離，但雜峰干擾情況不相同。因此本文采用了乙腈-甲醇-水梯度洗脫，得到的分離效果和峰型都較好。

3.3 本文通過(guò)測(cè)定天麻頭痛片中歐前胡素和異歐前胡素，提高和完善了天麻頭痛片的質(zhì)量控制方法。所建立的方法簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確，分離度與重現(xiàn)性好，可以用來(lái)控制天麻頭痛片的質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：518-519.

[2]胡華杰，樓招歡，呂圭源，等.HPLC測(cè)定不同產(chǎn)地白芷飲片中歐前胡素和異歐前胡素的含量 [J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，34（3）：418-420.

（收稿日期：2015.04.18）