楊海玲　胡昌江　曾春暉等

摘要

近年來，中藥指紋圖譜技術(shù)在中藥炮制研究中也得到廣泛的應用。通過查閱相關(guān)文獻資料，介紹中藥指紋圖譜技術(shù)在產(chǎn)地加工及凈制過程中的應用、在中藥切制過程中的應用、在炮制輔料質(zhì)量評價研究中的應用、在炮制工藝研究中的應用、在飲片不同炮制方法比較及質(zhì)量控制研究中的應用。

關(guān)鍵詞 指紋圖譜技術(shù)；中藥炮制；應用

中圖分類號 S859.3 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2015）15-018-02

中藥炮制是我國一項傳統(tǒng)制藥技術(shù)。飲片作為中醫(yī)臨床用藥基本形式之一，其質(zhì)量的優(yōu)劣將直接影響中醫(yī)臨床療效。中藥指紋圖譜分為中藥化學成分指紋圖譜和中藥生物技指紋圖譜兩大類[1]，具有“整體性”與“模糊性”的特點。中藥指紋圖譜中潛藏著大量反映中藥及其復方制劑內(nèi)在化學物質(zhì)信息的數(shù)據(jù)和變量，可對樣品的整體輪廓進行較直觀地觀察，能較全面地反映所含成分的相對關(guān)系，還能較好地體現(xiàn)中藥成分的復雜性和相關(guān)性。因此，能更好地鑒別炮制品種，評價、控制炮制品的質(zhì)量，保證中醫(yī)臨床療效，從而有利于中藥的現(xiàn)代化和國際化。近年來，中藥指紋圖譜技術(shù)在中藥炮制研究中也得到廣泛的應用。

1 在產(chǎn)地加工及凈制過程中的應用

中藥炮制的凈制是指在藥材切制、炮炙或調(diào)配、制劑前，選取規(guī)定的藥用部分，除去非藥用部位、雜質(zhì)及霉變品、蟲蛀品、灰屑等，使其達到藥用的純度標準的方法。將中藥指紋圖譜的技術(shù)運用到藥材的凈制處理中，為飲片質(zhì)量提供保證。王莉等[2]利用HPLC法建立了通過凈制后湖北貝母的指紋圖譜。該方法可以有效地控制湖北貝母飲片的質(zhì)量以及對炮制工藝的評價，為進一步研究貝母炮制機理提供參考。仇立志[3]通過HPLC法建立不同產(chǎn)地懷牛膝飲片、最佳工藝硫磺熏蒸鮮牛膝飲片的指紋圖譜，為硫磺熏蒸懷牛膝篩選最佳炮制工藝，并且為懷牛膝飲片的質(zhì)量評價及安全使用提供依據(jù)。劉艷芳等[4]運用多指標定量結(jié)合指紋圖譜分析方法對遠志根皮、根及木心的化學成分進行分析。該研究為遠志科學炮制加工方法的制定提供參考。

2 在中藥切制過程中的應用

飲片切制是指將凈選后的藥物進行軟化，切成一定規(guī)格的片、絲、塊、段等炮制工藝。李友等[5]采用正交設(shè)計，以藥材軟化時加水量、潤制時間和飲片切制厚度為考察因素，以水溶性浸出物為指標，并且采用HPLC指紋圖譜技術(shù)對板藍根粗粉和水潤切制后的飲片進行比較，最終建立板藍根軟化切制的最佳工藝，建立了板藍根藥材醋酸乙酯萃取物HPLC指紋圖譜。該研究證實在板藍根切制前后指紋圖譜對照譜圖差異明顯，切制后中等極性部分損失較多。

3 在炮制輔料質(zhì)量評價研究中應用

加入某些輔料進行炮制，可起到增強療效、降低毒性等作用。輔料的質(zhì)量將影響中藥飲片的質(zhì)量、臨床療效，那么可運用指紋圖譜技術(shù)對其質(zhì)量進行監(jiān)控。張麗等[6]對生姜榨汁、生姜煮汁、干姜煮汁3種不同制法所得炮制輔料姜汁進行RPHPLC指紋圖譜的比較研究。該方法較全面地反映不同制法的姜汁間的差異。

4 在炮制工藝研究中應用

在中藥炮制工藝過程中，須講究火候。利用指紋圖譜技術(shù)，控制炮制工藝，大大提高飲片的炮制的質(zhì)量，可為進一步的飲片炮制方法及原理研究提供科學依據(jù)。何曉燕等[7]用 HPLC 指紋圖譜對檳榔炒制過程物質(zhì)基礎(chǔ)變化進行研究，為揭示檳榔炮制原理提供依據(jù)。張洪利等[8]通過正交試驗設(shè)計，采用HPLC指紋圖譜技術(shù)結(jié)合抑菌藥效試驗優(yōu)選姜黃連飲片最佳工藝。劉艷菊等[9]采用X射線衍射法優(yōu)選水飛朱砂炮制工藝，建立朱砂水飛炮制工藝質(zhì)量控制的新方法。

5 在飲片不同炮制方法比較及質(zhì)量控制研究中應用

5.1 薄層色譜指紋圖譜

TCL指紋圖譜多用于中藥飲片各種成分的定性鑒別。徐臘英等[10]采用薄層鑒別方法研究蒼術(shù)麩炒前后的化學成分變化。該方法可用于蒼術(shù)藥材的定性鑒別和輔料的研究。高曉霞等[11]運用薄層色譜指紋圖譜方法，對10份不同采集地制何首烏樣品進行研究。該方法可快速、有效地鑒別制何首烏，并且為評價其質(zhì)量及品種整理提供新的證據(jù)。王彥青[12]采用薄層指紋圖譜對延胡索的醋烘、醋煮、醋炙、酒炙的炮制品進行鑒別研究，為醋元胡臨床用藥的有效性奠定基礎(chǔ)。

5.2 高效液相指紋圖譜

HPLC具有分離效能高、分析速度快等優(yōu)點。它在中藥飲片炮制前后比較中有廣泛運用。曹建軍等[13]利用HPLC指紋圖譜技術(shù)檢測生地黃炮制成熟地黃過程中梓醇等主要活性成分及指紋的變化，確定熟地黃炮制終點。朱明貴等[14]采用 HPLC法建立生、醋五味子指紋圖譜，為五味子飲片的質(zhì)量評價標準提供科學依據(jù)。孔繁瑤等[15]對豨薟草生品及炮制一至九制品進行HPLC指紋圖譜研究，為豨薟草炮制過程中化學成分變化規(guī)律和進一步闡明其療效的改變奠定基礎(chǔ)。耿媛媛等[16]采用 HPLC 法建立二神丸不同提取部位的指紋圖譜，采用灰關(guān)聯(lián)分析法建立其譜效關(guān)系，為二神丸的質(zhì)量評價及其炮制機制奠定基礎(chǔ)。

5.3 氣相色譜指紋圖譜

GC主要運用于含揮發(fā)性成分的中藥飲片及其制劑中揮發(fā)油的鑒別與比較。在具體使用時，它常與質(zhì)譜檢測器（MS）聯(lián)用。吳國清等[17]運用毛細管氣相色譜法對薏苡仁生品及炮制品提取物進行分析，為薏苡仁生品及炮制品的質(zhì)量控制提供有效手段。盛菲亞等[18]采用GCMS法，建立了香附生品、參照品和醋制品中揮發(fā)油的指紋圖譜，為揭示香附醋制機制及其物質(zhì)基礎(chǔ)提供一定的科學依據(jù)。耿媛媛等[19]采用GCMS分析二神丸中補骨脂和肉豆蔻的炮制對其4種組合揮發(fā)性成分的影響。該研究證實補骨脂和肉豆蔻炮制后入藥可降低毒性。王加等[20]利用GCMS聯(lián)用技術(shù)鑒別生川烏和制川烏揮發(fā)性成分，為川烏的進一步研究提供科學依據(jù)。

5.4 高效毛細管電泳指紋圖譜

目前，高效毛細管電泳指紋圖譜主要運用于中藥炮制品成分分析與比較研究。施婧妮等[21]利用毛細管區(qū)帶電泳法，建立了10 批生鱉甲與醋鱉甲有效物質(zhì)部位的指紋圖譜，并且進行對比研究。結(jié)果顯示，鱉甲炮制前后化學成分發(fā)生“質(zhì)”與“量”的變化。胡瑩[22]采用高效毛細管電泳法測定金櫻子及其炮制品的指紋圖譜。該結(jié)果可作為金櫻子飲片質(zhì)量的評價依據(jù)。張英等[23]運用高效毛細管電泳法對杜仲炮制前后綠原酸的含量進行分析。該研究為杜仲炮制具有重要意義提供依據(jù)。

5.5 紅外光譜指紋圖譜

紅外光譜指紋圖譜技術(shù)在飲片炮制前后比較及其制劑中應用較多。吳明俠等[24]采用傅里葉變換紅外光譜技術(shù)對野菊花不同炮制品進行研究，獲得二者的紅外譜、二階導數(shù)譜和二維相關(guān)紅外譜。尤淑霞等[25]分別測定白礬與其炮制品枯礬的紅外光譜圖譜，為白礬與枯礬的鑒別提供紅外光譜的鑒別指標。李可藏等[26]比較了山茱萸炮制前后紅外光譜圖差異，為山茱萸生品、酒制品鑒別提供新的方法。畢曉黎等[27]對補骨脂與鹽補骨脂配方顆粒紅外光譜特征進行研究。該方法快速、準確地鑒別補骨脂與鹽補骨脂配方顆粒。

5.6 紫外光譜指紋圖譜

紫外光譜可分為導數(shù)光譜及紫外譜線組法兩種，可用于中藥炮制品的質(zhì)量監(jiān)控。翁德會等[28]采用紫外譜線組法，對厚樸飲片和姜厚樸飲片4種不同極性提取液進行紫外掃描，并且應用UV測定厚樸中酚性成分的含量，為厚樸的研究和質(zhì)量監(jiān)控提供參考。鄭玉麗[29]采用紫外分光光度法，比較生乳香、清炒乳香、醋炙乳香中三萜類有機酸含量，其中以醋炙品乳香三萜類有機酸含量最高。

5.7 X射線衍射Fourier指紋圖譜

許臘英[30]等運用X射線衍射Fourier指紋圖譜法對烏梅以及烏梅輕炭、烏梅標炭、烏梅重炭粉末進行分析，結(jié)果表明烏梅、烏梅炭粉末XRD圖譜重現(xiàn)性好，均具指紋特征，可作為鑒別指標。雷雨等[31]采用X射線衍射指紋圖譜分析方法，分析不同產(chǎn)地、批次的自然銅生煅品X射線衍射指紋圖譜。該方法從整體上顯示生煅品的特征，為自然銅生煅品的質(zhì)量控制提供有效手段。

5.8 中藥生物技術(shù)指紋圖譜

中藥生物指紋圖譜又叫DNA指紋圖譜。這種技術(shù)主要有 DNA片段分析技術(shù)（RFLP）、任意引物聚合酶鏈式反應（APPCR）、隨機擴增多態(tài)性（RAPD）、多聚酶鏈反應（PCR）等。目前，該項技術(shù)在炮制研究也有一定的應用。許臘英等[32]對不同產(chǎn)地的茅蒼術(shù)炮制前后進行 DNA指紋圖譜研究，結(jié)果表明不同產(chǎn)地的茅蒼術(shù)生品 DNA指紋圖譜一致，幾種麩炒蒼術(shù)的 DNA指紋圖譜與生品有較大差異。該方法可用于鑒別同種藥材的生品。許臘英等[33]采用RAPD技術(shù)對不同產(chǎn)地烏梅、烏梅炭進行研究，結(jié)果表明不同產(chǎn)地的烏梅生品 DNA 指紋圖譜一致；經(jīng)炮制后的烏梅炭 DNA 指紋圖譜與生品有較大的差異。該研究RAPD 技術(shù)可作為烏梅生品道地品種的鑒定的參考方法。

6 結(jié)語

中藥指紋圖譜的建立能全面反映中藥的整體化學、生物學特征，體現(xiàn)其內(nèi)在的整體質(zhì)量。該項技術(shù)在中藥炮制研究中的發(fā)展與應用，不僅能夠客觀地評價炮制過程對藥物的影響，而且能進一步提高中藥飲片標準化程度，從而更好地控制炮制品的質(zhì)量，保證和提高臨床療效。這必將在今后實現(xiàn)中藥現(xiàn)代化及中醫(yī)藥走向世界過程中發(fā)揮重要的作用。

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