楊 蓉，孫 萍，宋芳霞，李 佩，王 建

(1.陜西省第二人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 西安710004；2.陜西省腫瘤醫(yī)院婦瘤科，陜西 西安710061；3.第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 西安710033)

干擾素介導(dǎo)的跨膜蛋白1在卵巢上皮性癌中的表達(dá)

楊 蓉1，孫 萍2，宋芳霞1，李 佩1，王 建3

(1.陜西省第二人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 西安710004；
2.陜西省腫瘤醫(yī)院婦瘤科，陜西 西安710061；3.第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 西安710033)

目的 探討卵巢上皮性癌中干擾素介導(dǎo)的跨膜蛋白1(IFITM1)基因的表達(dá)及其臨床意義。方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)檢測(cè)42例正常卵巢、51例卵巢良性腫瘤、48例卵巢交界性腫瘤和85例卵巢上皮性癌組織中IFITM1的陽(yáng)性表達(dá)，同時(shí)分析IFITM1蛋白表達(dá)狀況與上皮性卵巢癌各臨床病理因素之間的關(guān)系。結(jié)果 免疫組化顯示IFITM1蛋白表達(dá)強(qiáng)度在正常卵巢、良性卵巢腫瘤、交界性卵巢腫瘤、上皮性卵巢癌間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.407，P=0.004)。正常卵巢組織中IFITM1陽(yáng)性表達(dá)率為40.5%(17/42)，卵巢良性腫瘤組織中70.5%(36/51)，卵巢交界性腫瘤組織中為70.8%(34/48)，卵巢上皮性癌中為77.6%(66/85)，IFITM1的陽(yáng)性表達(dá)率在4種卵巢組織中比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=18.491，P<0.001)。IFITM1在上皮性卵巢癌中的表達(dá)與FIGO分期、細(xì)胞分化程度和組織學(xué)類型性有關(guān)(χ2值分別為4.307、6.959、8.539，均P<0.05)，早期卵巢癌(Ⅰ+Ⅱ)中IFITM1蛋白表達(dá)低于晚期卵巢癌(Ⅲ+Ⅳ)，χ2=4.307，P=0.038)，隨著腫瘤細(xì)胞分化程度的降低，IFITM1表達(dá)率逐漸增高。IFITM1蛋白表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移、腹水無統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性(χ2值分別為0.111、0.024，均P>0.05)。耐藥性卵巢癌中IFITM1陽(yáng)性表達(dá)顯著高于敏感組(χ2=34.843，P<0.001)。結(jié)論 IFITM1表達(dá)在卵巢上皮性癌組織中明顯高于正常卵巢、卵巢良性腫瘤和卵巢交界性腫瘤，提示IFITM1參與了卵巢癌的發(fā)生和進(jìn)展，并對(duì)以鉑類為基礎(chǔ)的化療耐藥性產(chǎn)生有臨床預(yù)測(cè)價(jià)值。

卵巢腫瘤；干擾素介導(dǎo)的跨膜蛋白1基因；免疫組織化學(xué)；耐藥；DNA損傷

卵巢癌是我國(guó)女性生殖系統(tǒng)最致命的惡性腫瘤，因缺乏成熟的早期診斷方法，臨床確診時(shí)70%已屬晚期，即使?jié)M意的腫瘤減滅術(shù)及正規(guī)的化療治療，絕大多數(shù)患者仍會(huì)復(fù)發(fā)，因此尋找特異而靈敏的腫瘤標(biāo)志物對(duì)卵巢癌的早期基因診斷及提高生存率具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。干擾素介導(dǎo)的跨膜蛋白1(interferon-induced transmembrane protein 1，IFITM1)的基因產(chǎn)物是淋巴細(xì)胞參與傳遞抗增殖和同型抗粘附信號(hào)的復(fù)合體之一。近年有關(guān)IFITM1高表達(dá)的研究報(bào)道[1]有直腸癌、結(jié)腸癌、胃癌、肺癌及頭頸部鱗癌。國(guó)外在卵巢癌基因表達(dá)分析中發(fā)現(xiàn)IFITM1是最有潛在前途的分子標(biāo)志物，而國(guó)內(nèi)尚無報(bào)道。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)正常卵巢組織、良性卵巢腫瘤、交界性卵巢腫瘤及上皮性卵巢癌中IFITM1的表達(dá)水平，探討IFITM1與卵巢癌的病理分期、國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(international federation of gynecology and obstetrics, FIGO)分期、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移、腹水、化療耐藥的相關(guān)性，初步揭示IFITM1在卵巢癌早期診斷及化學(xué)治療方面的意義。

1 材料和方法

1.1 材料

選擇第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院、陜西省腫瘤醫(yī)院和陜西省第二人民醫(yī)院2005年1月至2013年1月經(jīng)手術(shù)確診的初治卵巢上皮癌患者85例，年齡20～81(中位48)歲，其中漿液性囊腺癌39例，粘液性囊腺癌24例，子宮內(nèi)膜樣癌5例，未分化腺癌17例。按FIGO手術(shù)病理分期為標(biāo)準(zhǔn)，其中Ⅰ期16例，Ⅱ期7例，Ⅲ期51例，Ⅳ期11例。組織學(xué)分級(jí)中高分化13例，中分化48例，低分化24例。術(shù)前均未經(jīng)放化療治療，術(shù)后均給予鉑類為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療，隨訪68例，失訪17例。選擇同期住院手術(shù)的良性卵巢腫瘤患者51例，年齡23～68(中位43.6)歲，交界性卵巢腫瘤48例，年齡20～65(中位41.5)歲，正常卵巢42例，年齡36～67(中位46.3)歲作為對(duì)照。臨床收集的所有標(biāo)本福爾馬林固定并石蠟包埋，試劑采用兔抗人IFITM1單克隆抗體，兔抗人β-actin單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Abcam公司，化學(xué)發(fā)光試劑，Braford工作液，SP免疫組化試劑盒和DAB顯色劑均購(gòu)自北京中杉金橋生物有限公司。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)染色

福爾馬林固定，石蠟包埋組織標(biāo)本，5μm切片后，37℃過夜，HE染色復(fù)核并行SP免疫組化。陰性對(duì)照采用生理鹽水磷酸鹽緩沖液(phosphate buffer solution，PBS)替代一抗，以前期試驗(yàn)中已知的陽(yáng)性病例為陽(yáng)性對(duì)照。二甲苯脫蠟3次，酒精脫水，3%H2O2-甲醇滅活內(nèi)源性過氧化物酶，室溫10分鐘，PBS沖洗，煮沸15 分鐘抗原修復(fù)，5%BSA牛血清白蛋白(bovine serum albumin，BSA)封閉20分鐘，滴加IFITM1一抗，4℃過夜，PBS沖洗，滴加二抗A液(DAKO REALTMEnVision復(fù)合物)，室溫孵育45分鐘，滴加新鮮配置的DAB顯色液，蘇木素復(fù)染。顯微鏡為Nikon Eclipse Ti-SR。

免疫陽(yáng)性信號(hào)為棕黃色細(xì)小顆粒，根據(jù)文獻(xiàn)[2]中半定量積分法記錄切片中陽(yáng)性細(xì)胞的染色強(qiáng)度和染色細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)并分級(jí)計(jì)分。染色強(qiáng)度分為4級(jí)：深棕色為3分，棕黃色為2分，淺黃色為1分，不顯色為0分。每張切片隨機(jī)選取10個(gè)高倍視野記錄染色細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，>75%為4分, 50%～75%為3分，25%～50%為2分，5%～25%為1分，<5%為0分。兩項(xiàng)相加之和>5分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)，3～5分為陽(yáng)性(++)，1～3分為弱陽(yáng)性(+)，<1分為陰性(-)。

1.2.2 卵巢癌鉑類化療敏感性評(píng)價(jià)

卵巢癌患者根據(jù)2012年美國(guó)國(guó)立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)(National Comprehensive Cancer Network, NCCN)《卵巢癌臨床實(shí)踐指南》建議的分型，對(duì)于鉑類初次化療后達(dá)到臨床完全緩解，停藥超過6個(gè)月復(fù)發(fā)為鉑類敏感性卵巢癌，6個(gè)月內(nèi)復(fù)發(fā)為鉑類耐藥性卵巢癌[3]。隨訪的68例卵巢上皮癌初治患者，均進(jìn)行了至少6個(gè)療程的鉑類為基礎(chǔ)的規(guī)范輔助化療(PT方案：多西他賽+奧沙利鉑)，隨訪項(xiàng)目包括：婦科檢查、影像學(xué)檢查(盆腔B超、CT、MRI、必要時(shí)PET檢查)、CA125等進(jìn)行客觀評(píng)價(jià)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，對(duì)等級(jí)資料比較用秩和檢驗(yàn)，對(duì)計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)， 以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 干擾素介導(dǎo)的跨膜蛋白1在各組的表達(dá)結(jié)果

IFITM1陽(yáng)性表達(dá)為棕黃色細(xì)顆粒，定位于細(xì)胞胞膜上。染色強(qiáng)度在正常卵巢、良性卵巢腫瘤組織、交界性卵巢腫瘤組織和卵巢癌組織中強(qiáng)弱不等，呈逐漸增強(qiáng)趨勢(shì)，組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.407，P=0.004)，見附圖。在卵巢上皮性癌組織中IFITM1的陽(yáng)性表達(dá)率為77.6%(66/85)顯著高于其他3組，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=18.491，P<0.001)，見表1。

2.2 干擾素介導(dǎo)的跨膜蛋白1表達(dá)與卵巢癌臨床病理特征間的關(guān)系

匯總臨床資料顯示，IFITM1在上皮性卵巢癌的表達(dá)與FIGO分期、細(xì)胞分化程度和組織學(xué)類型有關(guān)(χ2值分別為4.307、6.959、8.539，均P<0.05)，早期卵巢癌(Ⅰ+Ⅱ)中IFITM1蛋白表達(dá)低于晚期卵巢癌(Ⅲ+Ⅳ)(χ2=4.307，P=0.038)，隨著腫瘤細(xì)胞分化程度的降低，IFITM1表達(dá)率逐漸增高。IFITM1蛋白表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移、腹水無統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性(χ2值分別為0.111、0.024，均P>0.05)，見表2。

注：A為正常卵巢中的表達(dá)，B為良性卵巢腫瘤中的表達(dá)，C為交界性卵巢腫瘤中的表達(dá)，D為上皮性卵巢癌中的表達(dá)，N為陰性對(duì)照。

附圖 IFITM1在四種卵巢組織中的表達(dá)(×200)

Fig. Expressions of IFITM1 in four kinds of ovarian tissues (×200)

表1 IFITM1在4種卵巢組織中的表達(dá)[n(%)]

注：▲為與正常卵巢組比較，★為與上皮性卵巢癌比較。

表2 IFITM1蛋白的表達(dá)與卵巢癌臨床病理因素的關(guān)系[n(%)]

Table 2 Relationship between expression of IFITM1 and the clinical and pathological factors of ovarian carcinoma[n(%)]

注：aP<0.05 VS Ⅰ+Ⅱ期；bP<0.05 VS 高、中分化；cP<0.05 vs其他3種病理類型。

2.3 卵巢癌干擾素介導(dǎo)的跨膜蛋白1表達(dá)與鉑類為基礎(chǔ)的化療敏感性的關(guān)系

本實(shí)驗(yàn)對(duì)所有隨訪對(duì)象進(jìn)行療效評(píng)價(jià)，其中敏感組51例，耐藥組17例，敏感性卵巢癌中有38例IFITM1表達(dá)陽(yáng)性，耐藥性卵巢癌中有16例IFITM1表達(dá)陽(yáng)性，敏感性卵巢癌中IFITM1陽(yáng)性表達(dá)顯著高于耐藥組(χ2=34.82，P<0.001)，見表3。

表3 卵巢癌IFITM1表達(dá)與鉑類化療敏感性的關(guān)系[n(%)]

3 討論

3.1 干擾素介導(dǎo)的跨膜蛋白1與卵巢癌等惡性腫瘤的關(guān)系

IFITM1是干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白家族的一員，也稱Leu-13或9-27，基因定位于人類11號(hào)染色體p15.5區(qū)域，其啟動(dòng)子區(qū)含有干擾素刺激反應(yīng)元件，可被誘導(dǎo)組成蛋白復(fù)合物參與人類多種腫瘤的增生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移[4]。本實(shí)驗(yàn)率先開展IFITM1與卵巢癌是否相關(guān)的研究。采用免疫組化方法發(fā)現(xiàn)，卵巢癌組織中IFITM1表達(dá)明顯較正常卵巢和卵巢良性腫瘤明顯上調(diào)，提示IFITM1基因表達(dá)可能是卵巢癌的一個(gè)早期事件。

本研究結(jié)果表明，IFITM1表達(dá)與病理類型、手術(shù)分期和細(xì)胞學(xué)分化程度有關(guān)(P<0.05)。IFITM1表達(dá)在晚期和低分化卵巢癌中表達(dá)顯著提高，提示IFITM1的表達(dá)隨著卵巢癌惡性生物學(xué)行為進(jìn)展而增強(qiáng)，推測(cè)IFITM1可能成為卵巢癌病情評(píng)估的新基因[5]。IFITM1在其他惡性腫瘤中的作用正日益受到廣泛關(guān)注。Hatano等[6]通過實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)研究發(fā)現(xiàn)，IFITM1基因在頭頸部癌的表達(dá)明顯上調(diào)，并參與腫瘤的增殖、浸潤(rùn)和淋巴轉(zhuǎn)移。研究提示IFITM1的表達(dá)水平在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中顯著增高，作為免疫細(xì)胞因子協(xié)同補(bǔ)體C3、C4參與疾病的的病理發(fā)展和治療[7]。Fumoto等[8]通過質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)檢測(cè)IFITM1在組織水平和細(xì)胞水平的表達(dá)，證實(shí)IFITM1在食管癌中過度表達(dá)，并與順鉑化療敏感性有統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)。調(diào)控區(qū)27CpG位點(diǎn)的DNA甲基化定量研究顯示，啟動(dòng)子甲基化參與胃癌IFITM1特異性過表達(dá)的調(diào)控，對(duì)胃癌的侵襲有預(yù)測(cè)作用[8]。

3.2 IFITM1與卵巢上皮性癌耐藥的關(guān)系

卵巢上皮性癌是最常見的卵巢惡性腫瘤[9]，大多數(shù)患者就診時(shí)已處于晚期，標(biāo)準(zhǔn)的腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)聯(lián)合鉑類為基礎(chǔ)的輔助性化療，即使暫時(shí)獲得臨床完全緩解，但85%～90%的患者最終仍會(huì)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移[10]，5年生存率在所有婦科惡性腫瘤中最低。近年來復(fù)發(fā)性卵巢癌的耐藥研究成為熱點(diǎn)領(lǐng)域，眾多研究都致力于通過解決卵巢癌耐藥性問題來提高化療效果。目前已證實(shí)，耐藥性卵巢癌內(nèi)的DNA修復(fù)速度加快[1]。本研究發(fā)現(xiàn)，鉑類耐藥組中IFITM1強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)比例(94.1%)明顯高于鉑類敏感租(74.5%)，結(jié)果顯示IFITM1表達(dá)強(qiáng)度與鉑類為基礎(chǔ)的化療藥物的敏感性相關(guān)，對(duì)預(yù)測(cè)療效有提示作用。

綜上所述，本研究初步推測(cè)IFITM1參與了卵巢癌發(fā)生發(fā)展和鉑類耐藥產(chǎn)生，檢測(cè)IFITM1有望為臨床預(yù)測(cè)化療敏感性和靶向治療提供新依據(jù)。

[1]Lee J, Goh S H, Song N,etal.Overexpression of IFITM1 has clinicopathologic effects on gastric cancer and is regulated by an epigenetic mechanism[J].Am J Pathol, 2012,181(1):43-52.

[2]馬婭梅,吳保平,夏歐東.干擾素誘導(dǎo)的跨膜蛋白1在Peutz-Jeghers綜合征的表達(dá)及意義[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2009,29(3):541-543,547.

[3]Zhang Y, Wang J, Xiang D B,etal.Alterations in the expression of the apurinic/apyrimidinic endonuclease-1/redox factor-1 (APE1/Ref-1) in human ovarian cancer and indentification of the therapeutic potential of APE1/Ref-1 inhibitor[J].Int J Oncol,2009,35(5):1069-1079.

[4]樊軍衛(wèi), 唐華美, 王兆文, 等. 應(yīng)用結(jié)腸癌基因表達(dá)譜數(shù)據(jù)整合分析篩選腫瘤相關(guān)基因[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2010,27 (6) : 754-756.

[5]袁森,田明堯,崔鶴馨,等.人干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白基因?qū)崟r(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立[J].中國(guó)生物制品學(xué)雜志,2013,26(5):710-716,725.

[6]Hatano H, Kudo Y, Ogawa I,etal.IFN-induced transmembrane protein 1 promotes invasion at early stage of head and neck cancer progression[J].Clin Cancer Res, 2008,14(19):6097-6105.

[7]朱桂啟,趙陰環(huán),劉美霞,等.系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者干擾素誘導(dǎo)的基因IFITM1, IFITM2和IFITM3表達(dá)的研究[J].中華臨床醫(yī)師雜志(電子版),2011,5(5):95-98.

[8]Fumoto S, Shimokuni T, Tanimoto K,etal. Selection of a novel drug-response predictor in esophageal cancer:A novel screening method using microarray and identification of IFITM1 as a potent marker gene of CDDP response[J].Int J Oncol, 2008, 32(2):413-423.

[9]豐有吉,沈鏗,馬丁,等.婦產(chǎn)科學(xué)(全國(guó)高等學(xué)校八年制臨床醫(yī)學(xué)專業(yè))[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2009:330-332.

[10]沈鏗, 郎景和. 婦科面臨的問題和挑戰(zhàn)[M]. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 2009: 112-117.

[專業(yè)責(zé)任編輯：楊文方]

Expression of IFITM1 in epithelial ovarian carcinoma

YANG Rong1, SUN Ping2, SONG Fang-xia1, LI Pei1, WANG Jian3

(1.DepartmentofGynecologyandObstetrics,SecondPeople’sHospitalofShaanxiProvince,ShaanxiXi’an710004,China;
2.DepartmentofGynecologyOncology,ShaanxiProvincialTumorHospital,ShaanxiXi’an710061,China;
3.DepartmentofGynecologyandObstetrics,XijingHospital,FourthMilitaryUniversity,ShaanxiXi’an710033,China)

Objective To investigate the expression and clinical implication of interferon-induced transmembrane protein 1 (IFITM1) in epithelial ovarian carcinoma. Methods The positive expression of IFITM1 was determined with SP immunohistochemistry in 42 cases of normal ovarian tissue, 51 cases of benign ovarian tumor, 48 cases of borderline ovarian tumor, and 85 cases of epithelial ovarian carcinoma. The correlation between its expression and clinical pathological factors of epithelial ovarian carcinoma was analyzed. Results The immunohistochemical technique showed that the expression levels of IFITM1 were statistically different in four kinds of tissues (χ2=8.407,P=0.004). The positive expression rate of IFITM1 was 40.5%(17/42), 70.5%(36/51), 70.8%(34/48) and 77.6%(66/85), respectively in normal ovarian tissue, benign ovarian tumor, borderline ovarian tumor and epithelial ovarian carcinoma (χ2=18.491,P<0.001). The expression of IFITM1 was correlated with FIGO stage, tumor grade and histological type in epithelial ovarian carcinoma (χ2value was 4.307, 6.959 and 8.539, respectively, allP<0.05). It was lower in early stage of ovarian carcinoma (Ⅰ, Ⅱ) than in late stage (Ⅲ, Ⅳ) (χ2=4.307,P=0.038). With the decreasing of differentiation, the expression rate of IFITM1 increased. IFITM1 was not significantly correlated with lymphatic metastasis and abdominal dropsy (χ2value was 0.111 and 0.024, respectively, bothP>0.05). The positive expression of IFITM1 in drug resistant group was significantly higher than that in sensitive group (χ2=34.843,P<0.001).Conclusion The expression of IFITM1 is significantly higher in epithelial ovarian carcinoma than in normal ovarian tissue, benign ovarian tumor and borderline ovarian tumor, which indicates that IFITM1 may play a vital role in carcinogenesis and progression of ovarian carcinoma and that it has predictive value on resistance of platinum-based chemotherapy.

ovarian tumor, interferon-induced transmembrane protein 1 (IFITM1), immunohistochemistry, drug resistance, DNA damage

2014-09-15

楊 蓉(1981-)，女，主治醫(yī)師，在讀碩士研究生，主要從事婦科腫瘤及高危妊娠研究。

王 建，主任醫(yī)師。

10.3969/j.issn.1673-5293.2015.02.024

R737.3

A

1673-5293(2015)02-0240-04