袁慧敏，徐黎明，袁秋雁

(寧波市鎮(zhèn)海龍賽醫(yī)院病理科，浙江 寧波 315200)

寧波鎮(zhèn)海區(qū)女性健康普查及相應(yīng)HPV檢測分析

袁慧敏，徐黎明，袁秋雁

(寧波市鎮(zhèn)海龍賽醫(yī)院病理科，浙江 寧波 315200)

目的 通過對寧波鎮(zhèn)海區(qū)女性宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)(TCT)健康普查及相應(yīng)二代基因雜交捕獲法高危型人乳頭狀瘤病毒基因檢測(HC2-HPV-DNA)，探討兩種技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用在宮頸癌篩查中的價(jià)值。方法 對3 216例女性行宮頸TCT檢查及相應(yīng)HC2-HPV-DNA檢測，并與病理活檢結(jié)果進(jìn)行對照分析。結(jié)果 在3 216例女性中，TCT檢查異常者630例，陽性率19.6%(630/3 216)；在630例TCT檢查異常者中HC2-HPV-DNA檢測陽性者383例，陽性率60.8%(383/630)。TCT檢查及HC2-HPV-DNA檢測均陽性的383例行宮頸活檢，病理診斷為CIN符合率為97.1%；TCT檢查為陽性，HC2-HPV-DNA檢測為陰性的247例行宮頸活檢，病理診斷為CIN符合率為66.4%，經(jīng)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.40，P<0.01)。結(jié)論 宮頸TCT檢查與宮頸HC2-HPV-DNA檢測的聯(lián)合應(yīng)用對有效篩查宮頸癌尤為重要。

宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)；二代基因雜交捕獲法高危型人乳頭狀瘤病毒基因檢測；病理活檢；宮頸癌；篩查

宮頸癌是女性中最常見的惡性腫瘤之一，經(jīng)過國內(nèi)外學(xué)者近20年的研究，已證明人乳頭狀瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染是宮頸癌的主要病因。宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展是一個(gè)漸進(jìn)過程，早期宮頸癌如能及時(shí)發(fā)現(xiàn)并治療，治愈率可達(dá)90%以上[1]。近年來，我國宮頸癌的發(fā)生呈明顯上升和年輕化趨勢，因此找到合理有效的宮頸癌篩查方法對于防治宮頸癌具有決定性意義。通過對本區(qū)體檢女性行宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)(TCT)檢查及相應(yīng)二代基因雜交捕獲法高危型人乳頭狀瘤病毒基因(HC2-HPV-DNA)檢測，并結(jié)合病理組織活檢分析，旨在探討兩種技術(shù)的聯(lián)合應(yīng)用對于有效篩查宮頸癌的價(jià)值，從而為本地區(qū)宮頸癌的防治工作提供一些幫助。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集寧波市鎮(zhèn)海龍賽醫(yī)院2012年1月至2013年5月女性宮頸TCT體檢病例3 216例，年齡23～67歲，平均年齡39.4歲。

選擇3 216例中TCT檢查異常者630例，進(jìn)行HC2-HPV-DNA檢測，懷疑高度鱗狀上皮內(nèi)病變以及陰道鏡檢查未見異常者同時(shí)行病理組織活檢，以做比較性研究，年齡23～65歲，平均年齡34.7歲，且這些患者均無子宮和宮頸手術(shù)史。

1.2 方法

1.2.1 宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查

使用窺器暴露宮頸，用棉球輕輕擦去宮頸表面分泌物后，將頸管刷插入宮頸管內(nèi)繞宮頸順時(shí)針方向旋轉(zhuǎn)3～5周，然后將頸管刷置入存有Thinprep保存液中的小瓶中攪拌，蓋好瓶蓋送檢。保存液中的標(biāo)本經(jīng)清潔液及細(xì)胞基液離心沉淀處理后，在載玻片上制成直徑為2cm的薄層細(xì)胞涂片，用95%酒精固定，巴氏染色，鏡檢。由病理科醫(yī)師根據(jù)描述性診斷(the bethesda system，TBS)診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行細(xì)胞學(xué)診斷，包括無上皮內(nèi)病變(NILM)；不典型鱗狀細(xì)胞意義不明確(atypical squamous cell of undetermined significance,ASCUS)；低度鱗狀上皮內(nèi)病變(low-grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)，包括HPV的細(xì)胞變化、輕度異型增生和宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)Ⅰ；高度鱗狀上皮內(nèi)病變(high-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)，涵蓋中及重度異型增生、原位癌、CINⅡ和CINⅢ；鱗狀細(xì)胞癌(squamous cell cancer,SCC)。TCT檢查以≥ASCUS為陽性。

1.2.2 高危型人乳頭狀瘤病毒基因檢測

按要求暴露宮頸后，用專用小刷子置于宮頸口與黏膜交界處逆時(shí)針轉(zhuǎn)3圈，并停留10秒，將小刷子放于專用試管中，蓋上蓋子送檢。按照操作規(guī)定，對標(biāo)本進(jìn)行13種高危型HPV(HR-HPV)亞型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型)的檢測。診斷標(biāo)準(zhǔn)：光量讀數(shù)與陰性測定值比值(RLU/CO)>1.0為陽性。

1.2.3 宮頸組織學(xué)檢查

對TCT檢查異常者行陰道鏡檢查，醋酸實(shí)驗(yàn)陽性或碘實(shí)驗(yàn)陰性者進(jìn)行多點(diǎn)(3、6、9、12)活檢，活檢組織經(jīng)10%甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，4μm切片，蘇木素-伊紅(HE)染色，光鏡觀察。宮頸活檢病理診斷≥CINⅠ級(輕度異型增生)判定為陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

運(yùn)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，檢出率的比較采用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.01。

2 結(jié)果

2.1 宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查各類異常涂片檢出率

在3 216例TCT檢查結(jié)果中，發(fā)現(xiàn)異常者630例，占19.6%，其中不同年齡組異常涂片分布情況見表1。各年齡組組間細(xì)胞學(xué)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=13.53，P<0.01)，其中31～40歲和41～50歲是兩個(gè)高發(fā)年齡段，分別占38.7%(244/630)和45.6%(287/630)，合計(jì)共占84.3%，LSIL在年齡輕者中發(fā)病率高，隨著年齡的增長，HSIL的發(fā)病率逐漸升高。

表1 不同年齡組異常涂片分布[n(%)]

2.2 宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果與高危型人乳頭狀瘤病毒基因檢測符合率

TCT檢查630例陽性病例中，HC2-HPV-DNA檢測陽性率60.8%；陰性率39.2%。TCT檢查與HC2-HPV-DNA檢測結(jié)果對照見表2。383例HC2-HPV-DNA檢測陽性病例中HSIL和SCC的陽性率較高，分別為81.7%和100.0%，HC2-HPV-DNA檢測在ASCUS與LSIL、HSIL、SCC間陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=21.54，P<0.01)。

2.3 宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查聯(lián)合高危型人乳頭狀瘤病毒基因檢測與宮頸活檢結(jié)果對照情況

TCT檢查及HC2-HPV-DNA檢測均陽性的383例行宮頸活檢，病理診斷為CIN者372例，符合率97.1%；TCT檢查為陽性，HC2-HPV-DNA檢測為陰性的247例行宮頸活檢，病理診斷為CIN者164例，符合率66.4%，兩者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.40，P<0.01)，見表3。

表2 TCT檢查與HC2-HPV-DNA檢測結(jié)果對照[n(%)]

Table 2 Comparison of TCT examination and HC2 HPV-DNA testing[n(%)]

表3 TCT檢查、HC2-HPV-DNA檢測與病理活檢對照[n(%)]

3 討論

子宮頸因其解剖學(xué)位置及組織學(xué)特點(diǎn)，是婦產(chǎn)科疾病的好發(fā)部位，如急慢性宮頸炎、宮頸糜爛、宮頸息肉、宮頸癌等，尤其是宮頸癌，嚴(yán)重威脅著廣大婦女的身心健康乃至生命安危。國際癌癥研究中心(IARC)近年估計(jì)全球?qū)m頸癌5年患病例數(shù)為150余萬人，其中3/4以上的患者是在發(fā)展中國家，發(fā)達(dá)國家有30余萬患者，全球每年有新發(fā)病例45.9萬，其中我國每年新發(fā)病例13.15萬，占28.7%，居首位[2]。宮頸癌顯著的特點(diǎn)是有癌前病變期，從癌前病變發(fā)展成癌是一個(gè)較長的過程，大約是10年。因此宮頸癌是一種可預(yù)防、可治愈的疾病，關(guān)鍵是進(jìn)行篩查，及早發(fā)現(xiàn)癌前病變，防患于未然[3]。

3.1 宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查應(yīng)用于宮頸癌篩查

宮頸細(xì)胞學(xué)檢查是宮頸癌早期診斷的重要篩查方法之一。傳統(tǒng)巴氏細(xì)胞學(xué)涂片從上世紀(jì)中期開始一直是宮頸癌前病變常規(guī)篩查的最常用的方法之一，但是由于取材時(shí)有80%以上的細(xì)胞樣本隨取材器被丟棄，轉(zhuǎn)移至載玻片上的細(xì)胞很少，且涂片質(zhì)量差，涂片不均勻、過厚，血液、黏液等雜質(zhì)遮蔽了不正常細(xì)胞，使讀片受到干擾，影響陽性檢出[4]。TCT技術(shù)將取得的標(biāo)本及時(shí)放入保存液中，可使黏液軟化，并與細(xì)胞分離，減少細(xì)胞退變，避免陽性細(xì)胞堆積和丟失，經(jīng)高精度濾器過濾制成薄層涂片。研究表明，TCT技術(shù)的發(fā)展有效地彌補(bǔ)了傳統(tǒng)巴氏涂片技術(shù)的局限性，明顯提高了宮頸異常細(xì)胞的檢出率，而且TCT采用與之相適應(yīng)的TBS分類法，有助于細(xì)胞學(xué)診斷的準(zhǔn)確性，便于細(xì)胞學(xué)醫(yī)生與臨床醫(yī)生之間的交流[5]，成為國內(nèi)外婦產(chǎn)科宮頸陰道疾病檢查的常規(guī)方法。

20世紀(jì)80年代后，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的應(yīng)用，國內(nèi)外大量研究已證實(shí)HPV感染是宮頸癌的主要危險(xiǎn)因素。依據(jù)HPV與腫瘤的關(guān)系，不同類別的HPV感染可以導(dǎo)致不同的臨床病變。CINⅠ常由HPV6、11型引起，CINⅡ、Ⅲ則常伴有HPV16、18、31、35型感染等[6]。目前發(fā)現(xiàn)感染肛門生殖器的HPV可分為低危型和高危型，低危型常在宮頸良性或低度病變的病灶中檢測到，而高危型通常在高度病變中發(fā)現(xiàn)。高危型HPV感染是宮頸癌前病變的發(fā)展和隨后宮頸癌進(jìn)展的一種主要危險(xiǎn)因子[7]。美國有研究發(fā)現(xiàn)：在30歲以下有性生活的年輕婦女中生殖道HPV感染率很高，但是將近3/4的感染者無癥狀，大部分HPV感染會自然消退，有臨床癥狀的僅占20%左右[8]，這也間接地說明了只有高危型HPV感染才與宮頸癌的發(fā)病有關(guān)。目前常檢測的有13種高危型HPV(HR-HPV)亞型，即16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型。HC2-HPV-DNA檢測可提高宮頸癌及癌前病變篩查的敏感性，是宮頸癌篩查的重要手段。

3.2 宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查聯(lián)合二代基因雜交捕獲法高危型人乳頭狀瘤病毒基因檢測應(yīng)用于宮頸癌篩查

有學(xué)者指出TCT檢查特異性高于HPV檢測，但HPV檢測敏感性高于TCT檢查，將兩者結(jié)合可使宮頸癌前病變和早期宮頸癌的篩查準(zhǔn)確性明顯提高[9]。本研究發(fā)現(xiàn)，TCT檢查及HC2-HPV-DNA檢測均陽性者，CIN發(fā)病率明顯增高，而且高度病變占很大部分比例，TCT單獨(dú)診斷的陽性率為66.4%，而與HC2-HPV-DNA聯(lián)合診斷的陽性率為97.1%，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。說明HC2-HPV-DNA聯(lián)合TCT對宮頸癌前病變診斷的準(zhǔn)確性較高，優(yōu)于單獨(dú)應(yīng)用TCT檢查。本研究中還發(fā)現(xiàn)從年齡段上，CIN在31～50歲發(fā)生率明顯較其他年齡段高，此年齡段應(yīng)作為重點(diǎn)篩查對象。有文獻(xiàn)指出，建議有性生活史約3年后就開始宮頸普查(年齡不超過21歲)，30歲之前應(yīng)每年做1次常規(guī)的宮頸細(xì)胞學(xué)檢查，或每2年做1次TCT檢查，對連續(xù)3次細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果正常或陰性者，到30歲以后可每2～3年普查1次，70歲以上的婦女如連續(xù)3年以上細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果正?；蜿幮?，同時(shí)在70歲以前的10年中無異?；蜿栃约?xì)胞學(xué)檢查結(jié)果者，可以選擇停止宮頸癌的普查[10]。

總之，研究結(jié)果表明TCT檢查聯(lián)合HC2-HPV-DNA檢測可顯著提高對宮頸癌前病變診斷的靈敏度，是一種較準(zhǔn)確和具有實(shí)用價(jià)值的宮頸癌篩查方法。對及時(shí)發(fā)現(xiàn)宮頸癌前病變，最大限度地降低宮頸癌的病死率有非常重要的臨床價(jià)值。

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[專業(yè)責(zé)任編輯：安瑞芳]

二手煙暴露增加兒童成年后頸動脈斑塊風(fēng)險(xiǎn)

芬蘭一項(xiàng)長達(dá)26年的研究顯示，暴露于二手煙的兒童頸動脈粥樣斑塊的風(fēng)險(xiǎn)較高。研究者使用1980年收集的超過1 000名兒童的冷凍血液樣本，及1980年、1983年父母報(bào)告的吸煙狀況的資料；并于2001至2007年對這部分兒童在成年期(平均36歲時(shí))進(jìn)行了超聲檢查，結(jié)果顯示，有2%在成年期具有頸動脈斑塊。超過84%的非吸煙者孩子血液中無尼古丁，而父母一方吸煙的孩子中為43%，父母雙方都吸煙的為62%。相比非吸煙者，這些孩子成年后頸動脈斑塊的風(fēng)險(xiǎn)增加1.5倍，但是那些二手煙暴露較多的兒童則風(fēng)險(xiǎn)增加4倍。該研究發(fā)表在2015年3月《循環(huán)》(Circulation)雜志上。

http://www.univadis.cn/medical-news/86/Circulation3?utm_source=adhoc+emails&utm_medium=email&utm_campaign=sp+emails&utm_term=manual

Health screening and HPV-DNA testing in women in Zhenhai district of Ningbo City

YUAN Hui-min, XU Li-ming, YUAN Qiu-yan

(Department of Pathology, Zhenhai Longsai Hospital, Zhejiang Ningbo 315200, China)

Objective To evaluate the significance of combined application of TCT and HPV-DNA testing in screening of cervical lesion. Methods TCT and HC2-HPV-DNA testing were performed for 3 216 women and the results were compared to pathological biopsy. Results Totally 630 cases were positive in TCT examination, with positive rate of 19.6% (630/3 216), including 383 cases with positive results in HC2-HPV-DNA testing (60.8%, 383/630). The cases with positive results in TCT examination and HC2-HPV-DNA testing underwent cervical biopsy, and the CIN coincidence rate of pathological diagnosis was 97.1%. There were 247 cases with positive results in TCT examination but negative results in HC2-HPV-DNA testing, and their CIN coincidence rate of pathological diagnosis was 66.4%. The difference in coincidence rate was statistically significant (χ2=9.40,P<0.01).Conclusion It is particularly important to combine TCT examination with HC2-HPV DNA testing in screening of cervical concer.

TCT；HC2-HPV-DNA testing；pathological biopsy；cervical cancer；screening

2014-08-22

寧波市鎮(zhèn)海區(qū)科技局立項(xiàng)課題資助項(xiàng)目(項(xiàng)目編號2012S1012)

袁慧敏(1971-)，女，副主任醫(yī)師，主要從事臨床病理診斷工作。

10.3969/j.issn.1673-5293.2015.02.074

R737.33

A

1673-5293(2015)02-0376-03