賈燕花 高磊 王曉青 劉皈陽(yáng)

·藥物研究·

RP-HPLC同時(shí)測(cè)定復(fù)方氯倍他索乳膏中甲硝唑、丙酸氯倍他索及酮康唑含量

賈燕花 高磊 王曉青 劉皈陽(yáng)

目的建立同時(shí)測(cè)定復(fù)方氯倍他索乳膏中甲硝唑、酮康唑和丙酸氯倍他索含量的反相高效液相色譜方法(RP-HPLc)。方法采用高效液相色譜法，Kromasil C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流動(dòng)相為甲醇-水(20∶80)為流動(dòng)相A，甲醇-乙腈(2∶1)為流動(dòng)相B，采用梯度洗脫方法;檢測(cè)波長(zhǎng)為240 nm。結(jié)果甲硝唑、酮康唑和丙酸氯倍他索的含量分別在641.1～2 243.8 μg/ml、323.1～1 130.9 μg/ml、16.4～57.5 μg/ml的范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，平均回收率分別為98.5%、99.4%和99.2%(n=6)。結(jié)論該方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果可靠，可以用于同時(shí)測(cè)定復(fù)方氯倍他索乳膏中甲硝唑、酮康唑和丙酸氯倍他索的含量，以控制該制劑的質(zhì)量。

甲硝唑;丙酸氯倍他索;酮康唑;高效液相色譜

復(fù)方氯倍他索乳膏臨床上用于各類(lèi)皮炎、濕疹、手足癬、體癬、股癬等癥，其主要成分為甲硝唑、酮康唑和丙酸氯倍他索。在以往的文獻(xiàn)中，未報(bào)道同時(shí)測(cè)定復(fù)方氯倍他索乳膏中甲硝唑、酮康唑和丙酸氯倍他索的高效液相色譜法［1-9］。因此，在保證測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度和良好的檢測(cè)效率的前提下，筆者通過(guò)摸索實(shí)驗(yàn)條件，建立了同時(shí)定量檢測(cè)復(fù)方氯倍他索乳膏中甲硝唑、酮康唑和丙酸氯倍他索的反相高效液相色譜法(RPHPLc)，為提供安全、有效的藥品提供了依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器高效液相色譜儀(1100，Agilent)，色譜柱(C18，Kromasil)，pH值計(jì)(pHS-3E，上海雷磁)，紫外分光光度計(jì)(2102C，上海UNICO儀器有限公司)，電子天平(BT25S，賽多利斯)。

1.2 試藥甲硝唑(100191-200606，中國(guó)食品藥品檢定研究院)，酮康唑(100294-200602，中國(guó)食品藥品檢定研究院)，丙酸氯倍他索(100302-201103，中國(guó)食品藥品檢定研究院)，復(fù)方氯倍他索乳膏(130521A，130806A，第三軍醫(yī)大學(xué)第三附屬醫(yī)院)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-水(20∶80)為流動(dòng)相A，甲醇-乙腈(2∶1)為流動(dòng)相B，流速為每分鐘1 ml，照下表進(jìn)行梯度洗脫;檢測(cè)波長(zhǎng)240 nm;進(jìn)樣量為5 μl。見(jiàn)表1。

表1 色譜條件

2.2 對(duì)照品溶液的配制酮康唑?qū)φ掌啡芤旱呐渲?精密稱(chēng)取酮康唑?qū)φ掌?0 mg，置于50 ml量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為酮康唑?qū)φ掌焚A備溶液，精密量取5 ml置于10 ml容量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得酮康唑?qū)φ掌啡芤?丙酸氯倍他索對(duì)照品溶液的配制:精密稱(chēng)取丙酸氯倍他索對(duì)照品10 mg，置于25 ml量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為丙酸氯倍他索對(duì)照品貯備溶液，精密量取1 ml置于10 ml量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得丙酸氯倍他索對(duì)照品溶液;甲硝唑?qū)φ掌啡芤?取甲硝唑?qū)φ掌愤m量(約相當(dāng)于甲硝唑16 mg)，精密稱(chēng)定，置10 ml量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為甲硝唑?qū)φ掌啡芤?混合對(duì)照品溶液配制:精密稱(chēng)取甲硝唑?qū)φ掌愤m量(約相當(dāng)于甲硝唑16 mg)，加5 ml酮康唑?qū)φ掌焚A備溶液，1 ml丙酸氯倍他索對(duì)照品貯備溶液，置于10 ml量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為混合對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的配制取復(fù)方氯倍他索乳膏2 g，精密稱(chēng)定，加無(wú)水乙醇適量，置于80℃水浴中溶解，轉(zhuǎn)至25 ml量瓶中，放冷至室溫，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，冰浴2 h，濾過(guò)，即得。

2.4 陰性樣品溶液的配制按處方比例稱(chēng)取混合輔料10 mg，加無(wú)水乙醇適量，置于80℃水浴中溶解，轉(zhuǎn)移至50 ml量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，過(guò)濾，精密量取續(xù)濾液0.25 ml置10 ml量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為陰性樣品溶液。

2.5 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，取甲硝唑?qū)φ掌啡芤?、酮康唑?qū)φ掌啡芤?、丙酸氯倍他索溶液、混合?duì)照品溶液、陰性樣品溶液各5 μl進(jìn)樣。主成分甲硝唑、酮康唑和丙酸氯倍他索的色譜峰分離度良好。見(jiàn)圖1。

圖1 輔料(A)、丙酸氯倍他索(B)、甲硝唑(C)、酮康唑(D)、樣品(E)色譜圖

2.6 線(xiàn)性關(guān)系考察精密稱(chēng)取10 mg丙酸氯倍他索對(duì)照品，置于10 ml容量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為丙酸氯倍他索對(duì)照品線(xiàn)性貯備溶液;精密稱(chēng)取甲硝唑?qū)φ掌?60 mg、酮康唑?qū)φ掌?0 mg置于同一50 ml容量瓶中，加丙酸氯倍他索對(duì)照品線(xiàn)性貯備溶液4ml，用無(wú)水乙醇溶液并稀釋至刻度，搖勻，即得線(xiàn)性貯備溶液;分別精密量取線(xiàn)性貯備溶液2 ml、3 ml、4 ml、5 ml、6 ml、7 ml置10 ml量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為線(xiàn)性供試液。按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，以峰面積的積分值為縱坐標(biāo)(Y)，分別以甲硝唑、酮康唑和丙酸氯倍他索的濃度(μg/ml)為橫坐標(biāo)(X)作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算其回歸方程。甲硝唑:Y=0.207X-0.405，r= 0.9995;酮康唑:Y=0.136X+10.71，r=0.9995;丙酸氯倍他索:Y=0.112X+0.088，r=0.9995。結(jié)果表明，甲硝唑、酮康唑、丙酸氯倍他索分別在641.1～2 243.8 μg/ml、323.1～1 130.9 μg/ml、16.4～57.5 μg/ml的范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，符合規(guī)定。

2.7 精密度實(shí)驗(yàn)精密量取混合對(duì)照品溶液5 μl，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算甲硝唑、酮康唑和丙酸氯倍他索的吸收峰面積RSD值，分別為0.19%、0.19%和0.23%，表明儀器精密度良好。

2.8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密量取供試品溶液，在相同色譜條件下分別于0 h、12 h、24 h、48 h精密量取5 μl，記錄峰面積，計(jì)算甲硝唑、酮康唑和丙酸氯倍他索的吸收峰面積RSD值，分別為0.51%、0.42%和0.28%，結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.9 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取批號(hào)為130521A的復(fù)方氯倍他索乳膏，按照“2.3”項(xiàng)下的方法制備6份供試品溶液，并按照“2.1”項(xiàng)下的色譜方法平行測(cè)定，甲硝唑、酮康唑和丙酸氯倍他索含量的RSD值分別為0.58%、0.99%和0.63%(n=6)，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.10 準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)分別精密稱(chēng)取甲硝唑?qū)φ掌愤m量(相當(dāng)于甲硝唑13 mg、16 mg、19 mg)、精密量取酮康唑?qū)φ掌焚A備溶液(4 ml、5 ml、6 ml)、以及精密量取丙酸氯倍他索對(duì)照品貯備溶液(0.8 ml、1.0 ml、1.2 ml)，置10 ml容量瓶中，按照處方比例加入輔料，用無(wú)水甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得濃度分別為80%、100%、120%的供試品溶液，每種濃度制備3份，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，按照外標(biāo)法計(jì)算各水平的回收率。甲硝唑的平均回收率為98.5%，RSD值為0.84%;酮康唑的平均回收率為99.4%，RSD值為1.53%;丙酸氯倍他索的平均回收率為99.2%，RSD值為1.03%。

2.11 樣品測(cè)定按照上述色譜條件，分別精密量取供試品溶液和對(duì)照品溶液各5 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按照外標(biāo)法以峰面積計(jì)算樣品的含量。見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果%

3 討論

甲硝唑在311 nm處有較強(qiáng)吸收;酮康唑在220 nm處有較強(qiáng)吸收;丙酸氯倍他索在238 nm處有最大吸收;空白輔料在211 nm處有最大吸收，在274 nm處吸收較弱。根據(jù)復(fù)方氯倍他索乳膏處方，丙酸氯倍他索含量相對(duì)較少，為提高丙酸氯倍他索響應(yīng)值，故選擇274 nm作為本品的檢測(cè)波長(zhǎng)。

乳膏基質(zhì)可污染色譜儀，造成柱壓升高，色譜柱壽命縮短，因此采用冰浴冷卻2 h后迅速濾過(guò)的方法以盡可能的出去基質(zhì)，減少乳膏基質(zhì)對(duì)色譜系統(tǒng)的影響。

《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版二部中的丙酸氯倍他索原料藥采用HPLC方法進(jìn)行含量測(cè)定［10］，甲硝唑原料藥［10］和酮康唑原料藥［10］采用容量分析方法，筆者嘗試建立了同時(shí)測(cè)定甲硝唑、酮康唑、丙酸氯倍他索的高效液相色譜方法，該方法具有良好的專(zhuān)屬性、精密性和準(zhǔn)確性，以及良好的分離效能，為復(fù)方氯倍他索乳膏的質(zhì)量控制提供了可靠的依據(jù)。

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R 917.4

A

1002-7386(2015)02-0285-03

2014-08-21)

10．3969/j．issn．1002－7386．2015．02．049

100048北京市，中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院藥劑藥理科

劉皈陽(yáng)，100048中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院藥劑藥理科; E-mail:liuguiy@live.cn