張中菊 劉曉麗 易桂標(biāo) 于娜 楊麗

正清風(fēng)痛寧對偏頭痛大鼠腦干IL-1β、TNF-α表達(dá)的影響

張中菊 劉曉麗 易桂標(biāo) 于娜 楊麗

目的 觀察正清風(fēng)痛寧對炎性細(xì)胞因子白介素-1β(IL-1β)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)在偏頭痛大鼠腦干表達(dá)的影響。方法 將60只Wistar大鼠(雌雄各半)隨機(jī)分為空白對照組(空白組)、偏頭痛模型組(模型組)、舒馬普坦組及正清風(fēng)痛寧高、中、低劑量干預(yù)組(高、中、低劑量組)共6組。除空白組外，其余5組大鼠均建立三酰甘油偏頭痛模型，用免疫組化SP法測定各組大鼠腦干IL-1β、TNF-α陽性細(xì)胞數(shù)。結(jié)果 6組大鼠間IL-1β、TNF-α陽性細(xì)胞數(shù)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(分別F=7.063，P=0.001；F=8.257，P=0.000)；組間兩兩比較，模型組腦干IL-1β(18.9±8.17)、TNF-α(14.30±6.41)陽性細(xì)胞數(shù)較空白組(5.90±2.69、5.00±1.63)增多(分別t=-4.780、P=0.000，t=-4.444,P=0.000)，舒馬普坦組(2.80±2.15，t=6.026，P=0.000；0.00±0.00，t=7.052，P=0.000)、中劑量組(7.70±4.76，t=3.745,P=0.000；6.20±1.99，t=3.815,P=0.000)、高劑量組(7.80±5.90，t=3.482,P=0.003；5.90±2.88，t=3.778，P=0.001)IL-1β、TNF-α陽性細(xì)胞數(shù)均較模型組減少；低劑量組腦干IL-1β(13.5±4.30，t=1.849，P=0.081)、TNF-α(11.30±6.11，t=1.071,P=0.298) 陽性細(xì)胞數(shù)與模型組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與舒馬普坦組比較，低劑量組(t=-7.037，P=0.000；t=-5.847，P=0.000)、中劑量組(t=-2.966，P=0.011；t=-9.858，P=0.000)、高劑量組(t=-2.517，P=0.022；t=-6.467，P=0.000)腦干IL-1β、TNF-α陽性細(xì)胞數(shù)均增多；與低劑量組比較，中(t=-2.858，P=0.011；t=-2.510，P=0.022)、高劑量組(t=-2.468，P=0.024；t=-2.527，P=0.021)腦干IL-1β、TNF-α陽性細(xì)胞數(shù)減少；中、高劑量組腦干IL-1β、TNF-α陽性細(xì)胞數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.042，P=0.967；t=-0.271，P=0.790)。結(jié)論 正清風(fēng)痛寧可能抑制偏頭痛大鼠炎性細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α的表達(dá)。

正清風(fēng)痛寧；偏頭痛；白細(xì)胞介素-1β；腫瘤壞死因子-α

偏頭痛(migraine)是一種反復(fù)發(fā)作的原發(fā)性頭痛，為常見的頭痛類型，給個(gè)人及社會帶來了極大的影響。目前偏頭痛的發(fā)病機(jī)制眾說紛紜，神經(jīng)源性炎性反應(yīng)(neurogenic inflammation，NI)被認(rèn)為在偏頭痛的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。曲坦類藥物(如舒馬普坦)是特異性5-羥色胺(5-HT)1B/1D受體激動(dòng)劑，是目前治療偏頭痛療效較肯定的藥物，但由于價(jià)格昂貴，且具有心血管等系統(tǒng)的不良反應(yīng)，限制了其在臨床上的應(yīng)用。正清風(fēng)痛寧(主要成分為青藤堿)具有鎮(zhèn)痛、抗炎及免疫抑制等藥理作用，且不良反應(yīng)小，其在臨床上的鎮(zhèn)痛作用是肯定的，但其是否對偏頭痛治療有效，目前國內(nèi)外尚無文獻(xiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過建立三酰甘油(glycerylteinitrate，GTN)動(dòng)物偏頭痛模型，予正清風(fēng)痛寧干預(yù)，以舒馬普坦為陽性對照，用免疫組化法測定大鼠腦干炎性細(xì)胞因子白介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)、腫瘤壞死因子-α(tumor nesrosis factor-α, TNF-α)表達(dá)，探討正清風(fēng)痛寧對炎性細(xì)胞因子表達(dá)的影響，期望為開發(fā)偏頭痛新藥治療提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：清潔級Wistar大鼠60只〔由重慶第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號：SCXK(渝)2007-0005〕，雌雄各半，體質(zhì)量(320±60) g，分籠喂養(yǎng)，可自由進(jìn)飲食。

1.1.2 主要試劑及儀器：三酰甘油注射液(5 mg/mL)由北京益民藥業(yè)提供；正清風(fēng)痛寧緩釋片(鹽酸青藤堿含量60 mg/片)由湖南正清制藥提供；琥珀酸舒馬普坦片(批號0903127)購自天津華津制藥公司；兔抗大鼠IL-1β抗體(編號sc-1265)、兔抗大鼠TNF-α抗體(編號BA0131)均購自武漢博士德生物公司。麥克奧迪BA400顯微鏡及麥克奧迪Moticcam 2306攝像為麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)公司產(chǎn)品；病理石蠟切片機(jī)為北京弘泰嘉業(yè)科技發(fā)展有限公司產(chǎn)品。

1.2 方法 動(dòng)物適應(yīng)性喂養(yǎng)后，隨機(jī)分為空白對照組(空白組)、偏頭痛模型組、舒馬普坦組及正清風(fēng)痛寧低、中、高劑量組(低、中、高劑量組)6組，每組10只。

1.2.1 偏頭痛模型制作：空白組不予任何處理，其余各組均參照文獻(xiàn)[1]方法制作偏頭痛大鼠模型。按10 mg/kg皮下注射三酰甘油注射液，30 min后大鼠出現(xiàn)雙耳發(fā)紅、前肢頻繁搔頭、爬籠次數(shù)增多、豎毛、活動(dòng)增加等表現(xiàn)為制作大鼠偏頭痛模型成功。本實(shí)驗(yàn)中造模各組50只大鼠均造模成功。

1.2.2 癥狀學(xué)觀察：觀察各組大鼠耳紅、爬籠、撓頭等表現(xiàn)并記錄開始及消失時(shí)間，從而評價(jià)藥物干預(yù)對大鼠癥狀是否有改善作用。撓頭出現(xiàn)時(shí)間以大鼠連續(xù)撓頭次數(shù)達(dá)5次以上為標(biāo)志，消失時(shí)間以一個(gè)時(shí)間段內(nèi)(以舒馬普坦及正清風(fēng)痛寧灌胃時(shí)開始計(jì)時(shí)，30 min為一個(gè)時(shí)間段)大鼠撓頭次數(shù)小于5次并出現(xiàn)怠倦、疲乏的表現(xiàn)為標(biāo)志。

1.2.3 藥物干預(yù)：舒馬普坦組于注射GTN 30 min后按6 mg/kg琥珀酸舒馬普坦灌胃給藥；低、中、高治療組按100 mg/kg、150 mg/kg、200 mg/kg劑量于注射GTN 30 min后灌胃給藥；各組藥物均以生理鹽水稀釋到相同體積灌胃，模型組以等體積生理鹽水灌胃?？瞻捉M不予任何處理。

1.2.4 取材及標(biāo)本處理：造模藥物灌胃后4 h將上述動(dòng)物用10%(質(zhì)量濃度)水合氯醛(按0.35 mL/100 g麻醉大鼠)腹腔注射進(jìn)行全身麻醉，之后仰臥固定開胸，從左心室至主動(dòng)脈插管，剪開右心耳。首先迅速灌注無菌生理鹽水200 mL，然后灌注4℃ 4%(質(zhì)量濃度)多聚甲醛(PFA)磷酸鹽緩沖液200 mL，灌注后斷頭取大鼠腦組織，在40%(質(zhì)量濃度)PFA磷酸鹽緩沖液中固定24 h，然后放入20%(質(zhì)量濃度)蔗糖-PBS液中，至組織塊下沉。然后常規(guī)脫水、石蠟包埋。石蠟切片機(jī)切片，對大鼠腦干連續(xù)切片，片厚約4 um，對石蠟切片行常規(guī)HE染色，100倍顯微鏡下觀察確定組織結(jié)構(gòu)未被破壞，然后進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。

1.2.5 SP免疫組化法腦干IL-1β、TNF-α表達(dá)：切片脫蠟梯度酒精水化，3%(質(zhì)量濃度)過氧化酶阻斷劑阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，以0.01 mol/L檸檬酸鹽抗原修復(fù)液(pH 6.0)最低檔[2]抗原修復(fù)10 min。按免疫細(xì)胞化學(xué)試劑盒說明SP法進(jìn)行染色，加兔抗大鼠IL-1β的第一抗體(1∶50稀釋)37℃孵育1 h，生物素標(biāo)記的第二抗體(1∶200稀釋)37℃孵育40 min，辣根過氧化酶標(biāo)記鏈親和素溶液(1∶400稀釋)37℃孵育 40 min，DAB工作液顯色，顯微鏡下觀察，當(dāng)陽性細(xì)胞著色明顯、細(xì)胞間質(zhì)無明顯DAB顏色時(shí)終止反應(yīng)，脫水、透明、封片，400倍顯微鏡下觀察每張切片左上、右上、左下、右下和中央部5個(gè)視野，計(jì)數(shù)每個(gè)視野IL-1β陽性細(xì)胞總數(shù)，計(jì)取均值。TNF-α檢測采用相應(yīng)TNF-α抗體，方法與IL-1β相同。IL-1β陽性細(xì)胞表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)呈棕色或棕褐色，細(xì)胞核為圓形或卵圓形；TNF-α陽性細(xì)胞表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)呈棕褐色，細(xì)胞核為圓形或卵圓形。IL-1β、TNF-α陽性細(xì)胞數(shù)多提示IL-1β、TNF-α表達(dá)水平高。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組(5組或6組)間均數(shù)比較采用方差分析，組間兩兩比較行LSD-t檢驗(yàn)。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠行為癥狀學(xué)表現(xiàn) 空白組始終未出現(xiàn)偏頭痛表現(xiàn)，其余各組實(shí)驗(yàn)大鼠在注射GTN后6～10 min左右，均出現(xiàn)耳紅、前肢頻繁搔頭、爬籠次數(shù)增多等現(xiàn)象。各藥物干預(yù)組與模型組耳紅、撓頭及爬籠開始時(shí)間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；中、高劑量及舒馬普坦組耳紅、撓頭及爬籠消失的時(shí)間較模型組大鼠明顯縮短(P<0.05)；與舒馬普坦組比較，低、中、高劑量組大鼠耳紅、撓頭及爬籠消失的時(shí)間明顯延長(P<0.05)；中、高劑量組大鼠耳紅、撓頭及爬籠消失的時(shí)間較低劑量組明顯縮短(P<0.05)；低劑量組與模型組比較，以及中、高劑量組大鼠耳紅、撓頭及爬籠消失的時(shí)間比較無明顯差異(P>0.05)(表1)。

2.2 各組大鼠腦干IL-1β、TNF-α陽性細(xì)胞數(shù)比較 6組間IL-1β、TNF-α陽性細(xì)胞數(shù)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=7.063，P=0.001；F=8.257，P=0.000)，組間兩兩比較，模型組IL-1β、TNF-α陽性細(xì)胞數(shù)較空白組明顯增多(t=-4.780，-4.444，均P=0.000)，舒馬普坦組(t=6.026，7.052，均P=0.000)、中劑量組(t=3.745，3.815，均P=0.000)、高劑量組(t=3.482，P=0.003；t=3.778，P=0.001)均較模型組模型減少，低劑量組與模型組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.849，P=0.081；t=1.071，P=0.298)。與舒馬普坦組比較，正清風(fēng)痛寧低(t=-7.037，P=0.000；t=-5.847，P=0.000)、中(t=-2.966，P=0.011；t=-9.858，P=0.000)、高(t=-2.517，P=0.022；t=-6.467，P=0.000)劑量組腦干IL-1β、TNF-α陽性細(xì)胞數(shù)增多。與低劑量組比較，正清風(fēng)痛寧中(t=-2.858，P=0.011；t=-2.510，P=0.022)、高(t=-2.468，P=0.024；t=-2.527，P=0.021)劑量組腦干IL-1β、TNF-α陽性細(xì)胞數(shù)減少；正清風(fēng)痛寧中、高劑量組腦干IL-1β、TNF-α陽性細(xì)胞數(shù)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.042，P=0.967；t=-0.271，P=0.790)。具體見表2。

表1 各組大鼠耳紅、撓頭、爬籠出現(xiàn)和消失時(shí)間比較 (n=10，min)

注：與模型組比較，*P<0.05;與舒馬普坦組比較, △P<0.05;與正清風(fēng)痛寧低劑量組比較,#P<0.05

空白組有少許IL-1β、TNF-α陽性細(xì)胞，模型組陽性細(xì)胞明顯增多，舒馬普坦組及正清風(fēng)痛寧各劑量組陽性細(xì)胞數(shù)均較模型組減少，尤以舒馬普坦組及正清風(fēng)痛寧中、高劑量組陽性細(xì)胞數(shù)減少明顯(圖1、圖2)。

表2 各組大鼠腦干IL-1β、TNF-α陽性細(xì)胞數(shù)組間比較，個(gè)/視野)

與空白組比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05；與舒馬普坦組比較，#P<0.05；與低劑量組比較，▲P<0.05

A：空白組；B：模型組；C：舒馬普坦組；D：高劑量組；E：中劑量組；F：低劑量組

圖1 各組大鼠腦干IL-1β表達(dá)：箭頭所示為IL-1β陽性細(xì)胞(免疫組化×400)

A：空白組；B：模型組；C：舒馬普坦組；D：高劑量組；E：中劑量組；F：低劑量組

圖2 各組大鼠腦干TNF-α表達(dá)：箭頭所示為TNF-α陽性細(xì)胞(免疫組化×400)

3 討論

偏頭痛的發(fā)病機(jī)制說法眾多，三叉神經(jīng)血管學(xué)說是目前解釋偏頭痛的主要學(xué)說之一。該學(xué)說認(rèn)為，分布于血管或腦膜的三叉神經(jīng)受到刺激時(shí)去極化激活，激活的三叉神經(jīng)系統(tǒng)釋放肽類物質(zhì)，使血管擴(kuò)張，產(chǎn)生神經(jīng)源性炎性反應(yīng)，進(jìn)而刺激痛覺纖維順行性傳導(dǎo)，經(jīng)腦干進(jìn)入三叉神經(jīng)核，并如此形成循環(huán)，最終出現(xiàn)頭痛[3]。

GTN動(dòng)物模型是一個(gè)公認(rèn)的偏頭痛模型[1]，是目前用于研究人類偏頭痛發(fā)病機(jī)制較理想的選擇。神經(jīng)源性炎性反應(yīng)被認(rèn)為是偏頭痛發(fā)作的基本病理生理之一。5-HT受體激動(dòng)劑(如舒馬普坦)治療偏頭痛的肯定療效已達(dá)成共識。本實(shí)驗(yàn)通過建立GTN偏頭痛大鼠模型，以舒馬普坦作為陽性藥物對照組，觀察大鼠腦干IL-1β、TNF-α表達(dá)。

IL-1β、TNF-α是主要的炎性介質(zhì)，在腦內(nèi)由多種神經(jīng)元、大小膠質(zhì)等活性細(xì)胞合成及分泌。神經(jīng)源性炎性反應(yīng)可使IL-1β、TNF-α分泌增多，上調(diào)的IL-1β、TNF-α可激活中性粒細(xì)胞，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞間黏附分子，加強(qiáng)白細(xì)胞黏附于血管內(nèi)皮的能力，引起血管舒縮功能障礙，強(qiáng)化三叉神經(jīng)的炎性反應(yīng)狀態(tài)，增加腦膜傷害性感受器的敏感性。周兆麗等[4]發(fā)現(xiàn)靜脈注射GTN 0.5 h后觀察IL-1β蛋白表達(dá)量即有增高，Reuter等[5]發(fā)現(xiàn)注射GTN 1 h后IL-1β蛋白表達(dá)增高。在急性腦血管病及偏頭痛患者血漿、腦脊液中IL-1β、TNF-α水平均升高[6-7]，Rozen等發(fā)現(xiàn)在每日持續(xù)頭痛患者腦脊液中TNF-α水平升高，而血清中水平正常，提示TNF-α參與了中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性反應(yīng)的發(fā)生過程中，這可能是頭痛患者久治不愈的原因之一[8]。與上述文獻(xiàn)報(bào)道類似，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明模型組大鼠腦干IL-1β、TNF-α表達(dá)較空白組增多(P<0.05)。

正清風(fēng)痛寧主要成分青藤堿是從中藥青風(fēng)藤的根和莖中提取的生物堿單體，化學(xué)結(jié)構(gòu)與嗎啡相似，但無軀體及精神依賴性，使用安全性較大，具有明顯的抗炎鎮(zhèn)痛作用。青藤堿可透過血-腦脊液屏障，干預(yù)核轉(zhuǎn)錄因子κβ(nucleare facter-kappa κ,NF-κβ)激活通路，抑制IL-1β、TNF-αmRNA表達(dá)[8]，下調(diào)炎性因子IL-1β、TNF-α水平。藥理學(xué)研究顯示，青藤堿對IL-1β基因及TNF-α蛋白表達(dá)有明顯的抑制作用，其抗炎作用靶點(diǎn)主要是抑制炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生[9-10]。吳志茹等[11]報(bào)道青藤堿可降低患者血清C反應(yīng)蛋白(CRP)、IL-1、IL-6、TNF-α水平，從而改善患者微循環(huán)炎性狀態(tài)。本研究中發(fā)現(xiàn)，與模型組比較，正清風(fēng)痛寧中、高劑量組大鼠腦干IL-1β、TNF-α表達(dá)明顯減少(P<0.05)，與上述報(bào)道相似。本研究還發(fā)現(xiàn)中、高劑量組大鼠耳紅、爬籠、撓頭等癥狀減少，持續(xù)時(shí)間比模型組縮短(P<0.05)，提示正清風(fēng)痛寧中、高劑量可能抑制炎性細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α在腦干的表達(dá)，從而改善GTN偏頭痛模型大鼠行為癥狀。本文作者的前期研究表明，青藤堿可上調(diào)偏頭痛大鼠腦干5-HT能系統(tǒng)活性[2]，結(jié)合本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，推測青藤堿可能抑制炎性因子IL-1β、TNF-α表達(dá)，減輕三叉神經(jīng)炎性狀態(tài)，同時(shí)上調(diào)5-HT能系統(tǒng)，增加體內(nèi)鎮(zhèn)痛物質(zhì)水平，最終對偏頭痛起鎮(zhèn)痛作用。

本實(shí)驗(yàn)以治療偏頭痛經(jīng)典藥物舒馬普坦為陽性藥物對照，結(jié)果顯示與舒馬普坦組比較，正清風(fēng)痛寧低、中、高劑量組大鼠腦干IL-1β、TNF-α陽性細(xì)胞數(shù)較明顯增多，提示本實(shí)驗(yàn)所用正清風(fēng)痛寧各劑量組對偏頭痛大鼠腦干IL-1β、TNF-α陽性細(xì)胞數(shù)抑制作用可能不及舒馬普坦，其他不同劑量的正清風(fēng)痛寧是否能更明顯的抑制偏頭痛大鼠腦干炎性細(xì)胞因子的表達(dá)有待進(jìn)一步研究明確。

本研究結(jié)果表明，正清風(fēng)痛寧可以抑制IL-1β、TNF-α在偏頭痛大鼠腦干的表達(dá)，改善偏頭痛大鼠行為癥狀，一定程度上為正清風(fēng)痛寧治療偏頭痛提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)依據(jù)。

[1]Tassorelli C,Rreco R,Wang D,et al.Nitroglyerin induces hyperalgesia in rat—a time-coure study[J]. Eur J Pharmacol,2003,464(2-3):159-162.

[2]楊麗，羅國標(biāo)，劉曉麗，等.青藤堿對偏頭痛大鼠血漿CGRP、SP含量及腦干5-HT表達(dá)的影響[J]. 中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志，2013，30(1)：60-63.

[3]劉春梅,周俊山. 偏頭痛的國際分類、診斷標(biāo)準(zhǔn)、發(fā)病機(jī)制與防治研究進(jìn)展[J]. 疑難病雜志, 2010, 9(12): 953-955.

[4]周兆麗,張吉臻.靜脈注射三酰甘油大鼠腦膜炎癥因子IL-1β及COX-2表達(dá)的研究[J].中國實(shí)用內(nèi)科雜志,2006，26(Suppl 2):59-60.

[5]Reuter U，Bolay H，Jansen-Olesen I，et al．Delayed inflammation in rat meninges：implications for migraine pathophysiotogy[J]．Brain，2001，124 (Pt12):2490-2502．

[6]Yoshiuchi I，Itoh N，Nakano M，et al. Case report of Klinefelter’s syndrome with severe diabetes，dyslipidemia，and stroke: The effect of pioglitazone and other anti-inflammatoryagents on interleukin-6 and -8，tumor necrosis factor-alpha，and C-reactive protein[J]. Diabetes Care，2006，29(8)：1981.

[7]Rozen T, Swidan SZ. Elevation of CSF tumor necrosis factor alpha levels in new daily persistent headache and treatment refractory chronic migraine[J].Headache，2007，47(7):1050-1055.

[8]Wang Y，F(xiàn)ang YF，Zhou X，et al．Effect of FengTongNing ZhengQing on cytokines expressed by peritoneal macrophages in adjuvant arthritis rats[J]．Zhonghua Feng Shi Bing Xue Za Zhi,2003，7(7)：415-419．

[9]Moskowitz MA. Pathophysiology of headache—past and present[J].Headache,2007,47(Suppl 1):S58-63.

[10]李曉娟,王培訓(xùn),劉良.青藤堿抗炎抗風(fēng)濕作用機(jī)理研究[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2004,21(1):34-36.

[11]吳志茹,程彤,賈志芳.鹽酸青藤堿對血液透析患者微炎癥狀態(tài)的影響[J].臨床薈萃，2008, 23(19): 1420-1421.

(本文編輯：鄒晨雙)

Effects of ZhengQing FengTongNing on IL-1 β and TNF- α in the brain stem of the rat migraine model

ZHANGZhongju,LIUXiaoli,YIGuibiao,YUNa,YANGLi*.

*DepartmentofNeurology,AffiliatedHospitalofZunyiMedicalCollege,Zunyi,Guizhou563003,China

Yang Li,Email:yangli1668@126.com

Objective To observe the effect of ZhengQing FengTongNing on the expression of inflammatory cytokines IL-1β and TNF-α in the brainstem of migraine rats, discuss the pharmacology of ZhengQing FengTongNing in migraine, and provide the theoretical basis for the development of new drugs for migraine. Methods Sixty Wistar rats (half female and half male) were randomly divided into 6 groups：the normal control group, the migraine model group，the sumatriptan group，the ZhengQing FengTongNing low-dose intervention group, the ZhengQing FengTongNing medium-dose intervention group, the ZhengQing FengTongNing high-dose intervention group. Except the normal control group, migraine model of the other 5 groups of rats were produced by subcutaneous injection of nitroglycerin.After modeling and drugs intervention, the changes of behavior and symptom of rats were observed，and the number of cells positive for IL-1β and TNF-α in the brainstem of each group were measured by immunohistochemical SP method.Results There were significant differences of the number of cells positive for IL-1β and TNF-α in all the groups(F=7.063，8.257，P<0.05)．Further pairwise comparison showed that cells positive for IL-1β(18.9±8.17，t=-4.780,P=0.000) and TNF-α (14.30±6.41，t=-4.444,P=0.000)of the model group were more than the normal control group respectively(P<0.05). Compared with the model group，the number of cells positive for IL-1β and TNF-α in the sumatriptan group(2.80±2.15，t=6.026；0.00±0.00，t=7.052), the medium-dose group(7.70±4.76，t=3.745；6.20±1.99，t=3.815) and the high-dose group(7.80±5.90，t=3.482,P=0.003；5.90±2.88，t=3.778,P=0.001) were significantly decreased. In the low-dose intervention groups, the number of cells positive for IL-1β(13.5±4.30，t=1.849，P=0.081) and TNF-α(11.30±6.11，t=1.071,P=0.298) in brainstem had no statistical difference compared with the model group. The number of cells positive for IL-1β and TNF-α in brainstem of the sumatriptan group was less than the low-dose intervention group(t=-7.037，P=0.000；t=-5.847，P=0.000), the medium-dose group(t=-2.966，P=0.011；t=-9.858，P=0.000), and the high-dose group(t=-2.517，P=0.022；t=-6.467，P=0.000). Compared with the ZhengQing FengTongNing low-dose intervention group, the number of cells positive for IL-1β and TNF-α significantly decreased in brainstem of the medium-dose group(t=-2.858，P=0.011；t=-2.510，P=0.022) and high-dose group(t=-2.468，P=0.024；t=-2.527，P=0.021); the number of cells positive for IL-1β and TNF-α in the medium-dose group and high-dose group had no statistical difference(t=0.042，P=0.967；t=-0.271，P=0.790). Conclusions ZhengQing FengTongNing may achieve the effect of treatment in migraine rats, and one of its mechanisms may be inhibiting the expression of inflammatory cytokines IL-1β and TNF-α.

ZhengQing FengTongNing; migraine; interleukin-1beta; tumor necrosis factor-alpha

10.3969/j.issn.1006-2963.2015.02.006

貴州省省長基金項(xiàng)目〔黔省專合字(2008)112號〕

563003遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2010級研究生(張中菊，現(xiàn)工作于遵義市第一人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科)； 563003遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科(劉曉麗)，神經(jīng)內(nèi)科(于娜、楊麗)；414500平江縣第一人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科(易桂標(biāo))

楊麗，Email：yangli1668@126.com

R747.2

A

1006-2963 (2015)02-0096-06

2013-07-21)