趙紅菊 趙雙春

歐盟水飛薊提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的含量測定研究及啟示

趙紅菊 趙雙春

（遼寧省藥品認(rèn)證中心，遼寧沈陽110003）

通過對歐盟水飛薊提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和我國水飛薊素質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對比分析研究，指出了目前我國水飛薊素質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與歐盟水飛薊提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)之間存在的差異，并提出了相關(guān)的建議。

歐盟；水飛薊提取物；水飛薊素；含量

1 水飛薊提取物的定義

《中華人民共和國藥典（2010年版）》對“水飛薊”的定義為菊科植物水飛薊Silybu mmarianum（L.）Gaertn.的干燥成熟果實(shí)。待秋季水飛薊果實(shí)成熟時，采收其果序，曬干，打下果實(shí)，除去雜質(zhì)，再曬干。在國家藥品標(biāo)準(zhǔn)中，則將“水飛薊素”（Silymarn）描述為由菊科植物水飛薊的果實(shí)，經(jīng)提取精制所得的松散粉末。

歐盟藥典8.0對“水飛薊干燥提取物（以下簡稱為水飛薊提取物）”（Milk Thistle Dry Extract）進(jìn)行了定義，即為水飛薊果實(shí)經(jīng)精煉提取后制備而成。從其定義可以看出，歐盟藥典中的“水飛薊干燥提取物”即我國藥品標(biāo)準(zhǔn)中的“水飛薊素”。

2 水飛薊提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

2.1 水飛薊提取物含量限度

2.1.1 歐盟水飛薊提取物含量限度

歐盟對水飛薊提取物的含量進(jìn)行了詳細(xì)的規(guī)定：以水飛薊賓計(jì)，含水飛薊素應(yīng)為標(biāo)示量的90%～110%；水飛薊素在干燥提取物中的含量應(yīng)在30%～65%。以水飛薊素計(jì)，含水飛薊亭和水飛薊寧總量為20%～45%，含水飛薊賓A和水飛薊賓B總量為40%～65%，含異水飛薊賓A和異水飛薊賓B總量為10%～20%。

2.1.2 我國水飛薊素含量限度

我國國家藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中對“水飛薊素”的含量測定為按干燥品計(jì)算，含水飛薊素以水飛薊賓（C25H22O10）計(jì)算，不得少于68%；含水飛薊賓和異水飛薊賓不得少于30%。

2.2 水飛薊提取物含量測定方法

2.2.1 歐盟水飛薊提取物含量測定方法

歐盟對水飛薊提取物含量測定進(jìn)行了詳細(xì)的規(guī)定，其含量測定選擇液相色譜法，具體方法藥典規(guī)定如下：

測試溶液：在甲醇溶液中溶解60 mg提取物，并且用同樣溶劑稀釋至100 mL。

對照溶液：在甲醇中溶解相當(dāng)于10 mg水飛薊賓的水飛薊對照提取物，并且用同樣溶劑稀釋至100 mL。

色譜柱：柱長=0.125 m，柱直徑=4 mm。流動相A：磷酸-甲醇-水（0.5:35:65）。流動相B：磷酸-甲醇-水（0.5:50:50）。時間—流動相情況如表1所示。流速：0.8 mL/min。

表1 時間—流動相

檢測波長：288 nm。

注射對照溶液：10 μL。

鑒別峰：通過水飛薊對照提取物色譜圖，可得到水飛薊寧、水飛薊亭、水飛薊賓A、水飛薊賓B、異水飛薊賓A和異水飛薊賓B的色譜峰。但測試溶液中的水飛薊寧色譜峰可能在大小上會有差異或者消失。

保留時間：水飛薊賓B約30 min，如果需要，調(diào)整梯度時間段。

分離度：水飛薊賓A峰和水飛薊賓B峰之間的分離度應(yīng)不小于1.8。

水飛薊素總含量以水飛薊賓計(jì)，其公式為：

總水飛薊素中水飛薊寧和水飛薊亭的含量，其公式為：

總水飛薊素中水飛薊賓A和水飛薊賓B的含量，其公式為：

總水飛薊素中異水飛薊賓A和異水飛薊賓B的含量，其公式為：

在上述公式中所涉及的參數(shù)分別表示為：

A1=供試品色譜圖中得到的水飛薊亭峰面積；

A2=供試品色譜圖中得到的水飛薊寧峰面積；

A3=供試品色譜圖中得到的水飛薊賓A峰面積；

A4=供試品色譜圖中得到的水飛薊賓B峰面積；

A5=供試品色譜圖中得到的異水飛薊賓A峰面積；

A6=供試品色譜圖中得到的異水飛薊賓B峰面積；

A7=對照品色譜圖中得到的水飛薊賓A峰面積；

A8=對照品色譜圖中得到的水飛薊賓B峰面積；

m1=制備對照品溶液所使用的對照提取物質(zhì)量，g；

m2=制備供試品溶液所使用的提取物質(zhì)量，g；

p=對照提取物中水飛薊賓A和水飛薊賓B總的百分含量。

2.2.2 我國水飛薊素含量測定方法

水飛薊素（總黃酮）對照品溶液的制備：取水飛薊賓對照品約10 mg，精密稱定，將其置25 mL量瓶中，加甲醇適量，水浴加熱使其溶解，冷卻至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

供試品溶液的制備：取本品50 mg，精密稱定，將其置100 mL量瓶中，加甲醇適量，水浴加熱使其溶解，冷卻至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

水飛薊素測定法：精密量取對照品溶液和供試品溶液各5 mL，分別置25 mL量瓶中，分別精密加入2，4二硝基苯肼溶液2 mL，置50～55 ℃水浴中反應(yīng)50 min，冷卻，加氫氧化鉀-甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，離心10 min，精密量取上清液5 mL，置25 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，按照分光光度法，在490 nm的波長處分別測定吸收度，計(jì)算，即得。

水飛薊賓按照《中華人民共和國藥典（2000年版）》二部附錄VD高效液相色譜法測定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-冰醋酸（50:50:0.5）為流動相；檢測波長為288 nm。理論板數(shù)按水飛薊賓峰計(jì)算應(yīng)不低于5 000。

水飛薊賓測定法：取本品0.11 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另外精密稱取經(jīng)60 ℃減壓干燥3 h的水飛薊賓對照品適量，加流動相溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含0.1 mg水飛薊賓的溶液，作為對照品溶液。精密吸取上述兩種溶液各5 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以水飛薊賓與異水飛薊賓峰面積之和計(jì)算，即得。

3 歐盟水飛薊提取物含量測定與我國水飛薊素含量測定對比啟示

通過對比歐盟水飛薊提取物含量測定標(biāo)準(zhǔn)與我國水飛薊素含量測定標(biāo)準(zhǔn)可知：

（1）歐盟對水飛薊提取物中各有效成分的劃分更加細(xì)致，規(guī)定了6種有效成分，同時也將有效成分的含量限度要求寫明在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中。目前我國水飛薊素質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只規(guī)定了水飛薊賓和異水飛薊賓總的含量限度要求，有效成分檢驗(yàn)項(xiàng)目相對較少。

（2）歐盟對水飛薊提取物的含量測定方法進(jìn)行了詳細(xì)的描述，規(guī)定了詳細(xì)的試驗(yàn)方法和計(jì)算公式，6種有效成分均采用色譜法進(jìn)行計(jì)算，這有利于企業(yè)和相關(guān)檢測機(jī)構(gòu)統(tǒng)一執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)。目前我國水飛薊素質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中缺少對有效成分詳細(xì)的計(jì)算公式描述，水飛薊素含量采用分光光度法，而水飛薊賓和異水飛薊賓總量采用高效液相色譜法，兩種不同的方法也許會對最終的結(jié)論產(chǎn)生影響。

4 結(jié)語

目前，我國共有11家藥品生產(chǎn)企業(yè)擁有水飛薊素品種，部分企業(yè)已開展了相關(guān)出口業(yè)務(wù)。建議國內(nèi)相關(guān)的檢測機(jī)構(gòu)不斷提高完善水飛薊素的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)一步和發(fā)達(dá)國家的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)接軌，不斷提升我國水飛薊素品種的質(zhì)量檢測水平。

2015-03-26

趙紅菊（1983—），女，遼寧鞍山人，碩士研究生，副主任中藥師，研究方向：藥品風(fēng)險管理。

趙雙春（1983—），男，河北邯鄲人，博士在讀，主管藥師，研究方向：藥品風(fēng)險管理。