陳建霞 黃衍鋒 張旭

深圳市龍崗中心醫(yī)院檢驗科，深圳518116

XE-5000全自動血細(xì)胞分析儀檢測白細(xì)胞分類與人工鏡檢結(jié)果對比分析

陳建霞 黃衍鋒 張旭

深圳市龍崗中心醫(yī)院檢驗科，深圳518116

目的探討XE-5000全自動血細(xì)胞分析儀檢測白細(xì)胞（WBC）分類的準(zhǔn)確性。方法隨機(jī)收集本院2012年6月～2013年6月門診、住院患者及健康體檢者共208例，根據(jù)年齡進(jìn)行分組，其中成人組100例、兒童組60例、新生兒組48例，分別用Sysmex XE-5000與人工鏡檢法對不同年齡組的靜脈血進(jìn)行WBC分類，采用統(tǒng)計學(xué)軟件對兩種方法的結(jié)果進(jìn)行對比分析，并進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果除嗜堿粒細(xì)胞外，成人組儀器法與人工鏡檢法檢測WBC分類計數(shù)結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），且呈正相關(guān)（P<0.05）。除單核細(xì)胞、嗜堿粒細(xì)胞外，兒童組及新生兒組WBC分類計數(shù)結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），且呈正相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論Sysmex XE-5000全自動血細(xì)胞分析儀測定WBC分類具有良好的性能，適用于對大批量標(biāo)本進(jìn)行快速有效的檢測，但不能完全取代人工鏡檢法，兩者結(jié)合，才能保證檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

全自動血細(xì)胞分析儀；白細(xì)胞分類；人工鏡檢

白細(xì)胞（white blood cell，WBC）作為人體的免疫細(xì)胞，當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)炎癥或其他疾病時，其分類計數(shù)成為臨床血液學(xué)檢驗中的常規(guī)項目。研究表明，WBC分類計數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性能夠為臨床診斷及治療提供重要的信息[1-3]。人工鏡檢是臨床上常用的WBC分類方法，但是其操作較為復(fù)雜，費時費力，近年來，全自動血細(xì)胞分析儀被廣泛應(yīng)用于WBC分類，大大減輕了檢驗工作人員的工作強(qiáng)度[4-5]，但是臨床上對于其準(zhǔn)確性存有爭議，本文對此進(jìn)行初步探討，為其臨床應(yīng)用積累經(jīng)驗。

1 資料與方法

1.1 一般資料

從本院2012年6月～2013年6月門診、住院患者及健康體檢者中隨機(jī)抽取208例，根據(jù)年齡分為3組，成人組（年齡15～70歲）100例，男性52例，女性48例；兒童組（年齡1個月～14歲）60例，男性28例，女性32例；新生兒組（年齡0～1個月）48例，男性26例，女性22例。

1.2 儀器與試劑

Sysmex XE-5000全自動血細(xì)胞分析儀（帶原裝配套試劑、校準(zhǔn)物和質(zhì)控物）；Olympus光學(xué)顯微鏡；瑞氏染液（自配）；EDTA-K2真空抗凝管（江西精致醫(yī)療器材有限公司）。

1.3 方法

成人組及兒童組清晨空腹采集肘靜脈血3ml，新生兒組采集足跟末梢血3 ml，其中2 ml置于EDTAK2真空抗凝管中，輕輕顛倒混勻，室溫條件下保存，采用原廠配套高、中、低值質(zhì)控物對Sysmex XE-5000全自動血細(xì)胞分析儀進(jìn)行監(jiān)測，確保儀器處于正常工作狀態(tài)后，嚴(yán)格按照操作指南進(jìn)行血細(xì)胞分析儀檢測，2 h內(nèi)完成檢測。剩余部分制作成厚薄適宜的血片，采用瑞氏染液染色后，在血片體尾交界處進(jìn)行分類。WBC分類計數(shù)參照NCCLS的H20-A標(biāo)準(zhǔn)[6]，由本科室兩名有經(jīng)驗的副主任技師依據(jù)雙盲法進(jìn)行。

1.4 觀測指標(biāo)

人工鏡檢每片在體尾交界厚薄適中處瀏覽分類200個有核細(xì)胞，包括中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞、嗜堿粒細(xì)胞，其中中性粒細(xì)胞包括中幼粒細(xì)胞、晚幼粒細(xì)胞、桿狀核粒細(xì)胞和分葉核粒細(xì)胞，淋巴細(xì)胞包括幼淋巴細(xì)胞、異型淋巴細(xì)胞及成熟淋巴細(xì)胞。取均值與XE-5000的結(jié)果進(jìn)行比較。

1.5 質(zhì)量控制

全血細(xì)胞計數(shù)利用Sysmex XE-5000參加了衛(wèi)生部、廣東省臨床檢驗中心的室間質(zhì)評活動，血細(xì)胞形態(tài)也參加了原衛(wèi)生部臨床檢驗中心的室間質(zhì)評活動，均取得了滿意的成績。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析；計數(shù)資料以率或構(gòu)成比表示，行χ2檢驗；計量資料以±s表示，行t檢驗；相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)性分析；以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 成人組儀器法與人工鏡檢法檢測WBC分類計數(shù)的比較

除嗜堿粒細(xì)胞外，成人組儀器法與人工鏡檢法檢測WBC分類計數(shù)結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P> 0.05），且呈中度或高度正相關(guān)（P<0.05）（表1）。

表1 成人儀器法與人工鏡檢法檢測WBC分類計數(shù)的比較（%，±s，n=100）

表1 成人儀器法與人工鏡檢法檢測WBC分類計數(shù)的比較（%，±s，n=100）

WBC分類儀器法人工鏡檢法t值P值相關(guān)性r值P值中性粒細(xì)胞淋巴細(xì)胞單核細(xì)胞嗜酸粒細(xì)胞嗜堿粒細(xì)胞60.96±12.12 29.17±10.91 6.39±1.94 2.96±2.70 0.52±0.50 58.69±11.36 31.85±10.02 5.90±1.86 2.86±2.60 0.70±0.45 0.965 0.742 1.005 0.087 2.633 >0.05 >0.05 >0.05 >0.05 <0.05 0.925 0.948 0.661 0.863 0.427 <0.05 <0.05 <0.05 <0.05 >0.05

2.2 兒童儀器法與人工鏡檢法檢測WBC分類計數(shù)的比較

除單核細(xì)胞、嗜堿粒細(xì)胞外，兒童組儀器法與人工鏡檢法檢測WBC分類計數(shù)結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），且呈高度正相關(guān)（P<0.05）（表2）。

表2 兒童儀器法與人工鏡檢法檢測WBC分類計數(shù)的比較（%，±s，n=60）

表2 兒童儀器法與人工鏡檢法檢測WBC分類計數(shù)的比較（%，±s，n=60）

WBC分類儀器法人工鏡檢法t值P值相關(guān)性r值P值中性粒細(xì)胞淋巴細(xì)胞單核細(xì)胞嗜酸粒細(xì)胞嗜堿粒細(xì)胞45.15±22.84 45.22±22.48 7.04±2.89 2.29±2.73 0.30±0.24 44.09±20.79 47.71±20.26 5.26±2.16 2.43±2.69 0.51±0.49 1.074 1.452 2.873 0.385 3.071 >0.05 >0.05 <0.05 >0.05 <0.05 0.935 0.890 0.583 0.871 0.522 <0.05 <0.05 >0.05 <0.05 >0.05

2.3 新生兒儀器法與人工鏡檢法檢測WBC分類計數(shù)的比較

除單核細(xì)胞、嗜堿粒細(xì)胞外，新生兒兒童組儀器法與人工鏡檢法檢測WBC分類計數(shù)結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），且呈正相關(guān)（P<0.05）（表3）。

表3 新生兒儀器法與人工鏡檢法檢測WBC分類計數(shù)的比較（%，±s，n=48）

表3 新生兒儀器法與人工鏡檢法檢測WBC分類計數(shù)的比較（%，±s，n=48）

儀器若不能分類，以儀器中研究參數(shù)代替

WBC分類儀器法人工鏡檢法t值P值相關(guān)性r值P值中性粒細(xì)胞淋巴細(xì)胞單核細(xì)胞嗜酸粒細(xì)胞嗜堿粒細(xì)胞43.61±15.27 43.84±13.67 8.12±4.06 4.02±2.55 0.41±0.34 44.90±14.66 43.56±13.91 6.83±3.92 3.91±2.71 0.80±0.40 0.571 0.946 3.012 0.126 4.742 >0.05 >0.05 <0.05 >0.05 <0.05 0.923 0.790 0.515 0.866 0.480 <0.05 <0.05 >0.05 <0.05 >0.05

3 討論

近年來，全自動血細(xì)胞分析儀由于每小時可以完成150例標(biāo)本的血常規(guī)檢測，成為各大中型醫(yī)院臨床實驗室常用的血常規(guī)儀器，其基本原理是應(yīng)用半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞技術(shù)結(jié)合核酸熒光染色技術(shù)，當(dāng)半導(dǎo)體激光照射在經(jīng)鞘流技術(shù)處理的細(xì)胞上，根據(jù)每個細(xì)胞所產(chǎn)生的3種信號來鑒別細(xì)胞類別：前向散射光（FSC）、側(cè)向散射光（SSC）、側(cè)向熒光（SFL）。前向散射光反映細(xì)胞體積，側(cè)向散射光反映細(xì)胞內(nèi)涵物，如胞質(zhì)顆粒，側(cè)向熒光反映細(xì)胞DNA和RNA含量。研究表明[7-9]，其可以對白細(xì)胞表面物質(zhì)及內(nèi)部結(jié)構(gòu)沒有太大的改變的患者進(jìn)行正確的白細(xì)胞分類，得出正確的結(jié)果，但是當(dāng)細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化時，其不能進(jìn)行正確的分類，容易出現(xiàn)漏檢或者誤判。

本文分別以成人、兒童、新生兒為研究對象，用XE-5000與人工鏡檢法測定白細(xì)胞分類的結(jié)果進(jìn)行對比分析，結(jié)果顯示，除嗜堿粒細(xì)胞外，成人組儀器法與人工鏡檢法檢測WBC分類計數(shù)結(jié)果比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），且呈中度或者高度正相關(guān)（P<0.05），因為對于大部分標(biāo)本，嗜堿粒細(xì)胞所占比例最小，對分類影響有限，所以此結(jié)果說明了XE-5000白細(xì)胞分類結(jié)果可靠、準(zhǔn)確。但對于血液病患者出現(xiàn)幼稚細(xì)胞、嗜堿粒細(xì)胞明顯增高時，儀器法分類結(jié)果不盡如意。儀器法嗜堿粒細(xì)胞比人工鏡檢法要低，特別對于慢性粒細(xì)胞白血病患者，其儀器法分類結(jié)果有的甚至低于人工鏡檢法的30%。部分白血病患者體積小的原始細(xì)胞儀器法會被歸到淋巴細(xì)胞類，體積大的原始、幼稚細(xì)胞會被歸到單核細(xì)胞類，造成淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞比例假性升高。對兒童進(jìn)行研究，結(jié)果顯示，除單核細(xì)胞、嗜堿粒細(xì)胞外，兒童組儀器法與人工鏡檢法檢測WBC分類計數(shù)結(jié)果比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P> 0.05），且呈高度正相關(guān)（P<0.05），考慮是由于前來醫(yī)院就診的兒童大部分是感冒、發(fā)熱、咳嗽、腹瀉的病例，病毒感染的居多，所以異型淋巴細(xì)胞病例往往增高，異型淋巴細(xì)胞體積大，部分形態(tài)也似單核細(xì)胞，儀器容易將這部分細(xì)胞歸到單核細(xì)胞類，造成單核細(xì)胞比例假性升高。如表3所示新生兒組中中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞相關(guān)性較好，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，相關(guān)系數(shù)分別為0.923、0.790、0.866，但單核細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞差異有統(tǒng)計學(xué)意義，其相關(guān)系數(shù)也較低，分別為0.515和0.480。研究表明[10]，新生兒外周血WBC主要為中性粒細(xì)胞，出生后第6～9天才逐漸下降至與淋巴細(xì)胞大致相等，此后淋巴細(xì)胞逐漸增多，可達(dá)70%，而出生后2周的新生兒單核細(xì)胞可呈生理性增多，可達(dá)15%以上。此外，新生兒造血功能相當(dāng)?shù)幕钴S，造成外周血中常見多種幼稚細(xì)胞，如有核紅細(xì)胞，中、晚幼粒細(xì)胞等，這些幼稚細(xì)胞往往儀器分析結(jié)果造成較大干擾，使儀器不能對它們進(jìn)行正確的分類，進(jìn)而與鏡檢結(jié)果比較差別較大，相關(guān)性較低。

文獻(xiàn)報道[11-13]，雖然臨床上全自動血細(xì)胞分析儀已廣泛使用WBC分類，但是至今為止尚缺乏具有溯源性的商品校準(zhǔn)物，故各級室間質(zhì)量評價也暫時沒有將其列為上報項目，國內(nèi)室內(nèi)質(zhì)控對白細(xì)胞分類的控制也不盡人意。所以白細(xì)胞分類的金標(biāo)準(zhǔn)仍是傳統(tǒng)的人工鏡檢分類[14-15]。傳統(tǒng)的瑞氏染色WBC分類計數(shù)通常要經(jīng)過手工推片，固定染色鏡檢等步驟，其操作復(fù)雜耗時，工作效率低，常因人為因素造成誤差。但在顯微鏡下可直接觀察細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)、染色質(zhì)著色的深淺及細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化，并加以辨認(rèn)，而儀器法無法取代這一功能。

綜上所述，Sysmex XE-5000全自動血細(xì)胞分析儀測定白細(xì)胞分類具有良好的性能，適用于對大批量標(biāo)本進(jìn)行快速有效的檢測，但不能完全取代人工鏡檢法，兩者結(jié)合，才能保證檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

[1]葉應(yīng)嫵，王毓三.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].3版.南京：東南大學(xué)出版社，2006：123-124.

[2]張恩穎，丁旭，王國才，等.XE5000與顯微鏡對白細(xì)胞計數(shù)及分類結(jié)果對比[J].中國臨床研究，2010，23（4）：321-322.

[3]王靖.白細(xì)胞分類顯微鏡法與CD1600血細(xì)胞分析儀法的對比分析[J].中國中醫(yī)藥資訊，2010，2（13）：119.

[4]劉紋，鄭炘，劉曉敏.血細(xì)胞分析儀應(yīng)用性能評價分析[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生，2011，19（2）：28-29.

[5]潘潔茹，蔡早育，林超萍，等.Sysmex XE-5000全自動血細(xì)胞分析儀性能評價[J].醫(yī)學(xué)檢驗與臨床，2011，22（3）：54-55.

[6]National Committee for Clinical Laboratory Standards.Reference leukocyte differential count（proportional）and evaluation of instrument methods：approved standard.NCCLSDocument H20-A[S].NCCLS，Wayne（USA），1992.

[7]張恩穎，丁旭，王國才，等.XE5000與顯微鏡對白細(xì)胞計數(shù)及分類結(jié)果對比[J].中國臨床研究，2010，23（4）：321-322.

[8]唐滬強(qiáng)，徐凱聲，吳敏良，等.庫爾特STKS血細(xì)胞分析儀對白細(xì)胞分類異常提示的可信性[J].臨床檢驗雜志，2000，18（3）：176-177.

[9]Novis DA，Walsh M，Wilkinson D，et al.Laboratory productivity and the rate of manual peripheral blood smear review：a College of American Pathologists Q-Probes study of 95，141 complete blood count determinations performed in 263 institutions[J].Arch Pathol Lab Med，2006，130（5）：596-601.

[10]龔道元.臨床基礎(chǔ)檢驗學(xué)[M].北京：高等教育出版社，2007：25-26.

[11]李明勇，李焱鑫，陳梅，等.血細(xì)胞分析儀白細(xì)胞分類計數(shù)量值溯源性的建立[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2011，26（6）：150-152.

[12]許秀妝，陳燕妝，章金燦，等.Sysmex XE-5000全自動血細(xì)胞分析儀性能評價[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2011，8（23）：2896-2898.

[13]陳云貞.應(yīng)用全自動血液分析儀檢測胸腹水有核細(xì)胞的意義[J].中國保健營養(yǎng)，2013，23（7）：212-213.

[14]呂艷，黃杰.應(yīng)用ROC曲線制定XE2100血液分析儀的白細(xì)胞分類復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)[J].四川醫(yī)學(xué)，2009，30（5）：728-730.

[15]于修文，姚娟，汪國慶.急診化驗室SYSMEX-800i自動血細(xì)胞分析及白細(xì)胞分類復(fù)檢規(guī)則的建立和評價[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2011，32（5）：557-559.

Com parative analysis of XE-5000 automatic hematology analyzer and artificialm icroscopy in detecting white blood cell classification

CHEN Jian-xia HUANG Yan-feng ZHANG Xu
Department of Clinical Laboratory,Longgang Central Hospital of Shenzhen City,Shenzhen 518116,China

Objective To study the accuracy of XE-5000 automatic hematology analyzer in detecting the white blood cell(WBC)classification.M ethods 208 cases of outpatients,inpatients and subjects of health examination treated in our hospital from June 2012 to June 2013 were randomly selected and divided into the adult group(100 cases),the children group(60 cases)and the neonate group(48 cases)according to age.TheWBC in venous blood of the patients in different groupswere classified respectively by Sysmex XE-5000 method and artificialmicroscopymethod.The results of the twomethodswere compared and analyzed by using statistical software,and the correlation analysiswas carried out.Results In addition to the basophils,the difference of the count results of theWBC classification in the adult group detected by using instrumentmethod and artificialmicroscopymethod was not significant(P>0.05),and had a positive correlation(P<0.05).In addition to themonocytes and basophils,the difference of the count results of theWBC classification in the children group and neonate group was not significant(P>0.05),and had a positive correlation(P<0.05).Conclusion Using the Sysmex XE-5000 automatic blood cell analyzer to detect the white blood cell classification has a good performance and it is suitable to detect a large quantity of samples quickly and effectively,but it can not completely replace theartificialmicroscopy.If the twomethodsare combined,itcan ensure theaccuracy and reliability of test results.

Automatic hematology analyzer;White blood cell classification;Artificialmicroscopy

R446.11

A

1674-4721（2015）04（c）-0124-03

2015-01-13本文編輯：郭靜娟）