董自艷 戴 翚

·實驗研究·

氯霉素滴眼液無菌檢查方法的研究

董自艷 戴 翚

目的 建立氯霉素滴眼液的無菌檢查方法。方法 無菌檢查采用薄膜過濾法, 沖洗液為0.1%蛋白胨溶液, 沖洗量為400 ml/濾筒。結(jié)果 此法能有效消除抑菌成分的干擾, 各試驗菌生長良好。結(jié)論 經(jīng)方法學驗證, 所建立的方法適用于氯霉素滴眼液的無菌檢查。

氯霉素；無菌檢查；方法驗證

氯霉素滴眼液用于治療由大腸桿菌、流感嗜血桿菌、克雷伯菌屬、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌和其他敏感菌所致的眼部感染, 如沙眼、結(jié)膜炎、角膜炎、眼瞼緣炎等?！吨袊幍洹?010年版首次規(guī)定眼用制劑必須做無菌檢查［1］, 因此需建立氯霉素滴眼液的無菌檢查方法并進行驗證。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥 HTY-2000A型集菌儀(Gaodetailin)；NS01-A3型全封閉無菌試驗過濾培養(yǎng)器(批號20120701, 北京牛牛基因技術(shù)有限公司)；培養(yǎng)箱(Binder)。硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基(批號120203)、改良馬丁培養(yǎng)基(批號120302)、改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基(批號120520)、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(批號120508)、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(批號120513)、0.1%蛋白胨溶液(批號120217), 由中國食品藥品檢定研究院培養(yǎng)基室提供, 用前進行無菌性和靈敏度檢查, 符合規(guī)定。氯霉素滴眼液, 規(guī)格：8 ml：12.5 g, 遼寧某藥廠生產(chǎn)。

1.2 菌種 枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)［CMCC(B)63 501］、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)［CMCC(B)26 003］、生孢梭菌(Clostridium sporogenes)［CMCC(B)64 941］、銅綠假單胞菌［CMCC(B)10 104］、大腸埃希菌(Escherichia coli)［CMCC(B)44 102］、白色念珠菌(Candida albicans)［CMCC(F)98 001］、黑曲霉(Aspergillus niger)［CMCC(F)98 003］均由中國藥品生物制品檢定所提供。

1.3 方法

1.3.1 菌液的制備 接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基中, 34℃培養(yǎng)24 h；接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中, 24℃培養(yǎng)48 h；接種生孢梭菌至硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基中, 34℃培養(yǎng)24 h。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基上, 24℃培養(yǎng)7 d, 加入5 ml含0.05%聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液清洗孢子, 用含0.05%聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成孢子懸液。上述培養(yǎng)物用0.9%氯化鈉溶液稀釋, 枯草芽孢桿菌懸液稀釋至10-5、金黃色葡萄球菌懸液稀釋至10-6、銅綠假單胞菌與大腸埃希菌懸液稀釋至10-7、白色念珠菌懸液稀釋至10-5、生孢梭菌懸液稀釋至10-7、黑曲霉菌孢子懸液稀釋至10-4。按藥典規(guī)定檢驗上述實驗用菌液, 均約為50～100 cfu/ml［2］。

1.3.2 方法驗證 取供試品10支, 用薄膜過濾法注入無菌濾器中, 每個濾筒分別用0.1%蛋白胨溶液300 ml和400 ml沖洗, 每個濾筒100 ml/次, 然后將1 ml試驗菌液接種到硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中, 另取一個裝有同體積相同培養(yǎng)基的無菌濾筒, 加入等量試驗菌, 作為對照［3,4］。結(jié)果表明, 采用薄膜過濾法以0.1%蛋白胨溶液作為沖洗液, 400 ml/濾筒的沖洗量進行無菌檢查可消除抑菌作用。

2 結(jié)果

無菌檢查：根據(jù)方法驗證各試驗菌的生長情況與《中國藥典》2010版的相關(guān)規(guī)定, 選擇金黃色葡萄球菌作為無菌檢查的陽性對照菌。取供試品10支泵入無菌濾器中, 濾過后分別用0.1%蛋白胨溶液400 ml沖洗, 每個濾筒100 ml/次, 沖洗后每個濾筒加入硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基, 在相應(yīng)條件下培養(yǎng)14 d, 逐日觀察其結(jié)果。具體結(jié)果見表1。

表1 供試品無菌檢查結(jié)果

3 小結(jié)

《中國藥典》2010年版首次規(guī)定眼用制劑必須做無菌檢查, 因此需建立氯霉素滴眼液的無菌檢查方法, 而文獻中并未見其報道, 因此本文建立了氯霉素滴眼液的無菌檢查法并進行了驗證, 為此項檢查工作提供借鑒。

［1］ 國家藥典委員會.中國藥典(二部).北京:中國醫(yī)藥科技出版杜, 2010:1031.

［2］ 李國成, 劉春霞, 余曉霞.復方萘甲唑林滴眼液質(zhì)量標準的研究.今日藥學, 2011(3):161-164.

［3］ 張新妹, 胡昌勤, 趙霞, 等.注射用伏立康唑無菌檢查法的建立.天津藥學, 2003, 15(5):9-11.

［4］ 顧珉.頭孢地尼原料藥的無菌檢查方法學驗證.抗感染藥學, 2014, 11(1):35- 36.

Research of sterility test method for chloramphenicol eye drops

DONG Zi-yan, DAI Hui.Liaoning Fushun City Food and Drug Inspection Institute, Fushun 113006, China

Objective To establish a sterility test method for chloramphenicol eye drops.Methods Membranefilter procedure was applied for sterility test, with 0.1% peptone solution as flushing fluid and 400 ml/filter cartridge as flushing volume.Results This method could effectively eliminate interference by antibacterial components, with good growth of every test organisms.Conclusion Through methodology validation, this established method is suitable for sterility test in chloramphenicol eye drops.

Chloramphenicol; Sterility test; Method validation

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.16.200

2014-12-23］

113006 遼寧省撫順市食品藥品檢驗所(董自艷)；中國食品藥品檢定研究院(戴翚)