曹克任　孫榮嶸　林小暉

摘要：近些年，由食品安全引發(fā)的問題已經(jīng)引起了全社會(huì)的關(guān)注。食品微生物作為評(píng)價(jià)食品安全的一項(xiàng)重要指標(biāo)，越來越受到人們的重視。相對(duì)于傳統(tǒng)的食品微生物檢測(cè)技術(shù)，快速檢測(cè)技術(shù)對(duì)提高檢測(cè)效率和應(yīng)對(duì)突發(fā)事件具有重大意義，越來越受到檢驗(yàn)人員的重視。當(dāng)前主流的快速檢測(cè)技術(shù)有PCR技術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)、ATP生物發(fā)光技術(shù)、LAMP、阻抗法等，本文對(duì)以上幾種快檢技術(shù)進(jìn)行分析總結(jié)和展望。

關(guān)鍵詞：食品安全 食品微生物 快速檢測(cè)

中圖分類號(hào)：TS207.4 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-5336（2015）02-0023-01

伴隨著科技的發(fā)展和人們對(duì)食品安全的重視，作為評(píng)價(jià)食品安全重要指標(biāo)之一的食品微生物，其快速檢測(cè)技術(shù)備受人們的關(guān)注。國(guó)標(biāo)中關(guān)于食品微生物的檢驗(yàn)方法，不僅步驟繁瑣，且耗時(shí)耗力，尤其面對(duì)突發(fā)食品安全事件時(shí)，檢測(cè)結(jié)果往往滯后于監(jiān)管需要。因此，食品微生物快速檢測(cè)技術(shù)備受人們的歡迎。本文將對(duì)近些年來微生物快速檢測(cè)技術(shù)，如PCR技術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)、ATP生物發(fā)光技術(shù)、LAMP、阻抗法等的研究進(jìn)展進(jìn)行分析、總結(jié)和展望。

1 PCR技術(shù)

PCR（Polymerase Chain Reaction）技術(shù)，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，用于擴(kuò)增放大特定DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，是在體外的一種特殊DNA復(fù)制。PCR技術(shù)能在短時(shí)間內(nèi)將特定的基因片段擴(kuò)增數(shù)百萬(wàn)倍。由于其具有簡(jiǎn)便、快速、敏感性高和特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，適用于時(shí)間緊的檢測(cè)工作和突發(fā)食品安全事件。PCR技術(shù)在不斷的發(fā)展，多重PCR、熒光定量PCR、實(shí)時(shí)定量PCR等就是PCR技術(shù)的衍生[1]。PCR技術(shù)耗材多為一次性，配套的儀器設(shè)備較為昂貴。若能進(jìn)一步降低使用成本，必定能擴(kuò)大使用范圍。

2 酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)

酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）是指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到固相載體上，對(duì)免疫酶進(jìn)行染色，利用抗原抗體結(jié)合專一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)集免疫熒光法和放射免疫測(cè)定法優(yōu)點(diǎn)于一身，靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作判斷簡(jiǎn)單、實(shí)驗(yàn)設(shè)備要求簡(jiǎn)單[2]。

3 ATP生物發(fā)光技術(shù)

ATP是活的生物體中的能量貨幣，普遍存在于所有活的生物體中。生物體死亡后，ATP在細(xì)胞內(nèi)酶的作用下很快被分解掉。熒光素-熒光素酶與ATP作用發(fā)光，通過用發(fā)光檢測(cè)儀測(cè)定發(fā)光量從而測(cè)得ATP濃度。根據(jù)樣品中的ATP濃度，即可推算出活菌數(shù)[3]。優(yōu)點(diǎn)是快速、簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好；缺點(diǎn)是不能區(qū)別非微生物ATP且干擾因素較多。

4 LAMP

LAMP即為環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)。是由2000年日本學(xué)者Notomi在Nucleic Acids Res雜志上公開的一種新的適用于基因診斷的恒溫核酸擴(kuò)增技術(shù)。其特點(diǎn)是針對(duì)靶基因的6個(gè)區(qū)域設(shè)計(jì)4種特異引物，在鏈置換DNA聚合酶（的作用下，60-65℃恒溫?cái)U(kuò)增，15-60分鐘左右即可實(shí)現(xiàn)109～1010倍的核酸擴(kuò)增。優(yōu)點(diǎn)是反應(yīng)時(shí)間短、靈敏度高、無需特殊儀器、操作簡(jiǎn)便。缺點(diǎn)是由于靈敏度高，一旦開蓋容易形成氣溶膠污染，造成假陽(yáng)性結(jié)果。

5 阻抗法

微生物在代謝生長(zhǎng)過程中會(huì)引起培養(yǎng)基的電特性變化，阻抗法正是通過測(cè)量該變化從而間接的測(cè)定微生物的含量。培養(yǎng)基中蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物等電惰性的大分子營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)能被微生物轉(zhuǎn)化分解為氨基酸、乳酸鹽等微電活性的小分子物質(zhì)。培養(yǎng)基電阻性與微生物的濃度在微生物生長(zhǎng)的不同時(shí)期有著不同的關(guān)系。通過檢測(cè)培養(yǎng)基的電阻抗從而推算出微生物的濃度。優(yōu)點(diǎn)是能夠檢測(cè)絕大部分食品微生物。

6 展望

食品安全問題異日突出，食品微生物檢測(cè)環(huán)節(jié)極為重要。作為食品衛(wèi)生檢測(cè)的重要一環(huán)-食品微生物檢測(cè)，其快速檢測(cè)技術(shù)亟待發(fā)展。在實(shí)際檢測(cè)過程中，檢驗(yàn)人員可根據(jù)檢測(cè)目標(biāo)和檢測(cè)環(huán)境等選擇合適的快檢方法，也可聯(lián)合使用多種快檢方法，提高檢驗(yàn)效率，服務(wù)監(jiān)管，保障人們的食品安全。

參考文獻(xiàn)

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