聶院玲

摘要：隨著科學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，測(cè)定食品中維生素C的方法越來(lái)越多，其中，熒光光度法具有線性關(guān)系好、靈敏密度高、精密度高等優(yōu)點(diǎn)，因此被廣泛采用。在傳統(tǒng)的熒光測(cè)定法中，操作過(guò)程較為復(fù)雜，并且偏磷酸-醋酸溶液不易配制且存放時(shí)間較短，因此容易對(duì)測(cè)定效果造成影響。本文主要對(duì)傳統(tǒng)的熒光測(cè)定法作了些許改進(jìn)，以草酸替代偏磷酸-醋酸溶液，并在此基礎(chǔ)上，針對(duì)影響熒光強(qiáng)度的因素、工作曲線、變異系數(shù)進(jìn)行分析，結(jié)合本次研究，最終提出了改進(jìn)后的熒光測(cè)定法與經(jīng)典法相比較的結(jié)果，以及樣品分析的具體方法。最終希望通過(guò)本文的分析研究，實(shí)現(xiàn)提高分析速度的目標(biāo)。

關(guān)鍵詞：維生素C 熒光光度法 食品測(cè)定

中圖分類號(hào)：TQ466.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-5336（2015）02-0020-01

維生素C屬于水溶性維生素，又稱抗壞血酸（AA）。測(cè)量維生素C的方法很多，包括酶法、滴定法、光度法、電化學(xué)法等等，其中，關(guān)于熒光法測(cè)定維生素C的報(bào)道少之又少，沒(méi)有得到有關(guān)學(xué)者的重視和關(guān)注。通過(guò)熒光法來(lái)測(cè)定食品中的抗壞血酸是建立在鄰苯二胺（OPDA）基礎(chǔ)上的，使其與抗壞血酸發(fā)生熒光反應(yīng)。目前，熒光法由于其靈敏度較高、線性關(guān)系較好，被廣泛應(yīng)用于食品檢測(cè)中，逐漸成為廣大分析者爭(zhēng)相關(guān)注的問(wèn)題。但是，以偏磷酸-醋酸溶液為提取液的維生素總量的熒光測(cè)定方法十分復(fù)雜，且提取液難以配制，存放時(shí)間較短，對(duì)分析速度和準(zhǔn)確度產(chǎn)生了不良影響。本文改進(jìn)和完善了傳統(tǒng)的熒光法測(cè)定，以草酸替代偏磷酸-醋酸溶液，并且將加醋酸鈉及硼酸-醋酸鈉的步驟加領(lǐng)苯二胺的步驟相結(jié)合，合并在一支試管內(nèi)進(jìn)行，在有效延長(zhǎng)了存放時(shí)間的同時(shí)，實(shí)現(xiàn)了分析速度的大大提升。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 儀器

該實(shí)驗(yàn)主要采用產(chǎn)自日本島津RF-5000熒光分光光度計(jì)，實(shí)驗(yàn)人員在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)做好相應(yīng)的準(zhǔn)備和調(diào)試工作。

1.2 試劑

（1）酸性活性炭，取100 g活性炭，以10%的HCL500 mL進(jìn)行加熱至沸騰約120s，再用水清洗3次，后置于120 ℃的高溫下進(jìn)行烘干，以供后期使用。（2）1%草酸水溶液。（3）醋酸鈉溶液，實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)稱取500 g醋酸鈉溶液，使其在水中充分溶解，然后定容至1000 mL。（4）硼酸-醋酸鈉溶液，稱取硼酸9 g，使其充分溶解與35mL的醋酸鈉溶液中，并定容至100 mL。在使用前，應(yīng)注意新鮮配置。（5）鄰苯二胺溶液，稱取鄰苯二胺溶液20 mg，并使其與100 mL水充分溶解，注意應(yīng)新鮮配置并避光保存。（6）Vc標(biāo)準(zhǔn)液，稱取Vc標(biāo)準(zhǔn)液25 mg，用1%的草酸定容至50 mL，使該溶液含有500Vc溶液。

1.3 操作步驟

（1）標(biāo)準(zhǔn)液；取50 mL的Vc標(biāo)準(zhǔn)液500至100 mL燒杯中，后加入活性炭2 g，并采用玻璃棒進(jìn)行攪拌約120-180 s，靜置一段時(shí)間后進(jìn)行過(guò)濾。濾后可選取1.5 mL濾液置于25 mL容量瓶中，加水定容至刻度，持續(xù)搖勻，該溶液應(yīng)含，作為標(biāo)準(zhǔn)工作液。

（2）樣品液；取25 mL具塞比色管①、②，分別在各具塞比色管中加入2.0 mL標(biāo)準(zhǔn)工作液，再加入2.0 mL硼酸-醋酸鈉溶液進(jìn)入①，搖勻后，放置約900 s；于②中加入2.0 mL醋酸鈉溶液，同樣搖勻后，向①、②加入10 mL鄰苯二胺溶液，將①、②放置于陰暗處約2400 s，后進(jìn)行熒光強(qiáng)度的測(cè)定。

（3）樣品分析實(shí)例；飲料類：將10 mL樣品放入50 mL容量瓶中，將10mL的1%草酸溶液加入其中，以水定容使其到達(dá)刻線。然后將定容液倒置100 mL的燒杯中，如果溶液中含有懸浮物或沉淀物，則需要通過(guò)濾紙將其過(guò)濾到燒杯中。定容液倒置燒杯后，加入活性炭2 g，再用玻璃棒攪拌，劇烈攪拌3 min左右，將其稍稍靜置，然后利用濾紙將其過(guò)濾。將過(guò)濾后的溶液取5 mL，放置25 mL容量瓶中，仍舊以水定容至刻線。將此樣品作為樣品工作液。取具塞比色管兩支，均25 mL。在①管中加入2 mL硼酸-醋酸鈉溶液，并將其作為樣品空白液，搖勻后靜置15 min；在②管中加入2 mL醋酸鈉溶液，將其作為樣品液，搖勻后立即在①管與②管中均加入10 mL鄰苯二胺溶液，將其放置暗處?kù)o置40 min，然后在、處采用1 cm比色皿對(duì)熒光強(qiáng)度進(jìn)行測(cè)定。

蔬菜果品類：選取某種蔬菜或干鮮果品50 g，將其均勻切碎作為樣品，然后加入50 g的1%的草酸溶液，放置搗碎機(jī)中搗碎，取出20 g勻漿，以水定容至刻度（50mL），并通過(guò)棉花將其過(guò)濾至燒杯（100mL）中，加入活性炭2 g，將其快速攪拌3 min左右，靜置一定時(shí)間，再通過(guò)濾紙將其進(jìn)行過(guò)濾。將過(guò)濾后溶液取10 mL，放置容量瓶（25mL）中，加水定容至刻度，并將其作為樣品工作液。其后步驟與飲料類樣品分析相同。測(cè)定結(jié)果如表1所示。

2 結(jié)果與討論

2.1 對(duì)熒光強(qiáng)度造成影響的因素

（1）醋酸鈉的影響；在該實(shí)驗(yàn)中，Vc加入量達(dá)60時(shí)，加入醋酸鈉溶液后，分別于不同時(shí)間加入鄰苯二胺溶液對(duì)熒光強(qiáng)度的影響是存在差異的。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，加入鄰苯二胺后，醋酸鈉在溶液中存在的時(shí)間越長(zhǎng)，熒光強(qiáng)度相對(duì)較低，使測(cè)定法靈敏度也相對(duì)降低。由此可知，當(dāng)“標(biāo)準(zhǔn)液”“樣品液”同樣加入醋酸鈉后，充分搖勻，應(yīng)即刻加入鄰苯二胺溶液，進(jìn)而提高靈敏度。（2）活性炭的影響；活性炭作為吸附劑，當(dāng)其用量過(guò)大時(shí)，對(duì)維生素C也會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的吸附作用，導(dǎo)致熒光強(qiáng)度降低，使測(cè)定結(jié)果低于實(shí)際值。該實(shí)驗(yàn)選取活性炭為2g。（3）硼酸-醋酸鈉的影響；根據(jù)實(shí)驗(yàn)可知，硼酸-醋酸鈉溶液作為掩蔽劑，當(dāng)其加入空白管后，需放置900 s，熒光強(qiáng)度才降至最低，反之，其空白值則會(huì)高于實(shí)際值。

2.2 工作曲線

實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)維生素C含量范圍在0-80/14mL之間時(shí)，線性關(guān)系良好，F(xiàn)=1.974+1.281為其工作曲線回歸方程，r=0.9991為相關(guān)系數(shù)。其中，F(xiàn)為相對(duì)熒光強(qiáng)度。因此，本文計(jì)算樣品維生素C總量的方法為直接定點(diǎn)比較法。Vc含量（mg/mL）=，其中，和分別為樣品液與樣品空白液的相對(duì)熒光強(qiáng)度，與分別為標(biāo)準(zhǔn)液與標(biāo)準(zhǔn)空白液的相對(duì)熒光強(qiáng)度，C為標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度（），K為樣品的稀釋倍數(shù)，為單位換算常數(shù)。

2.3 變異系數(shù)

變異系數(shù)V可表示樣品測(cè)量的重現(xiàn)性。筆者在研究中7次測(cè)定了刺梨原汁中的維生素C含量，并對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析（如表2所示），發(fā)現(xiàn)刺梨原汁的變異系數(shù)為0.51%，由此可見(jiàn)，本文的測(cè)定方法具有極高的精密度。

2.4 與經(jīng)典法相比較

本文用草酸作維生素C提取液（本法），將其與以偏磷酸-醋酸（經(jīng)典法）作維生素C提取液對(duì)同一種食品進(jìn)行測(cè)定，并將其結(jié)果進(jìn)行比較分析（如表3所示）。

由表3可見(jiàn)，采用本法對(duì)食品中維生素C的總量進(jìn)行測(cè)定，獲得結(jié)果精準(zhǔn)度較高，具有明顯優(yōu)勢(shì)。

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