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        黃蜀葵花總黃酮定量研究

        2015-05-30 12:56:07錢芳張芹
        關(guān)鍵詞:HPLC法

        錢芳 張芹

        【摘要】目的:用高效液相色譜法測定黃蜀葵花總黃酮中金絲桃苷的含量。方法:色譜柱:依利特-C-18-柱(250×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸溶液為流動相進(jìn)行梯度洗脫,流速:1.0ml/min,檢測波長:360nm,柱溫:30℃。結(jié)果:金絲桃苷在11.4059~364.99μg/ml范圍內(nèi)與峰面積的積分值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系(r=1.0000),平均加樣回收率97.14%,RSD1.86%(n=6)。結(jié)論:HPLC法簡便易行、結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性好,可用于測定黃蜀葵花總黃酮中金絲桃苷含量。

        【關(guān)鍵詞】黃蜀葵花總黃酮;HPLC法;金絲桃苷

        【中圖分類號】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A 【文章編號】1007-8517(2015)23-0014-02

        黃蜀葵花為錦葵科秋葵屬黃蜀葵(Abelmoschus manihot L·Medic)的干燥花。黃蜀葵花含豐富的黃酮類化合物,可用于治療缺血性心臟病和缺血性腦血管病。黃蜀葵花總黃酮對缺氧損傷、急性心肌缺血具保護(hù)作用,并對不完全缺血性腦損傷有一定的保護(hù)作用[1-4]。有研究表明,主要由金絲桃苷為主的黃酮醇苷及其苷元組成黃酮類成分[5]。文獻(xiàn)[6-8]報道的金絲桃苷的含量測定方法多為等度HPLC法,對于黃蜀葵花中金絲桃苷的有效分離檢測不易實(shí)現(xiàn)。本試驗將梯度HPLC法用于測定黃蜀葵花總黃酮中金絲桃苷的含量。

        1 儀器與試藥

        1.1 儀器 高效液相色譜儀:Agilent1100,G1322A脫氣機(jī),G1311A四元泵,G1316A柱溫箱,G1314A VWD檢測器,Agilent ChemStation,美國安捷倫公司;1/10萬電子分析天平:BP-211D型,德國Sartorius;超聲波清洗器:KQ-1000E,江蘇昆山超聲儀器公司;電熱鼓風(fēng)干燥箱:101-1A型,江蘇南通市滬通制藥機(jī)械設(shè)備公司;數(shù)顯型恒溫水浴鍋:HH-4,江蘇金壇榮華儀器公司。

        1.2 試藥 金絲桃苷對照品(批號111521-201205),中國藥品生物制品檢定所購買,含量測定用; 黃蜀葵花總黃酮(批號141009、141010、141011),本實(shí)驗室制備;液相色譜所用試劑:色譜純;水:超純水;其它試劑:分析純。

        2 方法與結(jié)果

        2.1 色譜條件 色譜柱:依利特C-18-柱(250×4.6mm,5μm);流動相:乙腈-0.1%磷酸溶液,進(jìn)行梯度洗脫:0~35min(16∶84),35~37min(30∶70), 37~53min(30∶70),53~55min(16∶84),55~60min(16∶84);檢測波長:360nm;柱溫:30℃;流速:1.0 ml/min;進(jìn)樣量10μl。

        2.2 溶液制備

        2.2.1 對照品溶液的制備 取金絲桃苷對照品,精密稱定,甲醇溶解制成1ml含729.98μg的溶液。

        2.2.2 供試品溶液的制備 精密稱取黃蜀葵花總黃酮100mg,置于25ml量瓶中,加入甲醇,超聲30min,放冷,再加甲醇至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。

        2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗 取供試品溶液、對照品溶液,進(jìn)樣10 μl,在上述液相色譜梯度洗脫條件下,液相色譜圖中,金絲桃苷達(dá)基線分離,理論板數(shù)按金絲桃苷計在10000以上,分離度大于2.0。(見圖1)

        2.4 線性關(guān)系考察 取上述對照品溶液,用甲醇分別稀釋至364.99、182.495、91.2475、45.6238、22.8119、11.4059μg/ml,在高效液相色譜儀中,注入不同濃度的對照品溶液10μl,測定。經(jīng)線性回歸,得金絲桃苷回歸方程y=21.93x+27.36,r=1.0000,金絲桃苷在11.4059~364.99μg/ml范圍內(nèi),同峰面積的積分值呈良好線性關(guān)系。

        2.5 精密度試驗 同一對照品溶液,精密吸取10μl后,注入液相色譜儀,重復(fù)測定6次,以峰面積計算,RSD為0.58%(n=6)。

        2.6 穩(wěn)定性試驗 同一供試品溶液,于0、2、4、6、8、12h進(jìn)樣,測定峰面積,RSD為0.84%(n=6),結(jié)果表明:供試品溶液12h內(nèi)穩(wěn)定。

        2.7 重復(fù)性試驗 取同一批號(141009)的黃蜀葵花總黃酮,約100mg,共6份,精密稱定,依法制備供試品溶液,測定,以金絲桃苷含量計算,RSD為1.21%(n=6)。結(jié)果表明,重復(fù)性較好。

        2.8 加樣回收率試驗 根據(jù)加樣回收率試驗的要求,取已知含量的黃蜀葵花總黃酮(141009)約50mg,共6份,精密稱定后,加入金絲桃苷對照品,依法制備供試品溶液,液相色譜儀中注入精密吸取的10μl,測定,計算,平均回收率為97.14%,RSD為1.86%。

        2.9 樣品含量測定 取3批黃蜀葵花總黃酮,每批2份,根據(jù)上述方法,制備供試品溶液,進(jìn)樣,測定,計算結(jié)果如下。見表2。

        3 討論

        試驗中曾參考藥典[9] :以乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85)為流動相,結(jié)果分離效果不好,又嘗試乙腈-0.1%磷酸溶液,不同比例等度洗脫系統(tǒng),金絲桃苷未能有效分離,且分析時間過長。通過反復(fù)試驗,最后以乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度洗脫:0~35min(16∶84),35~37min(30∶70), 37~53min-(30∶70)-,53~55min(16∶84),55~60min(16∶84),實(shí)現(xiàn)了較好的分離效果。

        HPLC法測定黃蜀葵花總黃酮中金絲桃苷含量簡便易行、結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好,可用于其質(zhì)量控制。

        參考文獻(xiàn)

        [1]李春梅,安雅婷,王濤,等.中藥黃蜀葵花化學(xué)成分的分離與鑒定(Ⅲ)[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報,2011,28(7):520-525.

        [2]范麗,郭巖,陳志武,等.黃蜀葵花總黃酮預(yù)處理對家兔心肌缺血再灌注損傷的影響[J].中國藥理學(xué)通報,2006,22(1):106-109.

        [3]李慶林,王成永,彭代銀,等.黃蜀葵花總黃酮對心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用研究[J].中國實(shí)驗方劑學(xué)雜志,2006,12(2):39-42.

        [4]劉爽,江蔚新,吳斌.黃蜀葵化學(xué)成分及藥理活性研究進(jìn)展[J].中國現(xiàn)代中藥,2010,12(8):5-9.

        [5]賴先銀,趙玉英,梁鴻.黃蜀葵花化學(xué)成分的研究[J]. 中國中藥雜志,2006,31(19):1597-1600.

        [6] 田元春,劉倩,韋水林,等. HPLC測定參杞強(qiáng)精膠囊中金絲桃苷含量[J]. 中國實(shí)驗方劑學(xué)雜志,2013,19(14): 149-151.

        [7] 韓霖,劉妍如,楊建云,等. 貫葉連翹提取物中金絲桃苷含量的RP-HPLC法測定[J]. 時珍國醫(yī)國藥,2012,23(10):2432-2434.

        [8] 楊海麗.HPLC法測定加味水陸丸中金絲桃苷的含量[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報, 2014,20(3):72-73.

        [9] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典一部[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:287.

        (收稿日期:2015.09.08)

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