王偉

摘要：目的：了解感染患者的口腔痰液標本原始涂片檢查方法及檢測結果的影響。方法：對30份痰液標本檢查結果與細菌培養(yǎng)鑒定進行分析研究。結果：口痰液標本30份以呈純培養(yǎng)或優(yōu)勢生長為陽性，涂片與培養(yǎng)結果符合率68.6%。結論：高質(zhì)量痰標本涂片染色或濕片直接鏡檢，可取得最早期快速的初步病原學診斷，對一些特殊病原體如抗酸桿菌、放線菌、奴卡菌，一些真菌以及伊氏肺袍子菌、寄生蟲等引起的感染，可做出較明確的初步診斷。

關鍵詞：痰標本涂片；痰液細菌培養(yǎng)

[中圖分類號]R441.5 [文獻標識碼]A [文章編號]1672-8602（2015）02-0461-01

引起呼吸系統(tǒng)感染的病原譜非常廣，包括細菌、真菌、病毒、支原體、衣原體、立克次體等微生物以及原蟲、吸蟲、絳蟲等寄生蟲。目前細菌和病毒仍是呼吸系統(tǒng)感染最常見的病原體。臨床常用的病原檢測方法包括痰涂片鏡檢、培養(yǎng)鑒定等。通過痰涂片、培養(yǎng)等檢查可明確呼吸道感染的病原體類型，通過病原體培養(yǎng)還可以進行藥物敏感試驗，指導臨床醫(yī)師合理用藥。30份痰液標本進行涂片檢查并培養(yǎng)結果進行分析，提高痰培養(yǎng)準備性。

1.材料與方法

1.1標本來源 2014年5月-6月收治的門診及住院患者痰液標本30份。

1.2采集 病人清晨起床后，用清水反復漱口后用力自氣管咳出第一口痰于滅菌容器內(nèi)，立即送檢驗。對于痰量少或無痰的病人，可采用3%～5%氯化鈉溶液5 mL霧化吸入約5 min進行導痰，使痰液易于排出。對咳痰量少的幼兒，可輕輕壓迫胸骨上部的氣管，使其咳嗽。采集后的痰，收集于滅菌容器中立即送檢，因為室溫下延擱2h會降低肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等苛養(yǎng)菌的分離率。

1.3方法

1.3.1不染色涂片法 痰標本直接涂片檢查病原體常用的有濕片法、懸滴法和毛細管法等，主要檢查病原體的動力和運動狀況。該法對檢查肺部寄生蟲感染具有獨特的診斷價值。該法的缺點是陽性率一般不高，需結合其他檢查方法以提高檢查的敏感性。

1.3.2染色涂片法 標本經(jīng)涂片、干燥、染色后再檢查對鑒別甚至診斷病原體有重要的意義?？赏ㄟ^痰直接涂片光鏡檢查判斷是否為感染性痰液或痰液標本受到口腔寄生菌的污染。若每低倍視野鱗狀上皮細胞<10個、白細胞>25個或鱗狀上皮細胞：白細胞<1：2.5，則表示痰液標本較好，受到的污染較輕；低倍鏡下若痰液標本每視野>25個鱗狀上皮細胞，則標本受污染的可能性大。涂片染色方法較多，革蘭染色可將細菌分為革蘭陽性和革蘭陰性兩大類；通過抗酸染色可以發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌；Gomori（GMS）六亞甲基四胺銀染色或亞甲胺藍染色（TBO）可顯示卡氏肺孢子蟲包囊等。經(jīng)過染色，可以觀察病原體形狀、大小、排列、染色特性以及有無莢膜、鞭毛、芽孢和異染顆粒等特殊結構，有利于病原體的診斷和鑒別。在細菌培養(yǎng)和藥敏試驗尚未獲得結果的情況下，通過染色法檢查細菌有助于臨床醫(yī)生初步選用抗生素。

1.3.3細菌培養(yǎng)鑒定

1.3.3.1需氧培養(yǎng)法 將細菌接種于培養(yǎng)基，在大氣條件下，培養(yǎng)18～24小時。該方法需氧菌和兼性厭氧菌均可在培養(yǎng)基上生長。但一些生長緩慢的細菌如結核桿菌需培養(yǎng)3～7天甚至1個月才能生長。需要培養(yǎng)較長時間的細菌，接種后應將試管塞好用石蠟凡士林封固，以防培養(yǎng)基干燥。

1.3.3.2二氧化碳培養(yǎng)法 將細菌接種于培養(yǎng)基上，再置于二氧化碳環(huán)境中培養(yǎng)的方法。如布氏桿菌需要在一定的二氧化碳環(huán)境中才能生長。

1.3.3.3厭氧菌培養(yǎng)法 將細菌接種于培養(yǎng)基上，再置于無氧環(huán)境中進行培養(yǎng)的方法：厭氧菌培養(yǎng)的標本采集和送檢必須嚴格，一般來說，經(jīng)口腔咳出的痰液對厭氧菌培養(yǎng)無送檢價值。采集支氣管分泌物做厭氧菌培養(yǎng)，可通過以下方式：①經(jīng)環(huán)甲膜穿刺。②經(jīng)皮肺穿刺。③經(jīng)PBAL方式：標本采集后應立即送檢并及時處理。厭氧菌首先經(jīng)過初代培養(yǎng)，然后進行次代培養(yǎng)。其初步鑒定常常根據(jù)細菌形態(tài)、革蘭染色特性、菌落性狀、吲哚和接觸酶反應等特征進行判定，而最后確診需要對培養(yǎng)細菌進行生化特性及終末產(chǎn)物等多項檢查。

2.結果

待細菌培養(yǎng)長出后，根據(jù)菌落計數(shù)和痰液標本的稀釋倍數(shù)，計算出每毫升痰液所含細菌濃度，通常以每毫升菌落形成的單位（CFU/mLl來表示，然后確定是否為致病菌及細菌的種類?？谔狄簶吮?0份以呈純培養(yǎng)或優(yōu)勢生長為陽性，涂片與培養(yǎng)結果符合率68.6%。

3.討論

涂片光鏡檢查操作簡便，通過痰標本涂片檢查可取得最早期的初步病原學診斷，對有些病原體如抗酸桿菌、放線菌、奴卡菌、真菌咖念珠菌、隱球菌、曲菌和毛霉菌1以及卡氏肺孢子蟲、寄生蟲等引起的感染做出較明確的診斷。細菌培養(yǎng)包括需氧菌培養(yǎng)、厭氧菌培養(yǎng)、結核菌培養(yǎng)以及真菌培養(yǎng)等。不同細菌培養(yǎng)條件各異，因此應選擇相應的培養(yǎng)基、接種方法和培養(yǎng)方法。

痰標本的消化與洗滌由于上呼吸道有正常菌群定植，因此在做痰培養(yǎng)前，標本接種前的預處理尤為重要，基本要求應該首先對痰標本進行洗滌（痰標本先加人10～20 mL無菌生理鹽水中洗滌3次），然后用乙酰半胱氨酸等蛋白水解酶等消化液進行消化，將均質(zhì)化后的標本離心3 000 r/min離心10min，棄去上清液取沉淀物接種培養(yǎng)基。痰液消化過程有助于痰核內(nèi)部細菌的暴露，提高痰標本培養(yǎng)的陽性檢出率，尤其是能顯著提高流感嗜血桿菌檢出率。微生物實驗室收到標本后應立即處理、接種。所用的培養(yǎng)基包括分離和鑒別革蘭陽性菌的血平板、革蘭陰性菌鑒別的平板如麥康凱平板，以及接種富含營養(yǎng)的巧克力平板以提高分離流感嗜血桿菌、卡他莫拉菌和腦膜炎奈瑟菌的陽性率并將其置于5%-10%的CO2、35-37℃的環(huán)境中孵育。

痰液化后進行系列稀釋，分別接種于培養(yǎng)皿。根據(jù)菌落計數(shù)和痰標本稀釋倍數(shù)，計算出每毫升痰中各種細菌的含菌量。也可采用0.001 mL標準環(huán)接種液化處理的痰標本。痰定量培養(yǎng)分離的致病菌或條件致病菌濃度≥107CFU/mL，可認為是肺部感染的病原體；～

標準定量培養(yǎng)方法操作煩瑣，臨床實驗室推廣困難。為此，建議采用痰半定量方法，即用接種環(huán)將痰液在血平板、巧克力平板上按規(guī)定劃線要求做四區(qū)劃線接種標本進行培養(yǎng)，每劃一區(qū)后均須加熱接種環(huán)，使細菌在平板上生長數(shù)逐級下降。目前，國際上較為認同的半定量判斷標準。優(yōu)勢菌可定義為生長菌落為（+++），或（+++）以上。高質(zhì)量的標本可以只鑒定和報告優(yōu)勢生長的需氧菌和兼性厭氧菌。只在原始區(qū)生長的少數(shù)菌不必做常規(guī)鑒定，除非臨床或直接革蘭染色提示可能為感染的病原菌。臨床醫(yī)生應根據(jù)病人情況判斷各種細菌的臨床意義。