張佳琪等

摘要：目的 觀察運(yùn)脾、升清、補(bǔ)脾中藥對(duì)飲食誘導(dǎo)肥胖（DIO）大鼠肥胖程度及脂肪激素、胰島素抵抗（IR）的影響，從不同健脾中藥中進(jìn)一步篩選抗肥胖藥物。方法 Wistar大鼠130只，10只作為空白組，給予基礎(chǔ)飼料，其余120只給予高脂飼料13周喂飼，按體質(zhì)量得到DIO大鼠50只和飲食誘導(dǎo)肥胖抵抗（DIO-R）大鼠10只，DIO大鼠分為模型組、西布曲明組、運(yùn)脾組、升清組、黃芪組，每日分別給予生理鹽水、西布曲明、運(yùn)脾藥（蒼術(shù)和厚樸）、升清藥（柴胡和枳實(shí)）、補(bǔ)氣健脾藥（黃芪）灌胃，空白組與DIO-R組予生理鹽水灌胃。灌胃期間空白組予基礎(chǔ)飼料，余6組繼續(xù)予高脂飼料喂飼。取血測(cè)定胰島素抵抗指數(shù)（IRI）、血糖、三酰甘油、膽固醇、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、脂聯(lián)素，取脂肪勻漿測(cè)定TNF-α、脂聯(lián)素。結(jié)果 模型組體質(zhì)量、IRI、膽固醇升高（P<0.01），脂肪勻漿中脂聯(lián)素降低（P<0.01），血清和脂肪勻漿TNF-α升高（P<0.01）；與模型組比較，DIO-R組治療前后體質(zhì)量、IRI、膽固醇均明顯降低（P<0.01），脂肪勻漿脂聯(lián)素升高（P<0.01）；西布曲明組治療后體質(zhì)量、膽固醇均明顯降低（P<0.01），血清和脂肪中TNF-α減低（P<0.05）；升清組治療后體質(zhì)量、IRI、膽固醇降低（P<0.05，P<0.01），血清和脂肪勻漿中TNF-α均減低（P<0.05，P<0.01），脂肪勻漿中脂聯(lián)素升高（P<0.05）；運(yùn)脾組IRI、膽固醇和血清中TNF-α降低（P<0.05，P<0.01），血清和脂肪中脂聯(lián)素升高（P<0.05）；黃芪組體質(zhì)指數(shù)、血糖、IRI、膽固醇降低（P<0.05，P<0.01），血清和脂肪中TNF-α降低、脂聯(lián)素升高（P<0.05，P<0.01）。結(jié)論 黃芪可以抑制高脂飼料誘導(dǎo)的肥胖，改善糖脂代謝紊亂和IR優(yōu)于運(yùn)脾、升清中藥，其機(jī)制與降低TNF-α和升高脂聯(lián)素水平相關(guān)。

關(guān)鍵詞：健脾中藥；飲食誘導(dǎo)肥胖；飲食誘導(dǎo)肥胖抵抗；胰島素抵抗；脂聯(lián)素；腫瘤壞死因子-α；大鼠

中圖分類號(hào)：R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1005-5304（2015）06-0064-05

肥胖患者常有不同程度的胰島素抵抗（insulin resistance，IR）。IR促使糖耐量正常人群糖耐量惡化，促進(jìn)肥胖機(jī)體進(jìn)一步增重，同時(shí)也在高血壓、高血脂、動(dòng)脈粥樣硬化等發(fā)病中起著重要作用[1-2]。我們前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，運(yùn)脾、升清、補(bǔ)脾藥物可抑制飲食誘導(dǎo)肥胖（DIO）大鼠的肥胖和IR，其機(jī)制可能與降低脂肪腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和升高脂聯(lián)素有關(guān)[3-5]?！侗静菝审堋费裕海S芪）入足太陰經(jīng)……中補(bǔ)脾胃；柴胡透達(dá)少陽(yáng)之邪以升清，枳實(shí)攻破陽(yáng)明之邪以降濁，兩藥配用可升清降濁；蒼術(shù)苦溫主升，厚樸苦溫主降，二者配伍可恢復(fù)脾運(yùn)。因此，本研究對(duì)黃芪、柴胡與枳實(shí)、蒼術(shù)與厚樸進(jìn)行比較，進(jìn)一步探索不同健脾中藥對(duì)DIO大鼠肥胖和IR的影響。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物及飼料

普通級(jí)Wistar大鼠130只，雄性，4周齡，體質(zhì)量150～195 g，山東中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK（魯）2008-0002?；A(chǔ)飼料由山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；高脂飼料：自購(gòu)原料，采用本實(shí)驗(yàn)室飼料制作方法[5]，山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心加工。配方為基礎(chǔ)飼料82%加豬油8%、豆粉2%、蔗糖8%。

1.2 主要試劑與儀器

胰島素、TNF-α放免試劑盒及脂聯(lián)素酶免試劑盒，美國(guó)abcam，批號(hào)GR70529-3；ELX808酶標(biāo)儀、ELX50型洗板機(jī)，美國(guó)BIO-TEK INSTRUMENTS，INC；DDL-5冷凍離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；SN-695型智能放免γ測(cè)量?jī)x，上海核所日環(huán)光電食品有限公司；OLYMPUS AU2700全自動(dòng)生化分析儀，日本OLYMPUS有限公司；ME235P電子分析天平，德國(guó)賽多利斯。

1.3 藥物

本實(shí)驗(yàn)所用藥材，經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)天然藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室李峰教授鑒定，蒼術(shù)為茅蒼術(shù)或北蒼術(shù)的干燥根莖，厚樸為木蘭科植物厚樸或凹葉厚樸的干燥干皮、根皮及枝皮，柴胡為傘形科植物柴胡或狹葉柴胡的干燥根或全草，枳實(shí)為蕓香科植物酸橙及其栽培變種或甜橙的干燥幼果，黃芪為豆科植物黃芪或內(nèi)蒙黃芪的干燥根。對(duì)蒼術(shù)和厚樸（各15 g）、柴胡和枳實(shí)（各15 g）、黃芪（30 g）3組藥物進(jìn)行粉粹，10倍量水煎2次，2次藥液混合，低溫濃縮至濃度為1 g原藥材/mL （山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院制劑室提供）。鹽酸西布曲明膠囊（太極集團(tuán)涪陵制藥廠，批號(hào)0309002）。

1.4 造模、分組與給藥

130只實(shí)驗(yàn)大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)選擇10只為空白組，給予基礎(chǔ)飼料，其余120只給予高脂飼料。造模期間，每周測(cè)體質(zhì)量（精確到0.1 g），觀察大鼠造模情況。13周后，根據(jù)文獻(xiàn)[6]，造模組大鼠體質(zhì)量≥基礎(chǔ)組體質(zhì)量均值加1.4倍標(biāo)準(zhǔn)差者為DIO大鼠，體質(zhì)量<基礎(chǔ)組體質(zhì)量均值加1倍標(biāo)準(zhǔn)差者為DIO-R大鼠。對(duì)DIO大鼠按照體質(zhì)量從高到低取50只，隨機(jī)分為5組，即模型組、西布曲明組、運(yùn)脾組、升清組、黃芪組，每組10只。對(duì)DIO-R大鼠，取狀態(tài)良好、體質(zhì)量較小者10只。各中藥組以30 g作為成人（60 kg體質(zhì)量）使用劑量，西布曲明15 mg/d作為成人使用劑量，根據(jù)“常用動(dòng)物與人體表面積比值”計(jì)算大鼠灌胃藥量。空白組、DIO-R組和模型組予生理鹽水2 mL/d，西布曲明組予西布曲明8 mg/（kg·d），運(yùn)脾組、升清組、黃芪組各組分別給予蒼術(shù)和厚樸3.2 g原藥材/（kg·d）、柴胡和枳實(shí)3.2 g原藥材/（kg·d）、黃芪3.2 g原藥材/（kg·d），共12周。

1.5 動(dòng)物處理

實(shí)驗(yàn)期間，每日觀察大鼠生長(zhǎng)情況、飲食、糞便，每周記錄給食量、體質(zhì)量（精確到0.1 g）。12周后，去除動(dòng)物撕咬、灌胃等原因死亡后，存留動(dòng)物數(shù)見(jiàn)表1。禁食12 h后，麻醉測(cè)量各組大鼠體質(zhì)量，體長(zhǎng)（從鼻尖到肛門的長(zhǎng)度）。常規(guī)解剖，腹主動(dòng)脈取血，測(cè)空腹血糖，低溫離心，分離血清待測(cè)。動(dòng)物處死后，剝離腹腔內(nèi)（腹后、大網(wǎng)膜、睪丸）全部脂肪，同一部位取脂肪組織，每克脂肪組織加5 mL生理鹽水，10 000 r/min離心10 s×3次，制備20%脂肪組織勻漿，4000 r/min離心10 min，取上清液，-20 ℃保存待測(cè)。

1.6 觀察指標(biāo)

1.6.1 肥胖程度 參考文獻(xiàn)[7]方法計(jì)算體質(zhì)量指數(shù)（Lee's指數(shù)）。

1.6.2 血脂、血糖和胰島素抵抗指數(shù)檢測(cè) 取待測(cè)血清，用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定膽固醇、三酰甘油、血糖，采用放射免疫競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定血清胰島素含量，并計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)（IRI）=空腹血糖×空腹血胰島素÷22.5。

1.6.3 血清和脂肪勻漿中脂聯(lián)素、腫瘤壞死因子-α檢測(cè) 放射免疫法測(cè)定血清和脂肪勻漿中TNF-α，酶聯(lián)免疫法測(cè)定血清和脂肪勻漿中脂聯(lián)素，嚴(yán)格按照試劑盒操作方法進(jìn)行。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料以—x±s表示，多組比較用方差分析，組間比較采用SNK檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同健脾中藥對(duì)大鼠肥胖程度的影響

高脂飲食造模后，DIO各組體質(zhì)量明顯升高（P<0.01）。與空白組比較，模型組治療前后體質(zhì)量均升高（P<0.05，P<0.01）；與DIO-R組比較，DIO組造模后、治療后體質(zhì)量均升高（P<0.05，P<0.01）。藥物干預(yù)后，西布曲明組治療后體質(zhì)量明顯減低（P<0.01）；升清組治療后體質(zhì)量降低（P<0.05）；黃芪組治療后體質(zhì)量、Lee's指數(shù)均降低（P<0.05）。西布曲明干預(yù)后體質(zhì)量減輕效果比升清、運(yùn)脾和黃芪組明顯（P<0.05，P<0.01），但黃芪在降低Lee's指數(shù)方面優(yōu)于其他3組（P<0.05，P<0.01）。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2 不同健脾中藥對(duì)大鼠胰島素抵抗指數(shù)及血糖、血脂的影響

模型組IRI、膽固醇明顯高于空白組與DIO-R組（P<0.01）。藥物干預(yù)后，4組膽固醇明顯低于DIO組（P<0.01）；升清組、運(yùn)脾組和黃芪組IRI明顯低于DIO組（P<0.01）；黃芪組降低血糖效果優(yōu)于DIO組（P<0.05）。各給藥組間比較發(fā)現(xiàn)，升清組、運(yùn)脾組和黃芪組IRI低于西布曲明組（P<0.01）；黃芪降低膽固醇方面優(yōu)于西布曲明組（P<0.05）。與升清組比較，黃芪組IRI、膽固醇明顯降低（P<0.05，P<0.01）；與運(yùn)脾組比較，黃芪組血糖明顯降低（P<0.05）。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.3 不同健脾中藥對(duì)大鼠血清及脂肪腫瘤壞死因子-α、脂聯(lián)素含量的影響

模型組血清和脂肪TNF-α高于空白組（P<0.01），脂聯(lián)素降低于空白組（P<0.05）；與模型組比較， DIO-R組脂肪中脂聯(lián)素升高（P<0.05）。藥物干預(yù)后，與模型組比較，西布曲明組血清和脂肪TNF-α降低（P<0.05，P<0.01）；升清組血清和脂肪TNF-α降低（P<0.05，P<0.01），脂肪脂聯(lián)素升高（P<0.05）；運(yùn)脾組血清TNF-α降低（P<0.05），血清和脂肪脂聯(lián)素降低（P<0.05）；黃芪組血清和脂肪TNF-α降低、脂聯(lián)素升高（P<0.05，P<0.01）；與西布曲明組比較，升清組血清和脂肪TNF-α降低（P<0.05，P<0.01），脂肪脂聯(lián)素升高（P<0.05）；運(yùn)脾組血清和脂肪脂聯(lián)素升高（P<0.05）；黃芪組血清和脂肪TNF-α降低、脂聯(lián)素升高（P<0.05，P<0.01）；與升清組比較，黃芪組脂肪TNF-α降低、血清脂聯(lián)素升高（P<0.05，P<0.01）。見(jiàn)表3。

3 討論

IR被認(rèn)為是肥胖、糖尿病、高血壓及動(dòng)脈粥樣硬化等多種疾病的病理生理基礎(chǔ)，是中心性肥胖和代謝紊亂性疾病的共同病理機(jī)制[8-9]。目前普遍認(rèn)為，IR對(duì)代謝紊亂性疾病的預(yù)測(cè)和診治更具有指導(dǎo)意義。長(zhǎng)期高脂飲食是誘導(dǎo)IR的重要原因，本實(shí)驗(yàn)采用DIO大鼠模型，能夠較好地模擬肥胖患者IR的發(fā)病過(guò)程。

肥胖患者高水平的TNF-α在IR的形成中起著重要作用，其機(jī)制與TNF-α減少胰島素受體底物IRS的酪氨酸磷酸化，降低胰島素敏感性；抑制葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-4的表達(dá)，進(jìn)而抑制胰島素刺激的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)，削弱葡萄糖的攝取和利用；促進(jìn)脂肪分解，致游離脂肪酸增高等有關(guān)。脂聯(lián)素是一種胰島素增敏劑，它可以抑制糖異生酶，減少肝糖原輸出[10]；還可以通過(guò)磷酸化激活骨骼肌和肝臟的腺苷酸活化蛋白激酶，使過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體-γ作用增加，從而刺激糖利用和脂肪酸氧化來(lái)增加胰島素敏感性。在胰島素抵抗相關(guān)疾病，如2型糖尿病、肥胖和脂代謝紊亂中，血漿脂聯(lián)素水平均明顯下降[11-12]。本實(shí)驗(yàn)中，模型大鼠膽固醇、TNF-α均明顯升高，脂聯(lián)素水平降低，血糖和三酰甘油有升高趨勢(shì)，這與IRI升高相一致，表明高脂飲食可影響TNF-α和脂聯(lián)素的合成與分泌，導(dǎo)致IR、糖脂代謝紊亂。

脂肪激素異常，導(dǎo)致IR，從而導(dǎo)致脂肪蓄積，這種代謝紊亂與傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)的脂膏沉積不能被機(jī)體所用的“脾失健運(yùn)、脾不升清”有非常大的相關(guān)性。脾胃為后天之本，主運(yùn)化，主升清，脾氣健運(yùn)，才能將化生的氣、血、津液，輸布到全身臟腑組織，中醫(yī)學(xué)早在金元時(shí)期即認(rèn)識(shí)到肥胖和脾虛的關(guān)系，如《脾胃論·脾胃盛衰論》言：“脾胃俱旺，則能食而肥。脾胃俱虛……或少食而肥，雖肥而四肢不舉。”因此，治脾是治療肥胖的根本大法，我們欲從運(yùn)脾、升清和補(bǔ)氣健脾方面探討中藥對(duì)肥胖及IR的影響作用?！捌⒔〔辉谘a(bǔ)貴在運(yùn)”，《本草崇原》明確指出“凡欲運(yùn)脾，則用蒼術(shù)”，并認(rèn)為厚樸可“運(yùn)土而助脾”，所以本實(shí)驗(yàn)選擇蒼術(shù)、厚樸作為運(yùn)脾藥。《本草綱目》有：“升麻，柴胡，引生發(fā)之氣上行……柴胡引少陽(yáng)清氣上行”，柴胡配枳實(shí)作為升清組是取其升清降濁之效。黃芪味甘，性微溫，入脾肺經(jīng)，《本草新編》言“黃芪乃補(bǔ)氣之圣藥”，《神農(nóng)本草經(jīng)百種錄》有“黃芪，甘淡而溫，得土之正味、正性，故其功專補(bǔ)脾胃”，可見(jiàn)黃芪有補(bǔ)氣健脾、恢復(fù)脾運(yùn)的功效，更好地輸布水谷精微，使蓄積的膏脂重新被機(jī)體利用，此外《藥性賦》謂其“味甘……升也，陽(yáng)也……”，黃芪亦可升清氣，故用黃芪單獨(dú)成組，用以補(bǔ)氣健脾，升舉清氣，從整體調(diào)整肥胖患者的形盛而氣不足的病理狀態(tài)，探索其在治療肥胖及對(duì)胰島素抵抗的影響。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與模型組比較，西布曲明、升清藥物、運(yùn)脾藥物和黃芪均能抑制體質(zhì)量和膽固醇增加，且黃芪在降低Lee's指數(shù)方面優(yōu)于其他藥物。前期實(shí)驗(yàn)和本實(shí)驗(yàn)均顯示，運(yùn)脾、升清藥物可以改善胰島素的敏感性，抑制IR的發(fā)生，且其機(jī)制與降低TNF-α、升高脂聯(lián)素水平相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，升清藥物抑制IR主要是降低了TNF-α水平，運(yùn)脾藥物抑制IR主要是升高脂聯(lián)素水平，而黃芪對(duì)降低TNF-α和升高脂聯(lián)素均有影響。

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（收稿日期：2014-10-28）

（修回日期：2014-11-10；編輯：華強(qiáng)）