龐衛(wèi)花，劉永濤，徐 娜，李金巍，楊敬芳

(河北北方學(xué)院附屬第二醫(yī)院1.檢驗科;2.信息科;3.婦科，河北張家口，075100)

ABO血型鑒定是指ABH血型抗原的檢測。一般情況下，ABO血型一致的人才可進(jìn)行輸血，特別是大量輸血時，應(yīng)采用同一血型的血液。輸血時若血型不合，會造成輸入的紅細(xì)胞(RBC)發(fā)生凝集，引起血管阻塞及血管內(nèi)大量溶血。多數(shù)與輸血有關(guān)死亡患者的死因與輸入ABO不相容的血液有直接或者間接關(guān)系，其中1/3由ABO血型鑒定有誤所致。因此，血型檢測與輸血反應(yīng)密切相關(guān)，在輸血前必須進(jìn)行血型鑒定。ABO血型正反定型相符是其鑒定關(guān)鍵所在，必須查明引起正反定型不相符的原因，以獲得ABO血型的準(zhǔn)確定型［1－2］。

微柱凝膠法作為一種新式血型血清學(xué)技術(shù)，在常規(guī)血型鑒定方面具有反應(yīng)結(jié)果可靠且易于標(biāo)準(zhǔn)化、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，已被西方國家廣泛用于常規(guī)紅細(xì)胞血型血清學(xué)的檢測。因其抗原抗體量恒定，且操作標(biāo)準(zhǔn)化，故對ABO亞型、弱抗原的反應(yīng)強(qiáng)度高于傳統(tǒng)試管法，目前國內(nèi)已逐步應(yīng)用于臨床［3－4］。本研究采用微柱凝膠法對ABO血型正反定型不符標(biāo)本進(jìn)行篩選、鑒別和定型，有效解決了ABO血型正反定型不符的問題，為臨床ABO血型定型的準(zhǔn)確性提供了科學(xué)依據(jù)，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年4月—2013年4月河北北方學(xué)院附屬第二醫(yī)院送檢血樣及獻(xiàn)血員標(biāo)本3 000例，其中白血病325例，多發(fā)性骨髓瘤91例，骨髓纖維化24例，貧血288例，腸癌164例，消化道出血270例，外科手術(shù)269例，以及其他相關(guān)疾病者。滿足ABO血型正反定型不符100例，其中男80例，女20例;年齡5～85歲。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑及儀器:ABO、RhD血型定型試劑卡(長春博訊生物技術(shù)有限公司);免疫微柱離心機(jī)、臺式低速離心機(jī)及免疫微柱孵育器。

1.2.2 鑒定方法:ABO正反定型、微柱凝膠卡氏法、吸收放散試驗、試管法、唾液中血型物質(zhì)測定、配血試驗、抗體鑒定等均嚴(yán)格按照說明書操作進(jìn)行。

篩選:采用ABO、RhD血型定型試劑卡將全體血樣標(biāo)本進(jìn)行ABO血型正反定型，篩選出正反定型不符的標(biāo)本，繼續(xù)進(jìn)一步檢測。鑒別:對初次出現(xiàn)正反定型不符的標(biāo)本重新采集，采用試管法檢測紅細(xì)胞與抗－A1及抗－AB的凝集強(qiáng)度，重復(fù)試驗進(jìn)行核實，包括核查標(biāo)本標(biāo)簽、申請單及標(biāo)本質(zhì)量，離心機(jī)的轉(zhuǎn)速、離心力及離心時間等相關(guān)設(shè)置，試劑有無漏加或加錯等，以排除人為因素及技術(shù)失誤。對重新采集的血樣，留取唾液進(jìn)行血型物質(zhì)鑒定，唾液血型物質(zhì)檢測及紅細(xì)胞H物質(zhì)活性檢測，以重新制備紅細(xì)胞懸液。定型:采用微柱凝膠法對ABO血型正反定型。根據(jù)血型血清學(xué)技術(shù)，對上述確定抗原改變引起正反定型不符標(biāo)本正確定型。對血清反應(yīng)出現(xiàn)的問題，可分為正定型與反定型不符。正定型不符，即紅細(xì)胞與抗－A或抗－B出現(xiàn)額外反應(yīng)和反應(yīng)減弱以及無反應(yīng)和混合凝集;反定型不符包括與A1、或B細(xì)胞出現(xiàn)額外反應(yīng)以及反應(yīng)減弱、無反應(yīng)等。根據(jù)初步分類結(jié)果并結(jié)合臨床資料進(jìn)行試驗，將其中正定型(抗－A和/或抗－B)呈陰性及混合凝集的紅細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行吸收放散試驗，以確定受檢標(biāo)本A、B抗原，并結(jié)合正定結(jié)果來明確抗原改變引起的正反定型不符。

1.3 鑒定標(biāo)準(zhǔn)

一系列鑒定檢測均參照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》和《臨床輸血診療技術(shù)》要求進(jìn)行［5－6］。

2 結(jié)果

2.1 鑒定結(jié)果

100例ABO血型正反定型不符標(biāo)本中，28例為操作不規(guī)范等人為因素所致，通過重新測試后ABO血型正反定型相符。余72例經(jīng)進(jìn)一步復(fù)習(xí)臨床資料及分類試驗驗證，明確為ABO血型正反定型不符由疾病因素及亞型因素所致。

2.2 典型病例

2.2.1 疾病因素導(dǎo)致假凝集而引起正反定型不符:男，51歲。因嚴(yán)重貧血而入院，血紅蛋白48 g/L，急需輸血。試管法血型鑒定:正定型A型，反定型出現(xiàn)了額外反應(yīng)，即A、B細(xì)胞出現(xiàn)了串錢狀凝集。查閱臨床資料發(fā)現(xiàn)，患者患有多發(fā)性骨髓瘤，無輸血史，弱凝集通過加入0.9%氯化鈉溶液稀釋后散開，明確正反定型不符是由疾病導(dǎo)致的假凝集，其血型應(yīng)為A型。見表1。

2.2.2 ABO亞型因素引起正反定型不符:男，23歲。因貧血而入院，血紅蛋白48 g/L。試管法血型鑒定:正定型為AB型，反定型出現(xiàn)抗－A。查閱臨床資料發(fā)現(xiàn)，患者無輸血史?？贵w篩查試驗顯示陰性，紅細(xì)胞與抗－A1反應(yīng)陰性，血清與A2細(xì)胞無凝集，但與A1細(xì)胞有凝集(2+)，并經(jīng)吸收放散試驗，鑒定患者為A2B亞型。見表1。

表1 ABO正反定型不符典型病例血型特點(diǎn)

3 討論

血型鑒定必須有規(guī)范的標(biāo)準(zhǔn)流程，若發(fā)現(xiàn)正反定型不符標(biāo)本，應(yīng)先查明原因，排除人為因素，并結(jié)合相關(guān)臨床資料，行進(jìn)一步血型鑒定試驗，以確保檢測的準(zhǔn)確性［7－9］。微柱凝膠法對ABO血型正反定型不符標(biāo)本的篩選、鑒別和定型，具有處理能力強(qiáng)、速度較快、人為誤差較小等優(yōu)點(diǎn)，不僅可提高血型鑒定的自動化程度，還可減少因人工操作引起的誤差。

微柱凝膠法對血型正反定型不符標(biāo)本的鑒定需要進(jìn)行重復(fù)測試，且對相關(guān)標(biāo)本與試劑進(jìn)行核查。本研究通過重復(fù)檢測發(fā)現(xiàn)，100例ABO血型正反定型不符標(biāo)本中有28例為操作不規(guī)范等人為因素所致，提示實驗過程中規(guī)范化操作很重要。依據(jù)血清反應(yīng)特點(diǎn)，將標(biāo)本分為正、反定型不符2種，分析影響因素，并對非人為因素導(dǎo)致的正反定型不符進(jìn)行有效處理［10－12］。本研究對余72例ABO血型正反不符標(biāo)本進(jìn)行重新鑒定，明確為ABO血型正反定型不符由疾病因素及亞型因素所致。對疾病因素所致者，通過查閱臨床資料，并按照微柱凝膠法進(jìn)行規(guī)范化操作，鑒定患者血型為A型?？梢?，因疾病因素導(dǎo)致正反定型不符患者，通過查閱臨床資料，并按照微柱凝膠法進(jìn)行規(guī)范化操作，有利于患者血型的鑒定;對ABO亞型因素所致者，針對具體因素進(jìn)行微柱凝膠法鑒定，患者血型為A2B型，進(jìn)一步提示在查明原因的前提下，采用微柱凝膠法對ABO血型正反定型不符標(biāo)本進(jìn)行鑒定，效果理想。檢測過程中，采取正反定型原則可確保鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性。同時，實施二次檢測的模式可避免標(biāo)本在采集過程中發(fā)生錯誤。

［1］張德梅，蘭炯采.重視輸血前試驗的研究減少輸血的安全隱患［J］.中國輸血雜志，2010，23(9):659.

［2］李萌，馮麗，王曉衛(wèi)，等.新生兒血型抗體產(chǎn)生情況分析及微柱凝膠法與鹽水試管法的結(jié)合應(yīng)用［J］.南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2012，32(8):1174.

［3］徐新蓉，龔國富.微柱凝膠法檢測ABO血型正反定型不符的原因分析與處理［J］.檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2012，9(2):2012，9(2):226.

［4］葉巧國，張衛(wèi)良，盧德權(quán)，等.微柱凝膠卡式法在臨床輸血中的應(yīng)用價值分析［J］.實驗與檢驗醫(yī)學(xué)，2014，32(1):54.

［5］嚴(yán)京梅，葉東，朱培元，等.災(zāi)難情況下血液應(yīng)急保障的探討［J］.臨床誤診誤治，2010，23(2):182.

［6］屈林，李景和，劉鳳霞.ABO血型抗原減弱所致疑難血型的原因分析及鑒定方法［J］.中國輸血雜志，2010，23(9):706.

［7］蘭炯采，陳靜嫻，馬紅麗，等.推薦ABO疑難血型三步分析法［J］.中國輸血雜志，2010，23(3):165.

［8］馬紅麗，楊波.ABO疑難血型3步分析法實踐應(yīng)用［J］.臨床血液學(xué)雜志，2011，24(2):75.

［9］秦建江，杜平，何智.Rh血型免疫性抗體致溶血性輸血反應(yīng)的探討［J］.新疆醫(yī)學(xué)，2012，42(7):63.

［10］藍(lán)欲曉.罕見Rh、Kidd血型系統(tǒng)復(fù)合抗體引起速發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)的調(diào)查研究［J］.現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2009，24(3):128.

［11］何子毅，劉赴平，劉景春，等.ZZAP和CDP放散DAT陽性紅細(xì)胞的效果評價［J］.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2009，30(21):2370.

［12］沈健，陳秉宇.嬰幼兒ABO血型IgM抗體分析［J］.臨床血液學(xué)雜志，2010，23(1):65.