路 麗，關(guān)琴笑，趙 路，容悅瑩，梁生旺，王淑美

(廣東藥學(xué)院 中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006)

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桂枝茯苓復(fù)方中桂枝揮發(fā)油提取及其包合工藝研究

路 麗，關(guān)琴笑，趙 路，容悅瑩，梁生旺，王淑美*

(廣東藥學(xué)院 中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006)

目的：優(yōu)選桂枝茯苓復(fù)方中揮發(fā)油提取及其β-環(huán)糊精包合的最佳工藝。方法：采用正交試驗(yàn)法，以揮發(fā)油提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，加水量、浸泡時(shí)間、蒸餾時(shí)間為考察因素篩選桂枝茯苓復(fù)方中揮發(fā)油最佳提取工藝；以揮發(fā)油包合率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，揮發(fā)油與β-環(huán)糊精的投料比、包合溫度、包合時(shí)間為考察因素優(yōu)選其β-環(huán)糊精最佳包合工藝。結(jié)果：桂枝茯苓復(fù)方中揮發(fā)油最佳提取工藝為取藥材適量，加8倍量水，浸泡4h，蒸餾提取5h；其最佳包合工藝為：揮發(fā)油與β-環(huán)糊精的投料比為1∶6(mL∶g)，包合溫度為70℃，攪拌包合2h。結(jié)論：該實(shí)驗(yàn)優(yōu)選的揮發(fā)油提取及包合工藝穩(wěn)定可行。

桂枝茯苓復(fù)方；揮發(fā)油；提取；包合；正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

桂枝茯苓復(fù)方是由桂枝、茯苓、桃仁、赤芍、牡丹皮五種藥味組成，具有活血、化瘀、消徵之功效[1]。用于婦人瘀血阻絡(luò)所致塊、血瘀經(jīng)閉、行經(jīng)腹痛、產(chǎn)后惡露不盡；子宮肌瘤、慢性盆腔炎包塊、子宮內(nèi)膜異位癥、卵巢囊腫上述證候者。復(fù)方中君藥桂枝主要含有揮發(fā)油類(lèi)成分，臨床及藥理研究表明，揮發(fā)油具有重要的生理活性。因此，本研究采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)其揮發(fā)油提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。但因揮發(fā)油具有易氧化、易揮發(fā)的特性[2]，故采用β-環(huán)糊精包合揮發(fā)油，正交試驗(yàn)優(yōu)選出最佳包合工藝，從而增加揮發(fā)油的穩(wěn)定性。

1 儀器與材料

1.1 儀器

揮發(fā)油提取器；BSZZ4S型電子分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)；FN202-2型電熱干燥箱(長(zhǎng)沙儀器儀表廠)；DK-S26型電熱恒溫水浴鍋(上海精宏試驗(yàn)設(shè)備有限公司)；6202小型高速粉碎機(jī)(北京環(huán)亞天元機(jī)械技術(shù)有限公司)。

1.2 試藥

桂枝藥材購(gòu)自廣州致信中藥飲片有限公司，經(jīng)廣東藥學(xué)院劉基柱教授鑒定為：樟科植物肉桂(CinnamomumcassiaPresl)的干燥嫩枝；β-環(huán)糊精(天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，純度≥99%)；屈臣氏蒸餾水；其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 桂枝揮發(fā)油提取工藝

2.1.1 揮發(fā)油的制備 按處方比例稱(chēng)取桂枝200g，根據(jù)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表，加入規(guī)定量的水，浸泡一定時(shí)間，按《中國(guó)藥典》2010版一部附錄XD中的甲法進(jìn)行揮發(fā)油的提取?；亓魈崛〉揭?guī)定時(shí)間，收集揮發(fā)油，精密稱(chēng)定。

2.1.2 揮發(fā)油提取正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)[3-4]通過(guò)預(yù)試驗(yàn)，本實(shí)驗(yàn)選取揮發(fā)油體積為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用L9(34)正交試驗(yàn)優(yōu)選提取工藝。選擇浸泡時(shí)間(A)、蒸餾時(shí)間(B)、加水量(C)3個(gè)因素，每個(gè)因素3個(gè)水平的試驗(yàn)方案。因素水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表1，正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析見(jiàn)表3。

表1 提取工藝的因素水平

表2 提取工藝正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 提取工藝的方差分析結(jié)果

注：F0.05(2,2)=19.00；F0.01(2,2)=99.00。

以揮發(fā)油體積為評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行直觀分析和方差分析，根據(jù)表3方差分析結(jié)果，對(duì)揮發(fā)油提取結(jié)果進(jìn)行直觀分析，比較3個(gè)因素的極差，Rc>Rb>Ra，故影響因素的大小順序?yàn)镃>B>A。由上述方差分析結(jié)果可知，因素C(加水量)各水平間有顯著性差異，并結(jié)合各水平的揮發(fā)油含量以及實(shí)際生產(chǎn)，優(yōu)選出最佳揮發(fā)油提取工藝為A2B2C2，即：藥材加8倍量水，浸泡4h，蒸餾提取5h。

2.1.3 驗(yàn)證試驗(yàn) 稱(chēng)取桂枝200g，3份，按最佳提取工藝條件進(jìn)行3次驗(yàn)證試驗(yàn)。提取揮發(fā)油體積分別為1.21mL、1.23mL、1.19mL。結(jié)果表明，該提取工藝重復(fù)性好且穩(wěn)定可行。

2.2 桂枝揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合工藝

2.2.1 包合物的制備 飽和水溶液法：精密稱(chēng)取β-環(huán)糊精一定量，置于250mL錐形瓶中，加蒸餾水適量，加熱使溶解，制成飽和水溶液。冷卻至規(guī)定溫度，置磁力攪拌器上恒溫?cái)嚢?，精密量取和稱(chēng)定揮發(fā)油適量，用無(wú)水乙醇按1∶3稀釋?zhuān)徛龑⑵涞稳牒?CD的飽和水溶液中，恒溫?cái)嚢枰欢〞r(shí)間，冷卻至室溫，置冰箱4 ℃冷藏24h，抽濾，包合物用少量水沖洗，再用乙醚沖洗3次，每次10mL，40℃減壓干燥5h，即得包合物。

2.2.2 桂枝揮發(fā)油包合工藝正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)[5-6]通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)，確定揮發(fā)油包合工藝的主要影響因素有：揮發(fā)油∶β-環(huán)糊精(mL∶g)、包合溫度、包合時(shí)間，每個(gè)因素確定3個(gè)水平，采用L9(34)正交試驗(yàn)表，以包合物得率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，優(yōu)選其最佳包合工藝。因素水平見(jiàn)表4。

表4 包合工藝因素水平

2.2.3 揮發(fā)油包合物得率測(cè)定 按《中國(guó)藥典》2010版一部附錄XD揮發(fā)油測(cè)定法中的甲法進(jìn)行提取，將制得的干燥包合物精密稱(chēng)定，置于500mL圓底燒瓶中，加水200mL，水蒸氣蒸餾5h，待冷卻后，讀取揮發(fā)油體積，精密稱(chēng)定。按下式計(jì)算揮發(fā)油包合物得率，包合物得率(%)=包合物得量(g) /[揮發(fā)油重(g)+β-CD重(g) ]×100%，空白回收率(%)=M收集揮發(fā)油量(mg) /M加入揮發(fā)油量(mg)×100%。見(jiàn)表5。

表5 包合工藝正交試驗(yàn)結(jié)果

方差分析表明，三個(gè)因素對(duì)包合物得率影響程度由大到小排列順序?yàn)椋篈>B>C，即揮發(fā)油與β-CD的投料比對(duì)評(píng)價(jià)指標(biāo)的影響最大，包合溫度影響最小。最終確定最佳包合工藝條件為A2B2C2，即：桂枝揮發(fā)油與β-CD的投料比為1∶6(mL∶g)，包合溫度為70℃，攪拌包合2h。

表6 包合工藝的方差分析結(jié)果

注：F0.05(2,2)=19.00；F0.01(2,2)=99.00。

2.2.4 驗(yàn)證試驗(yàn) 取揮發(fā)油及β-CD適量，按最佳包合工藝條件進(jìn)行3次驗(yàn)證試驗(yàn)。揮發(fā)油包合得率分別為63.18%、61.24%、59.97%。結(jié)果表明，該包合工藝重復(fù)性好且穩(wěn)定可行。

3 討論

本研究運(yùn)用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行揮發(fā)油提取工藝的研究，確定揮發(fā)油最佳提取工藝：加8倍量水，浸泡4h，蒸餾提取5h。試驗(yàn)結(jié)果表明該工藝穩(wěn)定可行，揮發(fā)油得率較高。并進(jìn)行揮發(fā)油包合試驗(yàn)，確定了揮發(fā)油最佳包合工藝為：桂枝揮發(fā)油與β-CD的投料比為1∶6 (mL∶g)，包合溫度為70℃的條件下包合2h。

桂枝中的揮發(fā)油為鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、解熱作用的有效成分，但易揮發(fā)且遇光、熱不穩(wěn)定。在傳統(tǒng)工藝中，含揮發(fā)油的固體制劑多是將揮發(fā)油單獨(dú)提取后，用易揮發(fā)的溶媒(乙醇)稀釋后，噴灑或兌于浸膏中，其熱穩(wěn)定性差，無(wú)法保證制劑在有效期內(nèi)的質(zhì)量和臨床療效[7]。通過(guò)β-環(huán)糊精包合技術(shù)，液態(tài)的桂枝揮發(fā)油成為穩(wěn)定的固態(tài)，增強(qiáng)了其穩(wěn)定性，同時(shí)由于β-CD的特性，提高了制劑的生物利用度。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì). 中國(guó)藥典(一部)[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：984.

[2] 傅亮，饒小勇，黃愷，等. 四逆泡騰片中揮發(fā)油提取及包合工藝[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18(4)：5-9.

[3] 楊敏，許漢林，潘洪林. 莪術(shù)揮發(fā)油的提取及包合工藝研究[J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2008，19(6)：1404-1405.

[4] 嚴(yán)建業(yè)，王元清，喻林華，等. 八角茴香揮發(fā)油的提取與β-環(huán)糊精包合研究[J]. 中成藥，2010，32(2)：316-318.

[5] 李鐘，林秀旎，胡海容. 廣藿香和佩蘭揮發(fā)油提取和包合工藝的研究[J]. 中成藥，2009，31(4)：632-633.

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(責(zé)任編輯：宋勇剛)

Study on the Technological Process of the Extraction and the β-Cyclodextrin Inclusion of the Volatile Oil in Guizhifuling Compound

Lu Li，Guan Qinxiao，Zhao Lu，Rong Yueying，Liang Shengwang，Wang Shumei*

(Guangdong Parmaceutical University, Guangzhou 510006, China)

Objective:To study the extraction and β-cyclodextrin inclusion of volatile oil in Guizhifuling compound.Methods:The extraction technology of volatile oil from Guizhifuling compound was optimized by orthogonal test design with the yield of volatile oil as evaluation index and with the amount of water, soaking time and extraction time as factors. Inclusion process of β-CD was optimized by volatile oil rate as evaluation index and with the ratio of volatile oil to β-CD, inclusion temperature and mixing time as factors. Results:The optimal preparation process for extraction was established as follows: assign 8 times water into mixture of crude drugs, soaking 4h with water and distillating for 5h. The suitable inclusion condition was established as follows: the proportion of volatile oil and β-CD was 1∶6 (mL∶g), the inclusion temperature was 70 ℃ and mixing time was 2h. Conclusion:This method established for the extraction of volatile oil and β-cyclodextrin inclusion process was steady and feasible.

Guizhifuling Compound; Volatile Oil; Extraction; Inclusion; Orthogonal Test Design

2014-08-25

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81073024)

路麗(1990-)，女，廣東藥學(xué)院碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴庂|(zhì)量控制。

王淑美(1966-)，女，博士，廣東藥學(xué)院教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴庂|(zhì)量控制。E-mail：shmwang@sina.com

R284.2

A

1673-2197(2015)01-0020-03

10.11954/ytctyy.201501011