摘要：目的 探討外周血T細(xì)胞亞群檢測(cè)在原發(fā)性肝癌（簡(jiǎn)稱肝癌）患者中的水平變化及臨床意義。方法 選取我院2011年1月～2013年6月收治的86例肝癌患者及同期選擇來我院進(jìn)行健康體檢者86例體檢者為研究對(duì)象，分為由86例肝癌患者組成的實(shí)驗(yàn)組和由86例正常體檢者組成的對(duì)照組；采用免疫細(xì)胞化學(xué)法測(cè)定兩組所有成員的外周血T細(xì)胞亞群（CD3、CD4、CD8、CD4/CD8）水平。結(jié)果 經(jīng)外周血T細(xì)胞亞群檢測(cè)后實(shí)驗(yàn)組的CD3、CD4、CD4/CD8水平低于正常對(duì)照組，CD8水平高于對(duì)照組；且實(shí)驗(yàn)組CD3、CD4/CD8的值與對(duì)照組在比較上，差異具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 肝癌患者免疫功能明顯異常，檢測(cè)外周血T細(xì)胞亞群水平有助于了解肝癌患者機(jī)體免疫功能狀況。

關(guān)鍵詞：原發(fā)性肝癌；T細(xì)胞亞群；免疫細(xì)胞化學(xué)法SAP；CD

原發(fā)性肝癌，是我國惡性腫瘤中較常見的疾病之一。T細(xì)胞亞群的測(cè)定是檢測(cè)機(jī)體細(xì)胞免疫功能的重要指標(biāo)，且對(duì)某些疾病的輔助診斷、分析發(fā)病機(jī)制、觀察療效及監(jiān)測(cè)預(yù)后有重要意義。我院對(duì)2011年1月～2013年6月86例確診為原發(fā)性肝癌患者的外周血T細(xì)胞亞群水平與對(duì)照組的T細(xì)胞亞群水平進(jìn)行了對(duì)比分析，探討了原發(fā)性肝癌患者外周血中T細(xì)胞亞群的改變及檢測(cè)的臨床意義，旨在為今后原發(fā)性肝癌的臨床檢測(cè)提供參考依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2011年1月～2013年6月由我院收住的86例肝癌患者作為實(shí)驗(yàn)組，其中男性患者56例，女性患者30例；年齡36～55歲，中位年齡43歲。將同期選擇來我院參加體檢的86例健康體檢者作為對(duì)照組，其中男性56例，女性30例；年齡35～57歲，中位年齡38歲。兩組成員在性別構(gòu)成比以及年齡分布的比較上，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2病例選取標(biāo)準(zhǔn) 所有患者均依據(jù)2001年中國抗癌協(xié)會(huì)制定的原發(fā)性肝細(xì)胞癌診斷標(biāo)準(zhǔn)確診為原發(fā)性肝癌患者，且所有患者檢測(cè)前均未接受任何形式的放療和化療的治療方案，也未使用任何對(duì)免疫系統(tǒng)有影響的藥物，排除嚴(yán)重心腦血管疾病、精神障礙以及全身其他部位惡性腫瘤的患者。

1.3方法 標(biāo)本制備：抽取患者空腹靜脈血3ml，肝素抗凝，用PBS緩沖液等體積稀釋，用天津市源洋生物制品科技有限責(zé)任公司提供的人外周血淋巴細(xì)胞分離液分離出單個(gè)核細(xì)胞，用PBS緩沖液洗滌2次后，用剩余的PBS緩沖液將細(xì)胞吹打混勻，涂在用防脫片劑處理過的載玻片上，37℃溫箱烤干備檢，采用免疫細(xì)胞化學(xué)法SAP法，試劑盒由北京中杉金橋生物制劑公司提供。實(shí)驗(yàn)操作由經(jīng)驗(yàn)豐富的主管檢驗(yàn)師把關(guān)，每批實(shí)驗(yàn)均設(shè)PBS液替代第一代抗體的空白對(duì)照。標(biāo)本經(jīng)固定液固定2～3min后，加入CD3、CD4、CD8單抗，-4℃過夜：加入生物素標(biāo)記羊抗小鼠IgG單抗適量，37℃孵育30～45min，專人盲法鏡檢，高倍鏡下選取染色好的視野計(jì)數(shù)100～200個(gè)單個(gè)核細(xì)胞，細(xì)胞表面有紅色標(biāo)記物為陽性細(xì)胞，計(jì)算陽性百分?jǐn)?shù)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)的比較采用t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05。

2 結(jié)果

2.1 T細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組患者的外周血CD3、CD4/CD8值均明顯低于對(duì)照組，兩者在比較上，差異具有高度的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）；實(shí)驗(yàn)組的CD4值略低于對(duì)照組，CD8值高于對(duì)照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表1。

3 討論

近年來，大量研究表明，宿主細(xì)胞免疫功能的改變與腫瘤的形成密切相關(guān)，機(jī)體的細(xì)胞免疫異?？墒雇庵苎腡淋巴細(xì)胞受到抑制，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞逃避宿主的免疫監(jiān)視，最終發(fā)生腫瘤，同時(shí)，惡性腫瘤所引發(fā)的具有免疫功能的細(xì)胞活性降低，也是導(dǎo)致集體免疫平衡失調(diào)的重要原因之一。T細(xì)胞亞群是細(xì)胞免疫的主要免疫應(yīng)答形式，根據(jù)表型不同分為CD3、CD4、CD8三類，其中CD3分子表達(dá)于所有成熟T淋巴細(xì)胞的表面，是總T細(xì)胞重要標(biāo)志，CD3的水平能反映T細(xì)胞的數(shù)量及功能，CD4具有輔助、誘導(dǎo)T細(xì)胞標(biāo)志，是主要的免疫應(yīng)答細(xì)胞，CD8則是抑制、殺傷性T細(xì)胞標(biāo)志，具有抑制誘導(dǎo)及細(xì)胞毒性功能，對(duì)靶細(xì)胞有細(xì)胞毒作用的同時(shí)對(duì)CD4細(xì)胞具有調(diào)節(jié)抑制作用[1]。在正常情況下以上三類細(xì)胞是處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，CD4/CD8維持在1.5～2.0，此比值可反映機(jī)體的免疫功能，如機(jī)體免疫功能發(fā)生異常則CD3、CD4、CD8T細(xì)胞亞群細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)數(shù)量的變化，引起一系列的病理改變。

肝癌是一種常見的惡性腫瘤，其發(fā)生率極高，且常伴有T細(xì)胞亞群的改變和功能的損害，其發(fā)生可能與免疫功能下降、免疫監(jiān)視出現(xiàn)異常有密切關(guān)系。機(jī)體免疫狀態(tài)失衡后，機(jī)體的抗癌能力會(huì)進(jìn)一步下降，腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)速度更加迅猛，病情會(huì)更加惡化，甚至出現(xiàn)轉(zhuǎn)移。臨床研究顯示各系統(tǒng)惡性腫瘤均存在CD3、CD4胞的降低[2-3]，可能是腫瘤特異性抗原趨化引起T細(xì)胞亞群聚集因而形成抗腫瘤免疫。本文對(duì)肝癌患者T細(xì)胞亞群進(jìn)行了檢測(cè)，試驗(yàn)結(jié)果顯示肝癌患者CD3、CD44/CD8均明顯低于對(duì)照組（P<0.01）CD4也減低，說明肝癌患者免疫功能出現(xiàn)不同程度的抑制，降低了清除腫瘤細(xì)胞的能力，使惡性細(xì)胞得以增值，肝癌患者CD8高于對(duì)照組，也進(jìn)一步證實(shí)肝癌患者存在免疫功能紊亂，T細(xì)胞的數(shù)量及亞群之間的比例存在異常。臨床報(bào)道顯示惡腫瘤患者普遍存在CD8、CD4的下降及CD8升高[4-7]，本文研究結(jié)果與報(bào)道文獻(xiàn)相符，不同年齡及性別與肝癌患者T細(xì)胞亞群水平無關(guān)，T細(xì)胞亞群的水平是肝癌自身影響所致。

綜上所述，肝癌患者都存在免疫功能低下和免疫功能紊亂，所以，外周血T細(xì)胞亞群檢測(cè)對(duì)了解肝癌患者機(jī)體免疫功能狀況，同時(shí)，也為免疫調(diào)節(jié)治療和免疫增強(qiáng)治療，提供理論依據(jù)。

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編輯/王敏