摘要：目的 探討外周血T細胞亞群檢測在原發(fā)性肝癌（簡稱肝癌）患者中的水平變化及臨床意義。方法 選取我院2011年1月～2013年6月收治的86例肝癌患者及同期選擇來我院進行健康體檢者86例體檢者為研究對象，分為實驗組和對照組；采用免疫細胞化學法測定兩組所有成員的外周血T細胞亞群（CD3、CD4、CD8、CD4/CD8）水平。結(jié)果 經(jīng)外周血T細胞亞群檢測后實驗組的CD3、CD4、CD4/CD8水平低于正常對照組，CD8水平高于對照組；且實驗組CD3、CD4/CD8的值與對照組在比較上，差異具有高度統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結(jié)論 肝癌患者免疫功能明顯異常，檢測外周血T細胞亞群水平有助于了解肝癌患者機體免疫功能狀況，為患者療效及判斷預后方面具有一定的臨床價值。

關(guān)鍵詞：原發(fā)性肝癌；T細胞亞群；免疫細胞化學法SAP；CD

原發(fā)性肝癌，是我國惡性腫瘤中較常見的疾病之一，發(fā)病率約占全世界的40%左右，嚴重威脅著我國人口身體健康素質(zhì)的水平。T細胞亞群的測定是檢測機體細胞免疫功能的重要指標，且對某些疾病的輔助診斷、分析發(fā)病機制、觀察療效及監(jiān)測預后有重要意義。我院對比分析原發(fā)性肝癌患者與對照組的外周血T細胞亞群水平，探討了原發(fā)性肝癌患者外周血中T細胞亞群的改變及檢測的臨床意義，旨在為今后原發(fā)性肝癌的臨床檢測提供參考依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2011年1月～2013年6月由我院收住的86例肝癌患者作為實驗組， 其中男性患者56例，女性患者30例；年齡36～55歲，中位年齡43歲。將同期選擇來我院參加體檢的86例健康體檢者作為對照組，其中男性56例， 女性30例；年齡35～57歲，中位年齡38歲。兩組成員在性別構(gòu)成比以及年齡分布的比較上，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

1.2病例選取標準 所有患者均依據(jù)2001年中國抗癌協(xié)會制定的原發(fā)性肝細胞癌診斷標準確診為原發(fā)性肝癌患者，且所有患者檢測前均未接受任何形式的放療和化療的治療方案，也未使用任何對免疫系統(tǒng)有影響的藥物，排除嚴重心腦血管疾病、精神障礙以及全身其他部位惡性腫瘤的患者。

1.3方法 標本制備：抽取患者空腹靜脈血3ml，肝素抗凝，用PBS緩沖液等體積稀釋，用天津市源洋生物制品科技有限責任公司提供的人外周血淋巴細胞分離液分離出單個核細胞，用PBS洗滌2次后，將細胞吹打混勻，涂在用防脫片劑處理過的載玻片上，37℃溫箱烤干備檢，采用免疫細胞化學法SAP法，試劑盒由北京中杉金橋生物制劑公司提供。實驗操作由經(jīng)驗豐富的主管檢驗師把關(guān)，每批實驗均設(shè)PBS液替代第一代抗體的空白對照。標本經(jīng)固定液固定2～3min后，加入CD3、CD4、CD8單抗，-4℃過夜：加入生物素標記羊抗小鼠IgG單抗適量，37℃孵育30～45min，專人盲法鏡檢，高倍鏡下選取染色好的視野計數(shù)100～200個單個核細胞，細胞表面有紅色標記物為陽性細胞，計算陽性百分數(shù)。

1.4統(tǒng)計學處理 采用 SPSS13.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學分析，數(shù)據(jù)的比較采用t檢驗， 檢驗水準 a=0.05。

2 結(jié)果

T細胞亞群檢測結(jié)果：實驗組患者的外周血 CD3、CD4/CD8 值均明顯低于對照組， 兩者在比較上，差異具有高度的統(tǒng)計學意義（P<0.001）；實驗組的CD4 值略低于對照組， CD8 值高于對照組，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表1。

3 討論

近年來，大量研究表明，宿主細胞免疫功能的改變與腫瘤的形成密切相關(guān)。T細胞亞群是細胞免疫的主要免疫應(yīng)答形式，其中CD3分子表達于所有成熟T淋巴細胞的表面，是總T細胞重要標志，CD3的水平能反映T細胞的數(shù)量及功能，CD4具有輔助、誘導T細胞標志，是主要的免疫應(yīng)答細胞，CD8則是抑制、殺傷性T細胞標志，對靶細胞有細胞毒作用的同時對CD4細胞具有調(diào)節(jié)抑制作用[1]。在正常情況下以上三類細胞是處于動態(tài)平衡狀態(tài)，CD4/CD8維持在1.5～2.0之間，此比值可反映機體的免疫功能，如機體免疫功能發(fā)生異常則CD3、CD4、CD8T細胞亞群細胞會出現(xiàn)數(shù)量的變化，引起一系列的病理改變。

肝癌是一種常見的惡性腫瘤，嚴重危害人類的身心健康。其發(fā)生率極高，且常伴有T細胞亞群的改變和功能的損害。機體免疫狀態(tài)失衡后，抗癌能力下降，腫瘤細胞更加迅猛生長，惡化病情，甚至轉(zhuǎn)移。臨床研究顯示各系統(tǒng)惡性腫瘤均存在CD3、CD4胞的降低[2-3]，可能是腫瘤特異性抗原趨化引起T細胞亞群聚集因而形成抗腫瘤免疫。本文對肝癌患者T細胞亞群進行了檢測，試驗結(jié)果顯示肝癌患者CD3、CD4/CD8均明顯低于對照組（P<0.01） CD4也減低，說明肝癌患者免疫功能出現(xiàn)不同程度的抑制，降低了清除腫瘤細胞的能力，使惡性細胞得以增值，肝癌患者CD8高于對照組，也進一步證實肝癌患者存在免疫功能紊亂，T細胞的數(shù)量及亞群之間的比例存在異常。臨床報道顯示惡腫瘤患者普遍存在CD8、CD4的下降及CD8升高[4-7]，本文研究結(jié)果與報道文獻相符，不同年齡及性別與肝癌患者T細胞亞群水平無關(guān)，T細胞亞群的水平是肝癌自身影響所致。

綜上所述，外周血T細胞亞群檢測對了解肝癌患者機體免疫功能狀況，對臨床治療和預后的判斷有一定的參考價值，同時也為免疫調(diào)節(jié)治療和免疫增強治療，提供理論依據(jù)。

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編輯/哈濤