摘要：目的：建立保健酒中粗多糖含量的測(cè)定方法。方法：采用醇提醇沉水溶法從保健酒中提取粗多糖，經(jīng)苯酚-硫酸顯色后用分光光度法測(cè)定其含量。結(jié)果：方法線(xiàn)性范圍為粗多糖含量0-0.15mg/mL，回歸方程為Y=0.0034X+0.0021，線(xiàn)性系數(shù)0.9995，加標(biāo)回收率為96.2%-100.9%。結(jié)論：此方法操作簡(jiǎn)便，回收率高，可用于測(cè)定保健酒中粗多糖的含量。

關(guān)鍵詞：苯酚-硫酸法 保健酒 粗多糖

中圖分類(lèi)號(hào)： TS261.7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-5336（2015）08-0000-00

Abstract： Objective：To establish a method for determination of polysaccharides in health wine.Methods：The polysaccharides in health wine which was extracted by ethanol and dissolved by hot-water， was in ultraviolet spectrophotometry determination with phenol-sulfuric acid as chromogenicagent.Results：The linear range of the method was 0-0.15mg/mL，The linear regression equation and correlation coefficient was y=0.0034x+0.0021 and 0.9995， the recoveries were 96.2%-100.9%. Conclution：This method is suitable for detecting polysaccharides in health wine with the advantages of high recovery rate and easy operation.

Keywords： phenol-sulfuric acid method； health wine； polysaccharides

保健酒中含有中藥材提取物，主要的中藥材是參類(lèi)、地黃、黃芪、枸杞子等，這些中藥材含有保健功效成分粗多糖。粗多糖具有增加免疫、調(diào)節(jié)胃腸、抑制病原菌等功效[1]。目前，粗多糖的檢測(cè)[2]多采用《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》，但其樣品前處理方法并不適用于保健酒中的粗多糖檢測(cè)。

本文采用醇沉醇提水溶法[3]提取粗多糖，通過(guò)經(jīng)典的苯酚-硫酸法顯色[4，5]，并用分光光度法測(cè)定其含量。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器

紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本島津公司，UV-1800）；電子分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器公司，BSA224S-CW），電熱恒溫水浴鍋（江蘇金壇市中大儀器廠）。

1.1.2 試劑

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品（購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所）；保健酒；其它化學(xué)試劑均為分析純；所用水為去離子水或同等純度蒸餾水。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備

精密稱(chēng)取105℃干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖10mg，用水溶解并定容至100mL容量瓶中，搖勻即可，即每毫升含葡萄糖0.1mg。

1.2.2供試品溶液的制備

精密量取保健酒樣品10mL，加入乙醇100mL，搖勻，4℃放置12h，取出，過(guò)濾，濾紙用乙醇30mL分三次洗滌，將濾紙及濾渣用熱水充分洗滌并轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，取5mL置50mL容量瓶中，加水至刻度，作為供試品溶液。備用。

1.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制

精密量取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL分別置25mL具塞試管中，分別補(bǔ)水至2.0mL，精密加入5%苯酚溶液1mL，于渦旋器上混勻，迅速精密加入硫酸5mL，于渦旋器上混勻，置40℃水浴中保溫15min，取出后迅速冷卻至室溫，在485nm波長(zhǎng)處以試劑空白溶液為參比，1cm比色皿測(cè)定吸光度值。以葡萄糖含量為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算回歸方程為：Y=0.0034X+0.0021，線(xiàn)性系數(shù)0.9995

1.2.4樣品含量的測(cè)定

精密量取供試品溶液1mL置具塞試管中，加水1.0mL，混勻。同標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制項(xiàng)下的方法，自“加入5%苯酚溶液1mL”起操作，在485nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)，根據(jù)回歸方程計(jì)算即得。結(jié)果粗多糖含量（以葡萄糖計(jì)）為1.72g/100mL。

2 結(jié)果與討論

2.1 加入乙醇量的選擇

乙醇加入量是影響測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確度的重要因素，加入量少，粗多糖不能完全沉淀，加入量過(guò)多，容易發(fā)生副反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)取保健酒樣品10mL于帶塞錐形瓶中，分別加入20mL、50mL、100mL、150mL、200mL乙醇來(lái)提取沉淀粗多糖。經(jīng)對(duì)比發(fā)現(xiàn)，乙醇加入量在100mL時(shí)吸光度值最大（表1），加入量過(guò)大時(shí)，吸光度反而下降，顯色反應(yīng)也不同，這可能是發(fā)生其它的副反應(yīng)所致。

2.2 提取溫度的選擇

考慮到乙醇的易揮發(fā)性，所以考察了在4℃及20℃下的粗多糖提取沉淀效果，對(duì)比發(fā)現(xiàn)，在4℃的條件下，乙醇對(duì)保健酒中的粗多糖的提取更有利。

2.3 提取時(shí)間的選擇

放置時(shí)間是決定粗多糖能否提取完全的關(guān)鍵因素，因考慮到提取溫度較低，，實(shí)驗(yàn)選取放置4h、6h、8h、10h、12h、14h、16h，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，放置12h時(shí)其吸光度最大（表2），即完全提取沉淀粗多糖，提取時(shí)間延長(zhǎng)時(shí)，吸光度有所下降，這可能是粗多糖不穩(wěn)定的結(jié)果所致。

2.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液，連續(xù)測(cè)定6次，其測(cè)定值分別為0.236、0.237、0.237、0.235、0.238、0.236，RSD=0.44%，表明儀器精密度良好。

2.5重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

精密吸取同一批號(hào)保健酒，按供試品溶液制備方法制備6份溶液，按2.3項(xiàng)處理并測(cè)定其粗多糖含量。結(jié)果表明RSD=1.97%，表明本法有較好的重復(fù)性。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

對(duì)同一樣品溶液，每隔一定時(shí)間測(cè)定一次吸光度，表明樣品溶液顯色后120min內(nèi)穩(wěn)定性良好（RSD<3%），即在2h內(nèi)測(cè)定結(jié)果可靠（表3）。

2.7回收率試驗(yàn)

為確定方法的準(zhǔn)確度，將樣品稀釋10倍后進(jìn)行加標(biāo)回收，測(cè)定其回收率為96.2%-100.9%（表4）。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用醇沉醇提水溶法提取并測(cè)定保健酒中的粗多糖，并用經(jīng)典的苯酚-硫酸顯色法測(cè)定其含量。從精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性等試驗(yàn)結(jié)果可以看出，此方法準(zhǔn)確性高，重現(xiàn)性好，具有簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì)的優(yōu)點(diǎn)。在0-0.15mg/mL線(xiàn)性范圍內(nèi)，加標(biāo)回收率較好，可以作為保健酒中粗多糖的質(zhì)量分析方法，為保健酒的質(zhì)量控制和產(chǎn)業(yè)化開(kāi)發(fā)提供了理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

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[5]王光亞.保健食品功效成分檢測(cè)方法[M].2002，19-23.

收稿日期：2015-04-20

作者簡(jiǎn)介：張利鋒（1985—），女，河南安陽(yáng)人，碩士，技師，研究方向：理化檢驗(yàn)。