摘要：根據(jù)雙歧桿菌的營(yíng)養(yǎng)需求，優(yōu)化培養(yǎng)基中的碳源、氮源和增殖因子，選擇市面上常用的雙歧桿菌固體培養(yǎng)基，進(jìn)行篩選，選擇最適宜的培養(yǎng)基以提高活菌量。

關(guān)鍵詞：雙歧桿菌 培養(yǎng)基 篩選

中圖分類(lèi)號(hào)：TS 201.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-5336（2015）08-0000-00

雙歧桿菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求較高，培養(yǎng)基中必須含有豐富的氨基酸、維生素、糖類(lèi)物質(zhì)及緩沖鹽類(lèi)[1]，并且除了基本的營(yíng)養(yǎng)外，還需添加增長(zhǎng)因子和抑制其他乳酸菌的莫匹羅星鋰鹽[2]。如何在較短培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基提高活菌數(shù)目，就成為了關(guān)鍵技術(shù)，這就是本文的目的。

1材料和器具

1.1菌種

雙歧桿菌計(jì)數(shù)質(zhì)控樣品Q(chēng)C-FD-025，重量為50g的乳粉樣品，雙歧桿菌含量為750000CFU/g，中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院測(cè)試評(píng)價(jià)中心。

1.2培養(yǎng)基

（1）培養(yǎng)基1，成分：蛋白胨、牛肉粉、酵母粉、葡萄糖、吐溫80、磷酸氫二鉀、乙酸鈉、檸檬酸三鈉、硫酸鎂、硫酸錳、瓊脂、莫匹羅星鋰鹽，pH 6.2。

（2）培養(yǎng)基2，成分：胰酪蛋白胨、大豆蛋白胨、酵母浸粉、葡萄糖、L-半胱氨酸、刃天青、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、碳酸氫鈉、氯化鈉、氯化鈣、硫酸鎂、瓊脂、pH 7.0。

（3）培養(yǎng)基3，成分：蛋白胨、葡萄糖、酵母浸粉、可溶性淀粉、氯化鈉、L-半胱氨酸、番茄浸粉、肝浸粉、瓊脂、吐溫80，pH 7.0。

（4）培養(yǎng)基4，成分： 蛋白胨、酵母提取物、磷酸二氫鉀、硫酸氫二鉀、硫酸銨、硫酸鎂七水合、L-半胱氨酸鹽酸鹽一水合、丙酸鈉、半乳寡聚糖TOS、瓊脂、莫匹羅星鋰鹽，pH6.2。

1.3儀器設(shè)備

電子天平，梅特勒-托利多儀器；高壓滅菌GR85DF441，致微儀器；超凈工作臺(tái)SW-CJ-ID，蘇州凈化設(shè)備有限公司；恒溫恒濕培養(yǎng)BSC-150，上海博迅實(shí)業(yè)有限公司；DELTA320pH計(jì)，梅特勒-托利多儀器；YQX-II型厭氧培養(yǎng)箱，博翎儀器。

2 方法與結(jié)論

2.1操作步驟

以無(wú)菌操作將50g 奶粉質(zhì)控樣品倒入500mL無(wú)菌水中，使之均質(zhì)化，作為1：10稀釋液。無(wú)菌吸取1mL 1：10稀釋液1mL，注入9mL滅菌生理鹽水內(nèi)，振搖混勻，做成1：100的稀釋液，另取1mL按上述操作順序，作10倍遞增稀釋液。根據(jù)質(zhì)控樣品菌含量，選擇3個(gè)連續(xù)的適宜稀釋度，每個(gè)稀釋度吸取1mL樣品勻液，分別用以上四種培養(yǎng)基進(jìn)行表面涂布，36±1℃厭氧培養(yǎng)48±2 h，每個(gè)稀釋度做2個(gè)平行樣。計(jì)數(shù)平板上的雙歧桿菌菌落數(shù)。

2.2 革蘭染色和鏡檢

挑取典型菌落制片，革蘭氏染色后鏡檢，觀察菌體形態(tài)。雙歧桿菌革蘭氏染色陽(yáng)性，經(jīng)24-48h 培養(yǎng)后多數(shù)形成直徑為0.5-1mm、凸起、邊緣整齊、乳白色或灰白色不透明的菌落，有彎曲和分叉現(xiàn)象，形成雙歧桿菌特有的“V”或“Y”結(jié)構(gòu)。

2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

參考文獻(xiàn)

[1]羅珍蘭，謝繼志，王慶明.雙歧桿菌和乳酸菌在不同基質(zhì)中混合發(fā)酵的情況比較[J].食品工業(yè)科技，1997（4）：50-53.

[2]韓雪，張?zhí)m威.雙歧桿菌增殖因子的篩選及培養(yǎng)基的優(yōu)化[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2005，24（4）：69-72.

收稿日期：2015-04-26

作者簡(jiǎn)介：徐清（1983—），女，漢族，山東人，生物工程專(zhuān)業(yè)工程碩士，助理工程師職稱(chēng)，研究方向：微生物檢驗(yàn)和酒類(lèi)感官品評(píng)。