摘要：目的，建立同時(shí)測定頭孢哌酮舒巴坦注射液中頭孢哌酮和舒巴坦含量的HPLC法。方法：采用SymmetryshieldTMRP18（5μm，4.6×250mm）色譜柱，流動(dòng)相為0.005mol/l四丁基氫氧化銨溶液（取10%四丁基氫氧化銨溶液26.4ml，加水800ml后，用1mol/l磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至4.0，再用水稀釋至2000ml，搖勻）：乙腈（750：250），檢測波長為220nm。結(jié)果：頭孢哌酮和舒巴坦的線性范圍分別為：0.279～4.462mg/m1（r=0.9999）和0.120～1.926mg/m1（r=0.9998）；平均回收率（n=9）分別為100.73%（RSD=0.38%）和101.11%（RSD=0.36%）。結(jié)論：該方法精密度好、準(zhǔn)確可靠，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：HPLC 頭孢哌酮 舒巴坦 含量測定

中圖分類號：R927.2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1672-5336（2015）06-0000-00

Abstract： Objective： To establish an HPLC method for simultaneous determination of Cefoperazone Sodium and Sulbactam Sodium in the Cefoperazone Sodium and Sulbactam Sodium injection.Methods： SymmetryshieldTMRP18（5μm， 4.6×250mm）column was adopted with a mobile phase of 0.005mol/l tetrabutyl ammonium hydroxide solution（26.4ml of 0.005mol/l tetrabutyl ammonium hydroxide was added to 800ml of water， adjusted with 1mol/l H3PO4 to pH 4.0， then diluted with water to 2000ml ）： Acetonitrile （750：250）. The UV detection was set at 220nm. Result： The linear ranges of Cefoperazone Sodium and Sulbactam Sodium were 0.279～4.462mg/m1（r=0.9999）and 0.120～1.926mg/m1（r=0.9998）， respectively； The average recoveries（n=9） were 100.73%（RSD=0.38%）and 101.11%（RSD=0.36%）. Conclusion： This method is accurate and reliable， so it can be used for quality control of this preparation.

Key words： HPLC； Cefoperazone Sodium； Sulbactam Sodium； assay

頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉注射劑為抗生素與酶抑制劑的復(fù)合劑，兩者協(xié)同作用，可以增強(qiáng)抑菌效果和抗菌譜。目前其制劑的含量測定方法主要為高效液相色譜法[1，2，3]。但該法存在分離度低、雜質(zhì)分析效果不理想等問題。《中國藥典》2010年版（二部）[4]采用高效液相色譜法，以酸性四丁基氫氧化銨溶液：乙腈（750：250）為流動(dòng)相，閆曉燕[5]等研究發(fā)現(xiàn)四丁基氫氧化銨可以將舒巴坦與雜質(zhì)很好的分開。本文采用2010年藥典收錄的方法，測定頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉注射劑中頭孢哌酮鈉和舒巴坦鈉含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方法分離度高，重現(xiàn)性好，可作為頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉注射劑含量測定的方法。

1儀器與試劑

1.1儀器

Waters2695型高效色譜儀（Waters科技有限公司），F(xiàn)A2004電子天平（上海衡平儀器儀表廠），PHS-3C型精密酸度計(jì)（上海法蘭朵科技發(fā)展有限公司HW.SY11-K電熱恒溫水浴鍋（北京市長風(fēng)儀器儀表公司），LH75G-4型超純水機(jī)（重慶浪華實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備有限公司）。

1.2試劑

注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉，本實(shí)驗(yàn)室自制，批號20140501、20140502、20140503；頭孢哌酮和舒巴坦對照品，購于重慶市食品藥品檢定所；四丁基氫氧化銨和乙腈為色譜純，磷酸二氫鈉為分析純。

2方法

2.1溶液制備

（1）對照品溶液。精密稱取頭孢哌酮和舒巴坦對照品分別約為50mg和25mg，置于50ml量瓶中，加磷酸鹽緩沖液（取0.2mol/l的磷酸二氫鈉溶液39.0ml與0.2mol/l磷酸氫二鈉溶液61.0ml，混勻，用磷酸調(diào)pH至7.0）溶解，加流動(dòng)相稀釋成每1ml含頭孢哌酮和舒巴坦分別為1mg和0.5mg的對照品溶液。

（2）供試品溶液。取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取約160mg，置100ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，即為樣品溶液。

2.2色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

色譜柱：SymmetryshieldTM RP18柱（5μm，4.6×250mm）；流動(dòng)相：0.005mol/l四丁基氫氧化銨溶液（取10%四丁基氫氧化銨溶液26.4ml，加水800ml后，用1mol/l磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至4.0，再用水稀釋至2000ml，搖勻）：乙腈（750：250）為流動(dòng)相；檢測波長：220nm。進(jìn)樣頭孢哌酮和舒巴坦對照品溶液10μl，記錄色譜圖，舒巴坦與頭孢哌酮降解產(chǎn)物分離度為3.2，頭孢哌酮理論塔板數(shù)為7698，且與相鄰色譜峰的分離度均符合要求。

2.3 測定方法

分別進(jìn)樣頭孢哌酮和舒巴坦對照品和供試品溶液10μl，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品中頭孢哌酮和舒巴坦的量。

3 結(jié)果

（1）線性關(guān)系考察。分別取舒巴坦和頭孢哌酮對照品約20mg和40mg于不同的10ml容量瓶中，用流動(dòng)相定容，精密取上述溶液5ml用流動(dòng)相定容至10ml，逐級稀釋至舒巴坦?jié)舛葹?.120mg/ml，頭孢哌酮濃度為0.279 mg/ml。按上述色譜條件進(jìn)樣，按峰面積計(jì)算回歸方程，得方程：Y=3.78E+006X-1.01E+005，r=0.9998（舒巴坦）；Y=1.78E+007X-3.34Ee+005，r=0.9999（頭孢哌酮）。式中Y表示峰面積，X表示濃度。結(jié)果表明，舒巴坦?jié)舛仍?.120～1.926mg/m1，頭孢哌酮濃度在0.279～4.462mg/m1范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系。

（2）回收率試驗(yàn)。取已知濃度的供試品溶液（舒巴坦?jié)舛葹?.8866mg/ml，頭孢哌酮濃度為1.5997mg/ml）3ml于10ml量瓶中，分別向其中加入2、3、5ml對照品溶液（舒巴坦?jié)舛葹?.5056mg/ml，頭孢哌酮濃度為1.0841mg/ml），制備濃度為80%、100%、120%的3種溶液，每個(gè)濃度平行3份，按上述色譜條件，計(jì)算回收率。結(jié)果如下：3種濃度下，舒巴坦的平均回收率分別為101.20%、101.32%、100.80%，RSD為0.36%；頭孢哌酮分別為100.83%、100.99%、100.39%，RSD為0.38%。表明本方法回收率良好。

（3）重復(fù)性試驗(yàn)。配制6份20140501批供試品溶液，測定。結(jié)果顯示：舒巴坦平均含量為103.00%，RSD為1.71%；頭孢哌酮平均含量為101.65%， RSD為1.23%。表明本方法重復(fù)性良好。

（4）精密度試驗(yàn)。取對照品溶液10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，測得峰面積，計(jì)算RSD分別為1.14%（舒巴坦），0.67%（頭孢哌酮）。表明本方法精密度良好。

（5）專屬性試驗(yàn)。本品中的舒巴坦和頭孢哌酮分別經(jīng)光解、酸水解、堿水解、氧化、熱等破壞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，原有有關(guān)物質(zhì)以及在各種條件下，破壞新產(chǎn)生的物質(zhì)均能與舒巴坦峰和頭孢哌酮峰完全分離。表明本方法用于含量測定有較好的專屬性。

（6）穩(wěn)定性考察。取同一供試品溶液，室溫放置，分別于0、2、4、6、8h進(jìn)行測定。結(jié)果舒巴坦和頭孢哌酮的RSD分別0.41%和0.17%。表明：室溫下供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

（7）耐用性。通過對流動(dòng)相比例在±5%范圍內(nèi)變化，流速在0.8-1.2ml/min范圍內(nèi)變化，考察耐用性，結(jié)果均能達(dá)到系統(tǒng)適應(yīng)性要求，表明該方法耐用性較好。

（8）含量測定。按上述色譜條件，分別對20140501、20140502、20140503三批樣品進(jìn)行頭孢哌酮和舒巴坦含量測定。結(jié)果見表1。

4 討論

（1）流動(dòng)相的選擇：舒巴坦[6]和頭孢哌酮在普通反相流動(dòng)相系統(tǒng)中，保留時(shí)間短，得不到較好的分離，故采用2010版藥典確定的流動(dòng)相。一方面，游離的舒巴坦和頭孢哌酮可與氫氧化四丁基銨形成較小的離子對絡(luò)合物，延長了保留時(shí)間，從而改善了分離度；另一方面，酸性流動(dòng)相同樣延長了兩者的保留時(shí)間。

（2）波長的選擇：頭孢哌酮在227nm處有最大吸收，而舒巴坦的最大吸收波長為210nm，同時(shí)兼顧兩個(gè)組分，所以選擇220nm作為測定波長。

參考文獻(xiàn)

[1]嬌筱蔓，趙曉冬，王全一.UPLC測定注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉[J].藥物分析雜志，2011，31（3）：504-508.

[2]侯欽云，趙京春，姜紅.注射用頭孢哌酮鈉/舒巴坦鈉的穩(wěn)定性研究[J].醫(yī)學(xué)導(dǎo)報(bào)，2009，28（7）：946-948.

[3]SHRIVASTAVA S M， SINGH R， TARIQ A， et al. A Novel High Performance Liquid Chromatographic Method for Simultaneous Determination of Ceftriaxone and Sulbactam in Sulbactomax[J].Int. J. Biomed.Sci，2009，5（1）：37-43.

[4]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典2010年版（二部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：786-1042.

[5]閆小燕，胡欣，曹國穎，等.反相高效液相色譜法測定注射用哌拉西林鈉/舒巴坦鈉的含量[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2003，23（1）：33-35.

[6]張丹，曾經(jīng)澤.注射用美洛西林鈉—舒巴坦鈉含量[J].藥物分析雜志，1999，19（2）：94-96.

收稿日期：2015-03-16

作者簡介：劉守瓊（1970—），女，重慶渝北人，大學(xué)本科，高級工程師，研究方向：食品藥品等化學(xué)分析檢測。