摘要：當(dāng)前，從靈芝中提取粗多糖的方法有很多種，本文就從乙醇沉淀多糖的稀堿溶液提取法（稀堿法1）、沸水提取法、加酸乙醇沉淀多糖的稀堿溶液提取法（稀堿法2）以及行標(biāo)法這四種靈芝粗多糖的提取方法進行分析，計算最后的得率，從而尋找最科學(xué)的粗多糖提取方法，以期為行業(yè)中粗多糖的提取方法提供一些參考。

關(guān)鍵詞：靈芝 粗多糖提取 得率

中圖分類號：S567.31 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：1672-5336（2015）06-0000-00

研究靈芝中粗多糖的主要手段就是對提取的粗多糖的得率進行測定，這也是反映靈芝中粗多糖含量多少的一個重要指，下面就對靈芝中粗多糖四種提取方法的得率進行分析。

1靈芝粗多糖的提取方法

1.1沸水提取法

將1g靈芝超細粉末，加入50ml的離心管中，在其中加入25ml雙蒸餾水，是靈芝超細粉末能夠充分的浸泡，然后放置在沸水浴中2h，離心后收集上清，待其沉淀后，再加入25ml雙蒸餾水，放置在沸水浴中1h，離心后收集上清，將兩次得到的上清溶液混合，用雙蒸餾水將其定容到50ml，從中取出1ml，加入5ml無水的乙醇，搖勻后放置在4℃的環(huán)境中12h，待其取出后以4000r/min的速度離心后收集沉淀，用少量的無水乙醇重新使沉淀懸浮，然后洗滌沉淀2次，最后自然風(fēng)干，加入5ml雙蒸餾水將沉淀溶解，就得到了等待檢測的粗多糖溶液。

1.2行標(biāo)法

將0.5g—1g靈芝超細粉末加入到50ml的離心管中，用5ml水浸泡，再緩慢加入20ml無水乙醇，搖勻，是其充分混合，然后放置在超聲提取器中，待超聲提取30min后，以4000r/min的速度離心10min，去掉上清。用10ml乙醇溶液將剩下的沉淀物洗滌、離心。用水將其轉(zhuǎn)入到圓底燒瓶，加入50ml蒸餾水，裝上冷凝管，放入沸水浴中提取2h，待冷卻到室溫后，過濾，將上清液再轉(zhuǎn)移到100ml的容量瓶中，洗滌殘渣2—3次，最后將洗滌液轉(zhuǎn)移到容量瓶中，加水，定容。此溶液就是等待檢測的粗多糖溶液。

1.3稀堿法1

還是稱取1g靈芝超細粉末將其加入20ml離心管中，然后加入25ml 0.5mol/L的碳酸氫鈉溶液對靈芝粉末進行浸泡，然后放在50℃使得水浴中1h，離心后收集上清，將沉淀再用25ml 0.5mol/L的碳酸氫鈉溶液懸浮，放在50℃的水浴中1h，離心后收集上清，將兩次得到的上清進行混合，用0.5mol/L的碳酸氫鈉溶液定容到50ml。然后后面的操作跟沸水提取法就一樣了。

1.4稀堿法2

操作方法基本與第三種類似，只是在最后，用無水乙醇沉淀的時候，向混合液中加入0.5mol/L的鹽酸并將pH控制在6.0—6.5，之內(nèi)，后面的方法就跟稀堿提取法一樣了。

2對粗多糖的測定

2.1測定

測定粗多糖的主要方法就是運用硫酸——苯酚法進行顯色反應(yīng)來進行測定。將上面實驗得到的粗多糖待測溶液取出0.5ml，然后在里面加入3.5ml的濃硫酸和0.75ml 5%的苯酚溶液，搖勻后用雙蒸餾水定容到5ml，靜止，待溶液冷卻到室溫后，再用雙蒸餾水其進行調(diào)零，在

488nm下吸收光值，進而換算呈得率，計算的公式為：

得率=（C×V）÷M×100%

其中：C——提取溶液中出多糖的濃度；V——提取溶液的總體積；M——提取所用的領(lǐng)子的實體質(zhì)量。

2.2影響

堿性鹽溶液跟無水乙醇混合時會產(chǎn)生沉淀，而粗多糖也會與無水乙醇產(chǎn)生沉淀。為了使結(jié)果更加的準(zhǔn)確，避免堿性鹽溶液對顯色反應(yīng)造成干擾，可以用以下兩種方法來檢驗：1：取1ml 0.5mol/L的碳酸氫鈉溶液，在其中加入5ml無水乙醇，離心后收集沉淀，再用5ml雙蒸餾水將沉淀溶解，用硫酸——苯酚進行顯色反應(yīng)。2：直接用0.5ml 0.5mol/L的碳酸氫鈉溶液進行顯色反應(yīng)。通過以上兩種方法的檢測，記錄的影響結(jié)果如下：

從上表可以看出，碳酸氫鈉堿性溶液對硫酸——苯酚的顯色反應(yīng)確實存在影響，在吸收的光波長相同的情況下，這個影響在0.1個吸光值以內(nèi)，由此可見，以0.5mol/L碳酸氫鈉溶液提取的粗多糖的得率比實際情況會稍微偏大。

3分析結(jié)果

通過上述實驗，我們可以得出靈芝中粗多糖得率測定結(jié)果，如下圖：

從上圖中可以很直觀的看出，靈芝中粗多糖的提取方法中，采用稀堿提取法的得率最高，基本上接近2%了，而沸水提取法的得率最低，其余兩種提取法中的得率基本相近，介于稀堿提取法和沸水提取法之間。

4稀堿法1可行性的驗證

從上述可知，稀堿法1在四種方法中粗多糖的得率最高，那么在靈芝的其他品種中是不是也是一樣呢？為了驗證它的可行性，運用上述實驗方法，對靈芝的不同品種又進行了實驗，得出不同的得率，如下圖：

其中GI—16、GI—20、GI—H、GI—YW、Gap—1均為靈芝的不同品種，從圖形可以看出，GI—H的得率比較高，GI—20得率相對來說要少一點，說明運用稀堿法1對靈芝進行粗多糖的提取，還可以知道不同品種粗多糖含量的差異性，可以運用在靈芝不同品種中對粗多糖提取的研究。

5結(jié)語

通過實驗得知，沸水法的粗多糖得率并不是很高但是簡單；行標(biāo)法能夠獲得比較完整的多糖類物質(zhì)但是步驟復(fù)雜；稀堿法1的得率比較高，但其中很可能也含得有降解的多糖，所以每個方法都有其優(yōu)點和缺點，所以在，實際情況中，還需要根據(jù)實際情況來選擇合適的方法。

收稿日期：2015-03-18

作者簡介：劉佳寧（1968—），女，江蘇南京人，工程師，本科，目前在江蘇省食品藥品監(jiān)督檢驗研究院從事檢驗工作。