崔園園,陳志敏,張 美,熊 瑞,李文兵,胡昌江*

(1.成都中醫(yī)藥大學,四川 成都 611137；2.四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司，四川 成都 610081)

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石榴皮炮制前后總鞣質(zhì)及鞣花酸、安石榴苷含量變化研究

崔園園1,陳志敏1,張 美1,熊 瑞1,李文兵2,胡昌江1*

(1.成都中醫(yī)藥大學,四川 成都 611137；2.四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司，四川 成都 610081)

目的：比較石榴皮炮制前后總鞣質(zhì)、鞣花酸、安石榴苷的含量變化，擬闡明炮制對石榴皮中鞣質(zhì)類成分的影響。方法：采用紫外可見分光光度計法測定鞣質(zhì)的含量，高效液相色譜法測定鞣花酸、安石榴苷的含量，對石榴皮生品、炒黃品和炒炭品進行比較。結(jié)果：不同批次石榴皮炮制前后鞣質(zhì)的平均含量分別為：生品15.03%、炒黃品17.54%、炒炭品11.07%；鞣花酸的平均含量分別為：生品4.33%、炒黃品4.20%、炒炭品4.48%；安石榴苷的平均含量分別為：生品38.76%、炒黃品50.23%、炒炭品16.45%。結(jié)論：炮制對石榴皮中鞣質(zhì)類成分的含量有顯著影響。

石榴皮；炮制；鞣質(zhì)；鞣花酸；安石榴苷

石榴皮為石榴科植物石榴PunicagranammL.的干燥果皮，其性溫，味酸、澀，具有澀腸止瀉、止血、驅(qū)蟲等作用，在民族醫(yī)藥中得到廣泛使用：石榴皮生品長于驅(qū)蟲、澀精、止帶，多用于治療蟲積腹痛、滑精、白帶、脫肛、疥癬[1]；炒后收澀作用增強[2]，多用于指腸風下血。

石榴皮中鞣質(zhì)類成分占總重量的10%～20%[3]，是石榴皮的重要組成成分，是影響石榴皮質(zhì)量的主要因素。國內(nèi)外研究[4-6]結(jié)果表明，安石榴苷、鞣花酸是石榴皮鞣質(zhì)類成分的主體，其含量遠遠高于沒食子酸等其他鞣質(zhì)成分，可用來評價石榴皮的質(zhì)量。而炮制后以上兩種成分有何變化、對石榴皮功效、質(zhì)量有無影響目前尚無報道。為此，本實驗以總鞣質(zhì)、安石榴苷和鞣花酸為指標，建立含量測定方法，擬作為石榴皮飲片炮制后評價的質(zhì)量標準。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-20AT型高效液相色譜儀(日本島津)，TU-1950型紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)，KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，BP211D型電子天平，高速粉碎機(永康市溪岸五金藥具廠)。

1.2 藥材與試劑

3個批次的石榴皮生品、炒黃品和炒炭品購自四川國強中藥飲片有限公司，批號分別為141101、141102、141103，編號1、2、3。沒食子酸(批號 TOOP-Z871)，鞣花酸(批號14668)，安石榴苷(批號 P0023)對照品，甲醇(色譜純)，水(純凈水)，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 鞣質(zhì)含量測定

按照2010年版中國藥典一部石榴皮項下鞣質(zhì)含量測定法測定，結(jié)果見表1。

2.2 鞣花酸、安石榴苷含量測定

2.2.1 對照品溶液制備 分別精密量取鞣花酸、安石榴苷對照品1.07mg、5.40mg，置5mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

表1 石榴皮不同炮制品鞣質(zhì)類成分的含量測定 (%)

2.2.2 供試品溶液制備 分別精密稱定各樣品粉末(過3號篩)約0.2g，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇50mL蓋塞稱重，超聲30min(250W,25kHz)，放冷，再次稱重，補足重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.2.3 色譜條件 Phenomenex C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)，流動相甲醇-0.4%磷酸梯度洗脫，如表2所示，流速1.0mL·min-1，檢測器檢測波長270nm，柱溫25℃。

表2 流動相梯度洗脫程序 (%)

2.2.4 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗 取對照品溶液和供試品溶液，在上述色譜條件下進行分析，結(jié)果對照品色譜峰與其他峰均能達到基線分離，供試品色譜峰的保留時間和峰形與對照品一致，表明此分析條件可行。結(jié)果見圖1。

A．安石榴苷和鞣花酸混合對照品；B．供試品；1.α-安石榴苷；2.β-安石榴苷；3.鞣花酸

圖1 混合對照品和供試品溶液的液相色譜

2.2.5 線性關(guān)系考察 取上述混合對照品溶液適量，過0.45μm微孔濾膜，分別進樣4、6、8、10、12、14、16μL，按上述條件進行檢測，測定各色譜峰的峰面積。以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程。鞣花酸：Y=393 731x+431 721(r=0.999 4)；安石榴苷：Y=14 544x+7 415.5(r=0.999 5)和Y=18 836x+38 867(r=0.999 5)。結(jié)果表明鞣花酸、安石榴苷分別在0.856～3.424μg、4.32～17.28μg線性關(guān)系良好。

2.2.6 精密度試驗 取對照品溶液，按色譜條件重復進樣5次，進樣量為10μL，計算得RSD分別為0.99%、1.19%，表明儀器精密度良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗 取石榴皮生品樣品，按照供試品溶液的制備方法制得供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24h進樣，每次進樣量10μL，計算得RSD分別為1.34%、1.91%，表明樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8 重復性試驗 取石榴皮生品0.2g，精密稱取5份，按照供試品溶液的制備方法制備，分別按色譜條件進樣，進樣量為10μL，計算得RSD分別為1.00%、1.05%。表明本方法的重復性良好。

2.2.9 加樣回收率試驗 取石榴皮生品樣品5份，各20mg，精密稱定，分別精密加入混合對照品鞣花酸0.963mg,安石榴苷7.960mg，按“2.2.2”項下供試品溶液的制備方法制備，按含量測定方法測定含量，計算回收率，結(jié)果見表3、表4。

2.2.10 樣品含量測定 取3批石榴皮不同炮制品樣品，分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件進樣10μL測定，計算含量，結(jié)果見表1。由表1可見，石榴皮不同炮制品中鞣質(zhì)和安石榴苷的含量顯著不同，炒黃品中鞣質(zhì)、鞣花酸和安石榴苷的總百分含量較炒炭品高，說明加熱炮制對石榴皮中鞣質(zhì)類成分含量有顯著影響。

3 結(jié)論

中國藥典規(guī)定石榴皮中所含鞣質(zhì)不得低于10.0%[7]。本試驗所得：石榴皮3種炮制規(guī)格飲片中鞣質(zhì)的含量都達到藥典要求，且炒炭品中鞣質(zhì)含量降低，鞣花酸含量升高。這與文獻[8-9]報道的在加熱炮制過程中，石榴皮可水解鞣質(zhì)的苷鍵或酯鍵斷裂，分解產(chǎn)生游離的鞣花酸等成分的試驗結(jié)果相吻合。中藥炒炭主要發(fā)揮止血的作用，傳統(tǒng)認為：鞣質(zhì)是“炭藥止血”的物質(zhì)基礎(chǔ)，鞣質(zhì)增加則止血作用增強；有研究[10]表明鞣花酸具有凝血作用，是一種有效的凝血劑，且小分子的鞣花酸更有利于人體吸收。石榴皮炒炭后止血作用增強是鞣質(zhì)和鞣花酸等成分共同作用的結(jié)果，但石榴皮炭炮制加工到何種程度時止血作用最強還有待研究。

表3 鞣花酸加樣回收率 (mg)

表4 安石榴苷加樣回收率 (mg)

大量現(xiàn)代藥理研究表明石榴皮鞣質(zhì)類成分可有效預防和治療心腦血管疾病，在抗菌、抗病毒，治療腫瘤、胃腸道疾病，調(diào)節(jié)免疫等方面具有顯著效果[11]。本次實驗結(jié)果顯示，以總鞣質(zhì)、安石榴苷和鞣花酸為指標，石榴皮炒黃品中鞣質(zhì)類成分含量較炒炭品高。而兩種炮制品在主治、功效上有何差異，還需進一步實驗研究。本實驗建立同時測定石榴皮中安石榴苷和鞣花酸含量的高效液相色譜方法，靈敏度高，分離度好，測定迅速，結(jié)果準確，為石榴皮飲片的炮制和質(zhì)量控制提供了實驗依據(jù)。

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(責任編輯：余 婷)

Study on the Variation in Content of Tannins 、Ellagic acid and Punicalagin in Granatum Before and After Processing

Cui Yuanyuan,Hu Changjiang,Chen Zhimin1,Zhang Mei1,Xiong Rui2,Wen Jianxia1*

(Chengdu University of Chinese Medicine,Chengdu 611137,China)

Objective:to compare the content changes of Granatum before and after processing of the tannins,ellagic acids,punicalagins,intends to clarify the influence of processing on Granatum in tannins chemical composition. Methods:UV method for determining the content of tannins,HPLC method for determining the content of ellagic acid,punicalagins,to compare the raw materials for Granatum,the fried yellow goods and the fried carbon products. Results:The average content of tannins in different batches of Granatum before and after processing are as foiiows:Raw product 15.03%,Fried yellow product 17.54%,Fried carbon products 11.07%;The average content of ellagic acids:Raw product 4.33%,Fried yellow product 4.20%,Fried carbon products 4.48%;The average content of punicalagins:Raw product 38.76%,Fried yellow product 50.23%,Fried carbon products 16.45%。Conclusion:there is a significant effect of processing on the content of tannins compounds in Granatum.

Granatum;Processing;Tannin;Ellagic Acid;Punicalagin

2015-05-30

崔園園(1991-)，成都中醫(yī)藥大學碩士研究生，研究方向為中藥炮制與制劑。

胡昌江(1952-)，成都中醫(yī)藥大學教授、博士生導師，研究方向為中藥炮制學。E-mail：hhccjj@hotmail.com

R284

A

1673-2197(2015)21-0038-03

10.11954/ytctyy.201521016