★ 許舒顏 (深圳市寶安區(qū)石巖醫(yī)院 廣東 深圳518108)

白術(shù)主產(chǎn)浙江、安徽等地，是著名的“浙八味”之一，其中浙江磐安、新昌、嶸州被認(rèn)為是白術(shù)藥材的道地產(chǎn)區(qū)［1］。由于我國白術(shù)產(chǎn)地較多，各產(chǎn)地環(huán)境、氣候、地貌等均有差異，因此所產(chǎn)白術(shù)藥材功效及成分含量差異較大［2］，本研究采用高效液相色譜方法對不同地區(qū)白術(shù)飲片中白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的含量進(jìn)行了測定，通方法學(xué)考察驗(yàn)證，該方法精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、回收率試驗(yàn)良好，方法可行，現(xiàn)整理報(bào)道如下:

1 材料與儀器

1.1 儀器 島津-LC20AT高效液相色譜儀，紫外檢測器，色譜工作站(日本島金有限公司);TU-1810紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司);AB-135型萬分之一電子分析天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司);KH 300P型超聲波清洗器(昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司);SHZ-3循環(huán)水多用真空泵(上海市滬西分析儀器上有限公司);FZ102微型植物試樣粉碎機(jī)(北京市永光明醫(yī)療儀器廠)。

1.2 試劑 甲醇(分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)，所用試劑均為分析純，水為超純水(浙江杭州娃哈哈集團(tuán))，甲醇(色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)。

1.3 試藥與藥材 白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品檢定所，批號為0906045);白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ(中國藥品生物制品檢定所，批號為0804061);白術(shù)產(chǎn)地見表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 以十八烷基鍵合硅膠為填充劑;流動(dòng)相甲醇:水(45∶55)，檢測波長為335nm，進(jìn)樣量10μL，流速1.0mL/min。

表1 白術(shù)藥材來源

2.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備 取白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ對照品適量，精密稱取1mg，置100mL容量瓶中，加適量甲醇溶解，稀釋至刻度，搖勻，制成每1mL含0.01mg的溶液，即得標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.3 樣品溶液的制備 取藥白術(shù)飲片，粉碎，過120目篩或者四號篩。精密稱取白術(shù)樣品粉末1.0g，加入帶有塞得錐形瓶中，精密稱定100mL甲醇溶液，加入至錐形瓶中，稱定重量，超聲30min，取出，放涼，在稱定重量，加入甲醇不足減少的重量，混勻，過濾，量取濾液10mL，加入50mL棕色容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，混勻，即得所需樣品溶液［3］。

2.4 線性關(guān)系考察 分別精密量取上述配好的0.01mg/ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液2，5，10，15，20μL注入高效液相色譜儀，記錄峰面積數(shù)值，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線得到線性回歸方程白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ:Y=2 221.2X+7 843.1，r=0.999 6;白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ:Y=1 844.1X+5 865.1，r=0.999 7，對照品在2.0～20.0μL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，樣品濃度與峰面積成直線關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密量取2.2項(xiàng)下配制的標(biāo)準(zhǔn)品溶液連續(xù)重復(fù)測定6次，計(jì)算平均值及RSD值。結(jié)果顯示標(biāo)準(zhǔn)品和樣品RSD值分別為0.32%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密量取連續(xù)進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)品溶液，進(jìn)樣量為10μL，每隔一定時(shí)間測定一次峰面積，測定24h，根據(jù)測得對照品峰面積，計(jì)算白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ含量的平均值及RSD值。試驗(yàn)結(jié)果顯示，在24h內(nèi)RSD值為1.12%，1.23%，表明樣品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取標(biāo)準(zhǔn)品溶液一份，連續(xù)進(jìn)針，進(jìn)樣量為10μL，精密稱取2.3項(xiàng)下白術(shù)樣品溶液6份，分別測定峰面積值。計(jì)算白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ含量平均值、RSD值，重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果顯示，白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ含量的RSD值為1.18%，1.24%，表明該方法重復(fù)性較好。

表2 白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ回收率試驗(yàn)測定結(jié)果

表3 白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ回收率試驗(yàn)測定結(jié)果

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取同一批次白術(shù)藥材粉末1g，按比例精密加入2.2項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)品，制備低、中、高劑量組，每組平行3份，按上述的方法處理后，依次測定，計(jì)算回收率、RSD值。加樣回收率考察結(jié)果顯示，所有供試品回收率均介于95%～105%之間，樣品的平均回收率為99.98%，99.63%;RSD值為1.03%，1.25%，均小于3%，說明本法準(zhǔn)確性較好，方法可行。結(jié)果見表2-3。

2.9 含量測定結(jié)果 取9批不同產(chǎn)地的白術(shù)樣品按照上述方法提取的樣品溶液，按照2.3項(xiàng)下的方法處理，制備供試品溶液，測定相應(yīng)樣品的峰面積，根據(jù)對照品與樣品的峰面積計(jì)算白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ含量，結(jié)果見表4。

表4 9個(gè)不同產(chǎn)地白術(shù)含量測定結(jié)果

3 討論

本研究對測定波長進(jìn)行了選擇，取白術(shù)內(nèi)酯對照品、供試品及空白溶液，在200～400nm波長范圍進(jìn)行光譜掃描。供試品和對照品在335nm處有最大吸收，而空白溶液無吸收。測得數(shù)據(jù)與查詢相關(guān)報(bào)道文獻(xiàn)接近。白術(shù)提取液最大吸收波長與對照品最大吸收波長一樣，故將335nm作為測定波長。相關(guān)研究報(bào)道，白術(shù)，在制藥、香料、化妝品、保健食品［24］等許多領(lǐng)域廣闊的市場前景，可以說是中藥之瑰寶［4］。相信隨著對白術(shù)進(jìn)一步的研究，白術(shù)一定會(huì)在醫(yī)藥領(lǐng)域、化妝品領(lǐng)域、食品等相關(guān)領(lǐng)域發(fā)揮越來越大的作用。綜上所述，不同地區(qū)白術(shù)飲片中白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的含量有較大的差異，通過方法學(xué)考察驗(yàn)證，該方法精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、回收率試驗(yàn)良好，方法可行。

［1］葛建，樓紀(jì)東，林芳，等.反相高效液相色譜法同時(shí)測定參苓白術(shù)顆粒中白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的含量［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥.2009，12(6):152-154.

［2］段啟，李彩萍，趙珍東，等.高效液相色譜法測定清炒白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ［J］.中南藥學(xué).2009，14(5):614-616.

［3］宿廷敏，王敏娟，阮時(shí)寶.白術(shù)的化學(xué)成分及藥理作用研究概述［J］.貴陽學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版).2008，4(2):135-137.

［4］段啟，許冬謹(jǐn)，謝晨.HPLC法測定白術(shù)不同炮制品中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ［J］.中草藥.2009，21(9):886-888.