王維麗，段小花，張 超，陳 普，陳清華，鄭 進(jìn)

(云南中醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650000)

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雅解沙把對(duì)小鼠同種被動(dòng)皮膚過(guò)敏的影響*

王維麗，段小花，張 超，陳 普，陳清華，鄭 進(jìn)△

(云南中醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650000)

目的 觀察雅解沙把對(duì)卵蛋白(OVA)誘導(dǎo)的小鼠同種被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)(PCA)及血液免疫球蛋白E(IgE)的影響。方法 Balb/c小鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、撲爾敏組、雅解沙把低劑量組和雅解沙把高劑量組。給予相應(yīng)藥物灌胃，采用OVA皮下注射方式致敏，制備大鼠OVA 抗體血清，并分別注射各對(duì)應(yīng)組的抗體血清，進(jìn)行被動(dòng)致敏48 h后，各組小鼠尾靜脈注射對(duì)應(yīng)組的0.5%伊文思蘭溶液，觀察各組小鼠耳廓藍(lán)染情況，并測(cè)定吸光度(OD值)。末次致敏后第分離血清，采用武漢華美IgE酶聯(lián)免疫試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果 與正常組比較，模型組的OD值明顯升高(P<0.05)；與模型組比較，雅解沙把高劑量組的OD值明顯降低(P<0.05)。與模型組比較，撲爾敏組、雅解沙把高劑量組小鼠血清的IgE含量顯著性的降低，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，雅解沙把低劑量組有降低小鼠血清IgE含量的作用趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 雅解沙把具有抗過(guò)敏作用，機(jī)制可能與抑制Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)有關(guān)。

雅解沙把；被動(dòng)皮膚過(guò)敏；IgE

傣醫(yī)學(xué)歷史悠久，有自己的醫(yī)學(xué)理論體系，是我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的重要組成部分。傣族人民在長(zhǎng)期的實(shí)踐中，形成了“四塔”(地、水、火、風(fēng))“五蘊(yùn)”(色、識(shí)、受、想、行)為核心的醫(yī)學(xué)理論。四塔構(gòu)成世界萬(wàn)物和人體最基本的物質(zhì)元素，五蘊(yùn)是人體各種物質(zhì)和精神要素的總和，只有四塔五蘊(yùn)平衡才能保持健康。而“雅解”也是傣醫(yī)中重要、特色的理論，主張未病先治，先解后治。傣藥“雅解沙把”(百解膠囊)在臨床有良好治療效果，在傣族地區(qū)廣泛使用，主要有清熱解毒，保肝護(hù)腎，解酒，延年益壽等作用。雅解沙把在治療食物，藥物引起的不適及濕疹等現(xiàn)象提示其可能有抗過(guò)敏的作用[1-3]。

PCA是一種常用的測(cè)試藥物過(guò)敏的經(jīng)典方法，具有方法簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便、高靈敏的特點(diǎn)[4]。在本試驗(yàn)中將用PCA建立Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)模型，并測(cè)定IgE的含量，進(jìn)一步明確雅解沙把的作用機(jī)制，為傣醫(yī)理論更好地指導(dǎo)臨床用藥打下基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物 Balb/c小鼠，雌雄各半，體重18～22 g，(昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科，批準(zhǔn)文號(hào)：SCXK 滇P0005-0008)

1.2 藥品與試劑 藥物：卵蛋白(Sigm，批號(hào)：9006-s-9-1)，撲爾敏(昆明振華制藥廠，批號(hào)：20130507)，雅解沙把(百解膠囊)，滇藥制字(Z)20122252，云南省西雙版納州傣醫(yī)院院內(nèi)制劑，按人和動(dòng)物的體表面積計(jì)算法，計(jì)算得出“雅解沙把”小鼠口服給藥的等效量為0.39 g生藥/kg，再參考前期完成的“雅解沙把”抗炎、解酒等實(shí)驗(yàn)的有效(P<0.05)劑量為9倍臨床等效劑量，故本實(shí)驗(yàn)選擇3.51 g生藥/kg，0.39 g生藥/kg為高、低劑量。

試劑：伊文思藍(lán)(中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上海試劑公司，批號(hào)：20120714)、磷酸(重慶川東有限公司試劑廠，批號(hào)：20051017)、丙酮(上海申博化工有限公司，批號(hào)：0607101)、氫氧化鉀(天津市化學(xué)試劑三廠，批號(hào)：20120925)、氫氧化鈉(成都化學(xué)試劑廠，批號(hào)：050918)、氯化鋁(廣東臺(tái)山化工廠生產(chǎn)，批號(hào)：100604)。

1.3 藥物制備 雅解沙把實(shí)驗(yàn)用藥的制備 雅解沙把生藥粉末250 g，用無(wú)紡布袋分裝后分3次包煎，將3次濾液合并，濃縮成稠浸膏，置冰箱中冷藏保存?zhèn)溆?，臨用前按需要現(xiàn)配至所需濃度。

氫氧化鋁凝膠的制備 氫氧化鋁凝膠的配制：稱取無(wú)水Al(Cl)31.7 g緩慢加入25 mL蒸餾水中，不斷攪拌使其溶解，在不斷攪拌下緩慢滴加10 mol/L NaOH至PH8-9，終濃度約4%。

致敏液的制備 取OVA(用生理鹽水配成20 mg/mL)，再與氫氧化鋁凝膠以1：1混合成相應(yīng)組別的致敏乳液。

激發(fā)液的制備 取20 mg/mL OVA與1%伊文思蘭溶液以1：1混合成激發(fā)溶液。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 抗體的制備 致敏：取Balb/c小鼠100只，分為5組，分別為正常組、模型組、撲爾敏組、雅解沙把低劑量組和雅解沙把高劑量組。除正常組外每組小鼠皮下注射OVA致敏乳液，0.3 mL/只，隔天1次，共注射3次，同時(shí)連續(xù)以0.1 mL/10 g灌胃給以蒸餾水、撲爾敏、雅解沙把低劑量和雅解沙把高劑量7天。末次致敏后第14天小鼠摘眼球取血，3000轉(zhuǎn)/分離心10 min，分離血清，同組小鼠血清混合，分裝于EP管中-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 模型組的制備 取Balb/c小鼠40只，分為4組，分別為正常組、10 μL組、20 μL組和30 μL組。以0.3%戊巴比妥鈉麻醉，兩只耳廓皮下分別注射對(duì)應(yīng)組所需的抗體血清，進(jìn)行被動(dòng)致敏。被動(dòng)致敏48 h后，各組小鼠尾靜脈注射對(duì)應(yīng)組的0.5%伊文思蘭溶液：注射量均為0.3 mL/只進(jìn)行激發(fā)。激發(fā)后30 min脫頸處死小鼠，剪下雙耳，每對(duì)耳朵用0.75 mL 1mol/L KOH溶液浸泡，在37℃恒溫過(guò)夜消化，次日加3.5 mL 0.6 mol/L 磷酸丙酮(5：13)混合液，振搖，3500 r/min，離心15 min，上清液在630 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度(OD值)。

2.3 被動(dòng)致敏與激發(fā)[5]另取Balb/c小鼠50只，雌雄各半，如上分為5組，以0.3%戊巴比妥鈉麻醉，兩只耳廓皮下分別注射各對(duì)應(yīng)組的抗血清20 μL，進(jìn)行被動(dòng)致敏。被動(dòng)致敏48小時(shí)后，各組小鼠尾靜脈注射對(duì)應(yīng)組的0.5%伊文思蘭溶液：注射量均為0.3 mL/只進(jìn)行激發(fā)。激發(fā)后30 min脫頸處死小鼠，剪下雙耳，每對(duì)耳朵用0.75 mL 1mol/L KOH溶液浸泡，在37℃恒溫過(guò)夜消化，次日加3.5 mL0.6 mol/L 磷酸丙酮(5：13)混合液，振搖，3500 r/min，離心15 min，上清液在630 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度(OD值)。

2.4 小鼠血清IgE檢測(cè) 取Balb/c小鼠100只，如上分為5組。除正常組外每組小鼠皮下注射OVA致敏乳液，0.3 mL/只，隔天一次，共注射3次，同時(shí)連續(xù)以0.1 mL/10 g灌胃給以蒸餾水、撲爾敏、雅解沙把低劑量和雅解沙把高劑量7天。末次致敏后第14天小鼠摘眼球取血，3000 r/min分離心10 min，分離血清，采用武漢華美IgE酶聯(lián)免疫試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。

3 結(jié)果

3.1 模型的制備 20 μL和30 μL抗體血清耳廓皮下注射均可制備小鼠同種被動(dòng)皮膚過(guò)敏模型(P<0.05，0.01)，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 小鼠同種被動(dòng)皮膚過(guò)敏模型的制備

注：與正常組比較：△P<0.05，△△P<0.01

與正常組相比，模型2、3均具有顯著性意義，考慮到30μl抗體血清耳廓皮下注射制備的小鼠同種被動(dòng)皮膚過(guò)敏模型太嚴(yán)重，藥物難以糾正，所以之后實(shí)驗(yàn)均選用20μl抗體血清耳廓皮下注射制備的小鼠同種被動(dòng)皮膚過(guò)敏模型。

3.2 雅解沙把對(duì)小鼠同種被動(dòng)皮膚過(guò)敏的影響 見(jiàn)表2。

表2 雅解沙把對(duì)小鼠同種被動(dòng)皮膚過(guò)敏的影響

注：與正常組比較：△P<0.05；與模型組比較：*P<0.05；與正常組比較，模型組的OD值明顯升高(P<0.05)；與模型組比較，雅解沙把高劑量組的OD值明顯降低(P<0.05)。

表3 雅解沙把對(duì)卵蛋白(OVA)誘導(dǎo)的小鼠同種被動(dòng)皮膚過(guò)敏IgE含量的影響

注：與正常組比較：△P<0.05，與模型組比較：*P<0.05

由表3可見(jiàn)與正常組比較，卵蛋白誘導(dǎo)的小鼠同種被動(dòng)皮膚過(guò)敏模型的血清的IgE含量明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示模型組造模成功。與模型組比較，撲爾敏組、雅解沙把高劑量組小鼠血清的IgE含量顯著性的降低，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，雅解沙把低劑量組有降低小鼠血清IgE含量的作用趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

由上述可以得出：與模型組比較，雅解沙把高劑量組能顯著性降低小鼠血清IgE的含量，提示其具有一定的抗過(guò)敏的作用，尤其對(duì)于以IgE為主的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)具有較好的治療作用。

圖1 A為正常組小鼠，B為模型組小鼠，C為撲爾敏組小鼠，D為雅解沙把低劑量組，E為雅解沙把高劑量組

4 討論

傣醫(yī)藥是我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)藥重要的組成之一，聚集了歷代傣族人民智慧的結(jié)晶，形成了獨(dú)特的理論體系。傣藥“雅解沙把”(百解膠囊)以“先解后治”理論為指導(dǎo)，在臨床治療上有良好效果，其中包含治療過(guò)敏反應(yīng)的作用，但是作用機(jī)制不明確，缺乏理論依據(jù)，本實(shí)驗(yàn)以I型變態(tài)反應(yīng)證實(shí)其作用機(jī)制。

I型變態(tài)反應(yīng)主要由IgE介導(dǎo)，測(cè)IgE的含量在臨床診斷I型變態(tài)反應(yīng)有重要意義。在正常情況下IgE在機(jī)體含量較低，當(dāng)受到抗原刺激之后，IgE顯著增多，與肥大細(xì)胞表面的特異性受體結(jié)合，形成復(fù)合體結(jié)構(gòu)，機(jī)體處于致敏狀態(tài)。當(dāng)機(jī)體再次受到同種或異種抗原的刺激，IgE的構(gòu)型發(fā)生改變，肥大細(xì)胞脫落，同時(shí)釋放大量組胺等過(guò)敏介質(zhì)，使血管通透性升高，此時(shí)在血液中的伊文思藍(lán)即可在此部位從血漿中滲出，形成藍(lán)斑[6-9]，由于抗原越多滲出依文思藍(lán)越多(圖1)，因此可以對(duì)過(guò)敏進(jìn)行定量分析，對(duì)該反應(yīng)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

實(shí)驗(yàn)中考慮到30 μL抗體血清耳廓皮下注射制備的小鼠同種被動(dòng)皮膚過(guò)敏模型太嚴(yán)重，藥物難以糾正，所以之后實(shí)驗(yàn)均選用20 μL抗體血清耳廓皮下注射制備的小鼠同種被動(dòng)皮膚過(guò)敏模型。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：雅解沙把高劑量組的OD值明顯降低，并能顯著的性降低小鼠血清IgE的含量，提示其具有一定的抗過(guò)敏的作用，尤其對(duì)于以IgE為主的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)具有較好的治療作用，但雅解沙把在抑制過(guò)敏反應(yīng)中是否抑制肥大細(xì)胞的脫落還需要進(jìn)一步研究。

[1]曾君，曾湘榮.傣藥雅解沙把(百解膠囊)的研究概況[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2009，18(21)：23-24.

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Effect ofYajianshabaon Passive Cutaneous Allergy of Mice with the Same Kind

WANG Wei-li, DUAN Xiao-hua, ZGHANG Chao, CHEN Pu, CHEN Qing-hua, ZHENG Jin

(YunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine,Kunming650500,Yunnan)

Objective: To observe the passive cutaneous anaphylaxis (PCA) and blood immunoglobulin E (IgE) effect ofYajianshabaon ovalbumin (OVA) induced mice of the same kind. Methods: Balb/c mice were randomly divided into a normal group, a model group, a chlorpheniramine group andYajianshabalow and high dose groups. The mice were administered with corresponding drugs. OVA subcutaneous injection was given to induce to allergy. OVA antibody serum of the rats was prepared. Each corresponding group was injected with serum antibodies to cause 48 hour passive allergy. The mice tails of each group were given intravenous injection of corresponding 0.5 % Evans blue solution to observe the mouse ear Aizen situation and determine the absorbance (OD). After the last allergy, serum was separated and IgE ELISA kits made by Cusabio Biotech Co., Ltd were used for detection. Results: Compared with the normal group, OD values of the model group significantly increased (P<0.05). Compared with the model group, the OD value ofYajianshabahigh-dose group significantly reduced (P<0.05). Compared with the model group, the IgE serum contents of the chlorpheniramine group and theYajianshabahigh-dose group significantly decreased, and the difference was statistically significant (P<0.05). TheYajianshabalow-dose group showed a trend to lower mouse serum IgE levels, but the difference was not statistically significant (P>0.05). Conclusion:Yajianshabahas an anti-allergic effect and its mechanism has something to do with abnormal reaction of inhibition type I .

Key words:Yajianshaba, passive skin allergy, IgE

(1)國(guó)家自然科學(xué)基金 傣醫(yī)解藥“雅解沙把”解“食物毒”、“藥物毒”的作用機(jī)制研究(NO：81160555)；(2)云南省衛(wèi)生廳民族醫(yī)藥文獻(xiàn)整理及中藥民族藥院內(nèi)制劑研發(fā)項(xiàng)目“基于文獻(xiàn)和實(shí)驗(yàn)的傣醫(yī)雅解理論整理研究”(KY14)< class="content">作者簡(jiǎn)介：王維麗(1991-)，女，云南大理人，研究生，研究方向：中藥藥理與應(yīng)用。

王維麗(1991-)，女，云南大理人，研究生，研究方向：中藥藥理與應(yīng)用。

△通信作者：鄭進(jìn)，E-mail：zhengjinynkm@126.com

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1007-2349(2015)09-0061-03

2015-06-26)