倪桂蓮， 崔 融， 陳干明， 吳仲敏

(臨海市第一人民醫(yī)院 1神經(jīng)內(nèi)科， 2內(nèi)分泌科，浙江 臨海 317000； 3臺(tái)州學(xué)院醫(yī)學(xué)院人體解剖學(xué)教研室，浙江 臺(tái)州 318000)

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糖尿病大鼠背根神經(jīng)節(jié)JNK的表達(dá)水平對足部皮膚組織學(xué)變化的影響*

倪桂蓮1， 崔 融1， 陳干明2， 吳仲敏3△

(臨海市第一人民醫(yī)院1神經(jīng)內(nèi)科，2內(nèi)分泌科，浙江 臨海 317000；3臺(tái)州學(xué)院醫(yī)學(xué)院人體解剖學(xué)教研室，浙江 臺(tái)州 318000)

目的： 觀察糖尿病(DM)大鼠皮膚組織學(xué)改變，探討背根神經(jīng)節(jié)(DRG)內(nèi)c-Jun氨基端激酶(JNK)蛋白在其中的可能作用機(jī)制。方法: 雄性SD大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素制備DM模型，分別取正常對照(control)組、DM 2周(DM2)組、DM 4周(DM4)組和DM 8周(DM8)組大鼠足底皮膚標(biāo)本進(jìn)行PGP 9.5免疫組化染色和HE染色，觀察皮膚PGP 9.5免疫陽性神經(jīng)末梢和皮膚組織結(jié)構(gòu)變化；同時(shí)采用Western blotting法分別檢測上述各組大鼠足底皮膚組織內(nèi)PGP 9.5蛋白和脊髓腰5～6(L5，6)、骶1(S1)節(jié)段DRG內(nèi)JNK和p-JNK蛋白的表達(dá)。結(jié)果: 大鼠足底皮膚PGP 9.5免疫陽性神經(jīng)末梢主要分布于表皮基底層和真皮乳頭層，與正常對照組比較，DM4組大鼠表皮陽性神經(jīng)末梢密度減少，分布稀疏，DM8組大鼠表皮陽性神經(jīng)末梢分布明顯減少，神經(jīng)直徑變細(xì)，長度變短，走形扭曲；組織學(xué)觀察可見，DM4組大鼠表皮組織變薄，表皮細(xì)胞層次減少，細(xì)胞分布及排列不均勻，DM8組大鼠表皮細(xì)胞層次明顯減少，細(xì)胞腫脹模糊，細(xì)胞間隙增大，部分表皮缺乏復(fù)層排列， 真皮層膠原纖維萎縮、變性，皮下脂肪明顯減少。蛋白印跡檢測發(fā)現(xiàn)皮膚組織內(nèi)PGP 9.5蛋白的表達(dá)隨病程呈漸進(jìn)性減弱；同時(shí)L5，6-DRG和S1-DRG內(nèi)p-JNK蛋白的水平呈現(xiàn)漸進(jìn)性增強(qiáng)趨勢。DM大鼠皮膚PGP 9.5免疫陽性神經(jīng)末梢吸光度值與L5，6-DRG和S1-DRG內(nèi)的p-JNK蛋白灰度值之間呈負(fù)相關(guān)(P<0.01)；與表皮厚度值之間呈顯著正相關(guān)。結(jié)論: DM大鼠皮膚組織和皮膚神經(jīng)均存在明顯形態(tài)結(jié)構(gòu)改變，同時(shí)存在L5，6-DRG和S1-DRG內(nèi)p-JNK蛋白的漸進(jìn)性高表達(dá)，DM大鼠皮膚PGP 9.5免疫陽性神經(jīng)末梢密度變化與L5，6-DRG和S1-DRG內(nèi)p-JNK蛋白水平的變化之間呈負(fù)相關(guān)；與表皮厚度的變化呈顯著正相關(guān)。皮膚神經(jīng)形態(tài)結(jié)構(gòu)的改變可能與背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞JNK/SAPK通路活化有關(guān)，阻斷或抑制JNK/SAPK通路可以起到延緩糖尿病周圍神經(jīng)病變，減輕皮膚組織病變發(fā)生的作用。

背根神經(jīng)節(jié)； c-Jun氨基端激酶； 糖尿?。?皮膚組織； 皮膚神經(jīng)

糖尿病(diabetes mellitus，DM)的并發(fā)癥是引起糖尿病患者致死、致殘的主要原因，在各種糖尿病誘發(fā)的并發(fā)癥中，末梢神經(jīng)病變和皮膚病變的發(fā)病率非常高。據(jù)有關(guān)資料顯示，約50%的糖尿病患者出現(xiàn)末梢神經(jīng)病變[1-2]。而糖尿病患者罹患皮膚病的比例達(dá)30%[3]，末梢神經(jīng)病變是肢體保護(hù)性的機(jī)械性感覺喪失、創(chuàng)傷性潰瘍損傷并因此截肢的主要原因。皮膚病變可加重糖尿病病情，甚至導(dǎo)致十分嚴(yán)重的后果[4]。因此，研究糖尿病早期皮膚組織和神經(jīng)的病變特點(diǎn)，并予以早期治療干預(yù)，對于防治糖尿病并發(fā)癥和提高患者生活質(zhì)量有著重要的意義。

本研究采用鏈脲佐菌素腹腔注射制備糖尿病大鼠模型，采用PGP 9.5免疫組化染色和HE染色方法觀察實(shí)驗(yàn)大鼠足底皮膚神經(jīng)和皮膚組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化，并通過檢測大鼠足底皮膚組織內(nèi)PGP 9.5蛋白及對應(yīng)的腰5、6(lumbar 5,6,L5,6)背根神經(jīng)節(jié)(dorsal root ganglia, DRG)和骶1(sacral 1,S1)-DRG內(nèi)c-Jun氨基端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)和p-JNK蛋白的表達(dá)變化，探討背根神經(jīng)節(jié)JNK活化對糖尿病大鼠皮膚組織和皮膚神經(jīng)形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響。

材 料 和 方 法

1 材料

鏈脲佐菌素(Sigma)，臨用前用0.1 mol/L檸檬酸鈉緩沖液，pH 4.5，4 ℃配制成2%溶液；兔抗PGP 9.5抗體(Santa Cruz)；兔抗JNK和p-JNK抗體(Sigma)；SP免疫組化染色試劑盒(福州邁新公司)。

2 方法

2.1 糖尿病大鼠模型的建立及分組 雄性SD大鼠60只，體重(200±20)g，購自浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，取尾靜脈血0.1 mL，測定隨機(jī)血糖后，大鼠按隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為正常對照組(control組，30只)和DM模型組(DM組，30只)。大鼠造模前禁食至少12 h，DM組大鼠按55 mg/kg一次性腹腔注射鏈脲佐菌素，control組則注射等體積檸檬酸鈉緩沖液，1周后尾靜脈采血測定血糖，同時(shí)監(jiān)測體重，若誘導(dǎo)前血糖水平<6 mmol/L，誘導(dǎo)后血糖水平>11.2 mmol/L，隨機(jī)抽樣的胰腺組織學(xué)觀察證實(shí)胰島細(xì)胞被破壞，即可視為糖尿病模型誘導(dǎo)成功。再將造模成功后的大鼠按飼養(yǎng)時(shí)間隨機(jī)分為2周組(DM2)、4周組(DM4)和8周組(DM8)，每組10只。實(shí)驗(yàn)期間全部大鼠予普通飼料喂養(yǎng)，自由進(jìn)食和水。

2.2 足部皮膚組織HE染色 在造模成功后的第2、4、8周，分別隨機(jī)取control組和DM組大鼠各5只經(jīng)腹腔注射1%戊巴比妥鈉60 mg/kg麻醉，4%多聚甲醛灌注固定后，隨機(jī)選取足底皮膚全層組織，按常規(guī)方法作HE染色，觀察皮膚全層厚度、表皮細(xì)胞層次、排列和結(jié)構(gòu)的變化。采用C5 型目鏡測微尺(上海第三光學(xué)儀器廠)測量表皮厚度，每個(gè)活檢標(biāo)本有5張切片參加測量，每張切片在3個(gè)顯微鏡視野下進(jìn)行觀察，最后取其平均值，表皮厚度以表皮-真皮交界處與顆粒細(xì)胞層最外層之間的垂直距離表示[5]。

2.3 足部皮膚組織內(nèi)PGP 9.5免疫組化染色 上述各組大鼠多聚甲醛灌注固定后，隨機(jī)選取1 cm×1 cm左右的足底全層皮膚做連續(xù)冰凍切片，切片角度為垂直皮膚表面，常規(guī)方法進(jìn)行PGP 9.5免疫組化染色。切片分為2套，其中1套在呈色后進(jìn)行蘇木素復(fù)染，另1套不復(fù)染。所有切片經(jīng)自然干燥后常規(guī)脫水，透明，封片。Nikon顯微鏡下觀察并攝片。陰性對照切片用PBS液替代I抗，其余實(shí)驗(yàn)步驟不變。取無復(fù)染的圖片做顯微圖像分析(采用OPTIMAS 6.5 圖像分析軟件)，得出各組大鼠足底皮膚內(nèi)PGP 9.5陽性神經(jīng)末梢的圖像吸光度(A)值。

2.4 足部皮膚組織內(nèi)PGP 9.5蛋白和背根神經(jīng)節(jié)內(nèi)JNK和p-JNK蛋白的檢測 在造模成功后的第2、4、8周，分別隨機(jī)取control組和DM組大鼠各5只經(jīng)腹腔注射1%戊巴比妥鈉60 mg/kg深麻醉后，隨機(jī)選取足底皮膚全層組織以及L5，6-DRG、S1-DRG，冰浴中分別抽提總蛋白，BCA法測定蛋白濃度。分別取20 μg蛋白進(jìn)行10% SDS-PAGE并轉(zhuǎn)膜。5%脫脂奶粉封閉1 h后，加入目標(biāo)蛋白I抗(1∶1 000)或β-actin I抗(1∶500)，4 ℃反應(yīng)過夜。次日洗膜，加入1∶1 000辣根過氧化物酶標(biāo)記的II抗，室溫孵育1 h，洗膜后加ECL顯色劑，X片顯影，所得結(jié)果以β-actin為內(nèi)參照，用Quantity One 軟件對反應(yīng)條帶進(jìn)行半定量分析，記錄所測的灰度值，并以和同組β-actin灰度值的比值表示目的蛋白的相對表達(dá)量。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

各組數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，統(tǒng)計(jì)處理用SPSS 17.0軟件進(jìn)行分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差(one-way ANOVA)分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 正常對照組、糖尿病模型組大鼠體重、血糖變化

造模前2組大鼠體重?zé)o明顯差異，造模后大鼠每日飲水、飲食以及尿量顯著增多，體重下降，DM組大鼠體重增長緩慢，與control組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見表1。造模后糖尿病大鼠血糖明顯升高，與control組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見表2。

表1 大鼠體重的變化

**P<0.01vscontrol group.

表2 大鼠血糖的變化

**P<0.01vscontrol group.

2 足部皮膚PGP 9.5免疫陽性神經(jīng)末梢形態(tài)分布變化

如圖1所示，大鼠足底皮膚PGP 9.5免疫陽性神經(jīng)末梢主要分布于表皮基底層和真皮乳頭層，呈樹枝狀或念珠狀分布，大多成束走行，長短不一，有的呈結(jié)節(jié)狀膨大。PGP 9.5免疫組化圖像A值測定結(jié)果表明，DM組PGP 9.5免疫陽性神經(jīng)末梢分布密度隨病程推移呈現(xiàn)進(jìn)行性下降趨勢，與同時(shí)期C組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)； 各時(shí)點(diǎn)control組的PGP 9.5免疫陽性神經(jīng)末梢分布密度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，各時(shí)點(diǎn)DM組對應(yīng)值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，進(jìn)一步做LSD兩兩比較發(fā)現(xiàn)，DM8組明顯低于DM2組(P<0.01)和DM4組(P<0.05)，見表3。

Figure 1.Distribution of PGP 9.5 immunoreactive nerve terminals in the plantar skin of rats (HE counterstaining, ×400).

表3 大鼠足底皮膚PGP 9.5免疫組化圖像吸光度(A)值的變化

**P<0.01vscontrol group;△△P<0.01vsDM2 group;#P<0.05vsDM4 group.

3 足部皮膚組織內(nèi)PGP 9.5蛋白表達(dá)變化

如圖2所示，與同時(shí)點(diǎn)control組比較，DM各組大鼠足底皮膚組織內(nèi)PGP 9.5蛋白表達(dá)呈進(jìn)行性減弱，PGP 9.5蛋白表達(dá)的變化趨勢與足底皮膚PGP 9.5免疫陽性神經(jīng)末梢密度變化趨勢相吻合。

Figure 2.The changes of PGP 9.5 expression in the plantar skin of the rats. Mean±SD. n=5. ** P<0.01 vs control group; △△P<0.01 vs DM2 group; ##P<0.01 vs DM4 group.

4 足部皮膚厚度和組織結(jié)構(gòu)變化

DM大鼠表皮厚度較同時(shí)期C組明顯變薄(P<0.01),control組各時(shí)點(diǎn)表皮厚度無明顯差異，DM組表皮厚度隨著病程延長而變薄，各時(shí)點(diǎn)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，進(jìn)一步作LSD兩兩比較發(fā)現(xiàn)，DM8組明顯低于DM2組和DM4組(P<0.01)，見表4。如圖3所示，DM4組大鼠表皮組織變薄，表皮細(xì)胞層次減少，DM8組大鼠表皮組織明顯變薄，表皮細(xì)胞層次明顯減少，細(xì)胞腫脹模糊，細(xì)胞間隙增大，且部分表皮缺乏復(fù)層排列，真皮層膠原纖維萎縮、變性，皮下脂肪明顯減少。

Figure 3.The changes of the plantar skin epidermal thickness and cell morphology in the rats (HE staining, ×200).

表4 大鼠足底皮膚厚度值的變化

**P<0.01vscontrol group;△△P<0.01vsDM2 group;##P<0.01vsDM4 group.

5 背根神經(jīng)節(jié)內(nèi)JNK和p-JNK蛋白表達(dá)變化

如圖4所示，與同時(shí)點(diǎn)C組比較，DM各組大鼠L5，6-DRG和S1-DRG內(nèi)p-JNK水平呈漸進(jìn)性增強(qiáng)，p-JNK/JNK比值不斷增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；DM組各時(shí)點(diǎn)p-JNK水平的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，進(jìn)一步LSD兩兩比較發(fā)現(xiàn)，DM8組大鼠p-JNK的水平明顯高于DM2組與DM4組(P<0.01)，見表5。

表5 大鼠背根神經(jīng)節(jié)JNK和p-JNK蛋白水平的變化

**P<0.01vscontrol group;△△P<0.01vsDM2 group;##P<0.01vsDM4 group.

Figure 4.The changes of JNK and p-JNK protein levels in L5-DRG, L6-DRG and S1-DRG of the rats.

6 足部皮膚神經(jīng)密度、皮膚厚度和背根神經(jīng)節(jié)內(nèi)p-JNK蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析

Spearman相關(guān)分析顯示，DM大鼠皮膚PGP 9.5免疫陽性神經(jīng)末梢密度與皮膚表皮厚度(P<0.01)之間呈顯著正相關(guān)(圖5)，與L5，6-DRG、S1-DRG內(nèi)p-JNK(P<0.01)蛋白水平之間呈負(fù)相關(guān)(圖6)。

Figure 5.Correlation between the absorbance of the PGP 9.5 and epidermal thickness of the plantar skin in DM group after injection of streptozotocin.

Figure 6.Correlation between the absorbance of the PGP 9.5 and gray level of the p-JNK in DM group after injection of streptozotocin.

討 論

眾所周知，糖尿病本身并不可怕，可怕的是伴隨而來的各類并發(fā)癥，在糖尿病誘發(fā)的并發(fā)癥中，以末梢神經(jīng)病變和皮膚病變最為常見。糖尿病患者出現(xiàn)皮膚感覺功能障礙常常誘發(fā)肢體的慢性潰瘍，造成臨床治療中許多患者難以愈合，最終不得不截肢。因此，針對糖尿病皮膚神經(jīng)和皮膚組織病變關(guān)系及其機(jī)制的研究越來越受到人們的重視[6]。既往研究認(rèn)為皮膚神經(jīng)損害是糖尿病皮膚病變等慢性并發(fā)癥發(fā)生的機(jī)理之一。研究發(fā)現(xiàn)糖尿病大鼠表皮厚度變化與皮膚神經(jīng)病變相關(guān)[7-8]。支配皮膚(包括表皮)的神經(jīng)纖維源于背根神經(jīng)節(jié)，主要C類和Aa纖維，皮膚神經(jīng)通過釋放神經(jīng)肽等參與皮膚完整性的保持和修復(fù)，外周神經(jīng)損害可伴發(fā)皮膚營養(yǎng)機(jī)能和愈合能力改變導(dǎo)致皮膚潰瘍和壞死。本研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病大鼠足底皮膚神經(jīng)的分布密度與正常對照組相比明顯減少，皮膚神經(jīng)分布密度減少的同時(shí)伴隨著皮膚表皮厚度的變薄以及皮膚組織結(jié)構(gòu)的改變，兩者之間存在顯著正相關(guān)，提示皮膚神經(jīng)病變與皮膚組織結(jié)構(gòu)改變之間有一定的內(nèi)在聯(lián)系。

關(guān)于糖尿病皮膚神經(jīng)病變的發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明，一般認(rèn)為與糖尿病引起的皮膚神經(jīng)結(jié)構(gòu)和功能障礙有關(guān)。胰島素缺乏和高血糖是始動(dòng)因素，神經(jīng)缺血、多元醇通路活性增高、神經(jīng)營養(yǎng)因子減少、自身免疫等共同參與其發(fā)病過程。有研究報(bào)道，大鼠L5脊神經(jīng)結(jié)扎后能誘導(dǎo)L5-DRG中JNK的激活，且主要位于小型的C纖維神經(jīng)元中；在L5-DRG中注射JNK抑制劑D-JNKI-1能阻止卻不能逆轉(zhuǎn)SNL引起的觸誘發(fā)痛；提示DRG中JNK的激活在神經(jīng)性疼痛的產(chǎn)生和維持中擔(dān)任重要角色[9-10]。我們在前期的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，糖尿病性神經(jīng)痛大鼠背根神經(jīng)節(jié)內(nèi)p-JNK免疫陽性神經(jīng)元明顯增多，提示糖尿病大鼠皮膚痛覺過敏可能與背根神經(jīng)節(jié)相關(guān)神經(jīng)元JNK的激活有關(guān)[11]。

JNK是一類絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，屬于絲裂原活化蛋白激酶家族，通過信號(hào)級聯(lián)使底物磷酸化，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞功能。當(dāng)細(xì)胞受到刺激時(shí)，JNK信號(hào)通路可被不同的受體激活，調(diào)節(jié)細(xì)胞的發(fā)育、分化、凋亡等，大量研究顯示其活化與神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[12]。本研究發(fā)現(xiàn)，隨著糖尿病病程的延長，糖尿病大鼠皮膚神經(jīng)、表皮厚度和皮膚組織結(jié)構(gòu)出現(xiàn)漸進(jìn)性病理改變，同時(shí)存在初級感覺神經(jīng)元p-JNK蛋白表達(dá)的進(jìn)行性增強(qiáng)。相關(guān)性分析顯示，糖尿病大鼠皮膚PGP 9.5免疫陽性神經(jīng)末梢分布密度與L5，6-DRG、S1-DRG內(nèi)p-JNK的水平變化呈負(fù)相關(guān)；與表皮厚度的變化呈顯著正相關(guān)。我們認(rèn)為，背根神經(jīng)節(jié)JNK活化與糖尿病大鼠皮膚神經(jīng)和皮膚組織病變有關(guān)。

綜上所述，糖尿病大鼠足底皮膚神經(jīng)的分布密度明顯減少，神經(jīng)直徑變細(xì)，長度變短，走行扭曲，同時(shí)皮膚表皮厚度明顯變薄，表皮細(xì)胞層次明顯減少，表皮細(xì)胞腫脹模糊，細(xì)胞間隙增大，真皮層膠原纖維萎縮、變性，皮下脂肪進(jìn)行性減少，相關(guān)性分析顯示，糖尿病大鼠皮膚神經(jīng)末梢分布密度變化與表皮厚度變化之間呈顯著正相關(guān)，提示皮膚神經(jīng)病變和皮膚組織結(jié)構(gòu)改變之間存在密切關(guān)系。本研究同時(shí)發(fā)現(xiàn)，支配足底皮膚的腰骶段背根神經(jīng)節(jié)內(nèi)p-JNK蛋白的水平呈現(xiàn)進(jìn)行性增加，且背根神經(jīng)節(jié)內(nèi)p-JNK蛋白水平的變化與大鼠足底皮膚組織內(nèi)PGP 9.5陽性神經(jīng)末梢的分布密度變化呈負(fù)相關(guān)，提示背根神經(jīng)節(jié)JNK活化與糖尿病大鼠皮膚神經(jīng)病變有關(guān)，阻斷或抑制JNK/SAPK通路可以起到延緩糖尿病周圍神經(jīng)病變，進(jìn)而減輕皮膚組織病變發(fā)生作用。具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步探討。

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Effect of JNK expression in dorsal root ganglia on histological change of foot skin in diabetic rats

NI Gui-lian1, CUI Rong1, CHEN Gan-ming2, WU Zhong-min3

(1DepartmentofNeurology,2DepartmentofEndocrinology,FirstPeople’sHospitalofLinhaiCity,Linhai317000,China;3DepartmentofAnatomy,TaizhouUniversitySchoolofMedicine,Taizhou318000,China.E-mail:wzmbest@163.com)

AIM: To observe the change of skin histology in diabetic rats and to investigate the possible me-chanism of c-Jun N-terminal kinase (JNK) protein in the dorsal root ganglion (DRG) during the process. METHODS: Diabetic animal model was established in the male SD rats by intraperitoneal injection of streptozotocin. Plantar skin specimens of the rats were collected from control group, DM 2-week group (DM2), DM 4-week group (DM4), and DM 8-week group (DM8). Immunohistochemical staining and HE staining were used to observe the change of PGP 9.5 immunoreactive nerve terminals and the structures of the skin tissues. The protein expression of PGP 9.5 in the plantar skin tissues, and JNK and p-JNK protein in the DRG within lumbar 5, 6 (L5, 6), and sacral 1 (S1) spinal cord segments were detected by Western blotting. RESULTS: PGP 9.5 immunoreactive nerve terminals of the plantar skin of the rats mainly distributed in the basal layer of the epidermis and papillary dermis. Compared with control group, PGP 9.5 positive nerve terminals in DM4 group showed reduced density and sparse distribution. PGP 9.5 positive nerve terminals in DM8 group showed significantly reduced distribution, thinner nerve diameter, shorter length and distorted shape. Histological changes of the thinner epidermal tissue, reduced epidermal cell layers, uneven cell distribution and arrangement in DM4 group, and significantly reduced epidermal cell layers, swollen and blurred cells, increasing cell gap, lack of stratified epidermis arrangement for part of epidermis, atropal and degenerated dermal collagen fiber, significantly decreased subcutaneous fat in DM8 group were observed. The results of Western blotting showed that the protein expression of PGP 9.5 in the plantar skin tissue of DM rats was progressively decreased along with the disease, while the protein level of p-JNK in L5, 6-DRG or S1-DRG showed a gradual increasing trend. PGP 9.5 immunoreactive positive nerve terminal density of plantar skin in DM rats had a negative correlation with the protein level of p-JNK in L5, 6-DRG and S1-DRG (P<0.01), but showed a significant positive correlation with the plantar skin thickness (P<0.01). CONCLUSION: The protein level of p-JNK within L5, 6-DRG or S1-DRG in DM rats shows a progressive enhancement. At the same time, there is a significant change in the skin tissue density and structure. The changes of skin tissue and nerve morphology in DM rat may be related to the activation of JNK/SAPK pathway in L5, 6-DRG or S1-DRG cells. Blocking or inhibiting JNK/SAPK pathway may delay the diabetic peripheral neuropathy and reduce the risk of skin lesions.

Dorsal root ganglia; c-Jun N-terminal kinase; Diabetes mellitus; Skin tissue; Skin nerve

1000- 4718(2015)03- 0415- 06

2014- 09- 15

2015- 01- 08

浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)臨床科研基金(No. 2012ZYC-A101); 臺(tái)州市科技局科研基金(No. 1301ky53); 臨海市科技局科研基金(No. 12N12)

△通訊作者 Tel: 0576-88665198; E-mail: wzmbest@163.com

R587.1; R363

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2015.03.006