黃麗霞，馬利國，蔡如玉，楊 熠

(深圳市人民醫(yī)院暨南大學(xué)附屬第二臨床學(xué)院婦科，廣東 深圳 518020)

子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜的MMP-9和VEGF的表達(dá)

黃麗霞，馬利國，蔡如玉，楊 熠

(深圳市人民醫(yī)院暨南大學(xué)附屬第二臨床學(xué)院婦科，廣東 深圳 518020)

目的 探索在位內(nèi)膜是否有異常改變，以證實(shí)現(xiàn)有治療方法的有效性。方法隨機(jī)選取2013年11月至2014年5月于我院婦科經(jīng)腹腔鏡及病理確診為子宮內(nèi)膜異位癥的患者40例為內(nèi)異癥組，既往因子宮內(nèi)膜異位癥在我院治療后未復(fù)發(fā)的患者38例為治愈組，另選取30例同期健康育齡婦女為對(duì)照組。檢測并比較三組受檢者的基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果內(nèi)異癥組在位內(nèi)膜MMP-9和VEGF的表達(dá)較治愈組和對(duì)照組均明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；治愈組MMP-9和VEGF的表達(dá)與對(duì)照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；MMP-9和VEGF的表達(dá)存在正相關(guān)關(guān)系(r=0.805，P＜0.05)。結(jié)論內(nèi)異癥患者在位內(nèi)膜的MMP-9和VEGF的表達(dá)異常，促進(jìn)異位病灶形成；手術(shù)徹底切除內(nèi)異癥病灶聯(lián)合藥物治療后MMP-9和VEGF表達(dá)恢復(fù)正常，延遲復(fù)發(fā)。

子宮內(nèi)膜異位癥；在位內(nèi)膜；基質(zhì)金屬蛋白酶-9；血管內(nèi)皮生長因子

子宮內(nèi)膜內(nèi)異癥(Endometriosis，EMs)簡稱內(nèi)異癥，是育齡婦女的常見病，其發(fā)病率可達(dá)10%～15%，且呈上升趨勢，嚴(yán)重影響婦女的身心健康及生育能力。近年來，隨著大量內(nèi)異癥相關(guān)臨床和基礎(chǔ)研究工作的開展，人們對(duì)內(nèi)異癥的認(rèn)識(shí)不斷深入，臨床診治也逐漸規(guī)范，但其發(fā)生、發(fā)展過程仍是一個(gè)未解之謎。從過去經(jīng)典的Sampson經(jīng)血逆流學(xué)說，到現(xiàn)在的在位內(nèi)膜在內(nèi)異癥發(fā)病中的作用，越來越多的臨床和基礎(chǔ)研究結(jié)果證實(shí)，內(nèi)異癥患者在位內(nèi)膜有諸多方面的異常改變，從而有學(xué)者提出“在位內(nèi)膜決定論”——即在位子宮內(nèi)膜的異常改變?cè)趦?nèi)異癥發(fā)病中起著決定性作用?，F(xiàn)就這一理論，檢測治療前的內(nèi)異癥患者和治愈后患者在位內(nèi)膜的基質(zhì)金屬蛋白酶9 (MMP-9)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達(dá)來證明在位內(nèi)膜是否有異常變化。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)選取2013年11月至2014年5月于我院婦科經(jīng)腹腔鏡及病理確診為子宮內(nèi)膜異位癥的患者40例為內(nèi)異癥組，既往因子宮內(nèi)膜異位癥在我院行保守性手術(shù)+藥物治療6個(gè)月后，經(jīng)足月分娩，現(xiàn)妊娠結(jié)束大于1年，有規(guī)律月經(jīng)，無內(nèi)異癥復(fù)發(fā)的患者38例為治愈組；另選取30例同期健康育齡婦女為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：入組前3個(gè)月內(nèi)未行激素治療；月經(jīng)規(guī)律；年齡25～45歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：近期有生育要求；半年內(nèi)有內(nèi)異癥相關(guān)治療；有宮內(nèi)節(jié)育器；半年內(nèi)有哺乳病史；生殖道急性炎癥；同時(shí)合并子宮腺肌病、子宮肌瘤、多囊卵巢綜合征等內(nèi)分泌相關(guān)疾病和自身免疫性疾病。內(nèi)異癥組年齡25～45歲，平均(31.18±0.89)歲；術(shù)中診斷為單側(cè)卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫26例，雙側(cè)14例；合并盆腔腹膜內(nèi)異癥28例，合并骶韌帶內(nèi)異癥10例；rAFS評(píng)分Ⅲ期11例，Ⅳ期29例；增生期27例，分泌期13例。治愈組年齡27～40歲，平均(32.00±0.63)歲；術(shù)中診斷為單側(cè)卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫29例，雙側(cè)9例；合并盆腔腹膜內(nèi)異癥20例，合并骶韌帶內(nèi)異癥7例；rAFS評(píng)分Ⅲ期18例，Ⅳ期20例；增生期26例，分泌期12例。對(duì)照組年齡25～42歲，平均(31.00±0.83)歲；增生期19例，分泌期11例。三組受試者的年齡、子宮內(nèi)膜期別等資料比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)且入選者均已簽署知情同意書。

1.2 子宮內(nèi)膜的采集 內(nèi)膜采集使用一次性宮腔組織吸引管吸取子宮內(nèi)膜組織，固定保存，石蠟包埋。

1.3 檢測方法 內(nèi)膜組織先行常規(guī)病理檢查，排除其他婦科疾病，再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.4 MMP-9和VEGF的免疫組化檢測結(jié)果判定 應(yīng)用雙目顯微鏡觀察所有染色切片，采用雙盲法。MMP-9及VEGF蛋白均定位于細(xì)胞漿中。光鏡分析綜合染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的百分比進(jìn)行評(píng)價(jià)：不顯色或顯色不清為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，深褐色為3分；陽性細(xì)胞數(shù)＜5%為1分，5%～25%為2分，26%～50%為3分，＞50%為4分。兩項(xiàng)之和≥4分為陽性表達(dá)，＜4分為陰性表達(dá)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，計(jì)數(shù)資料以百分率表示，均數(shù)的比較采用t檢驗(yàn)，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，若四格表中有理論頻數(shù)1≤T≤5時(shí)，用校正公示計(jì)算χ2值。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 在位內(nèi)膜MMP-9及VEGF的表達(dá) 免疫組化檢測的結(jié)果顯示MMP-9陽性表達(dá)主要分布于子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞胞漿(圖1)，VEGF陽性表達(dá)主要分布于子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞的胞漿(圖2)。采用χ2檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示：內(nèi)異癥組在位內(nèi)膜MMP-9和VEGF的表達(dá)較對(duì)照組和治愈組均明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而治愈組MMP-9和VEGF的表達(dá)與對(duì)照組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表1。

圖1 三組受試者M(jìn)MP-9免疫組化染色結(jié)果

圖2 三組VEGF免疫組化染色結(jié)果

表1 三組受試者在位內(nèi)膜MMP-9和VEGF表達(dá)情況

2.2 MMP-9與VEGF在內(nèi)異癥患者治療前后及治愈后在位內(nèi)膜表達(dá)的相關(guān)性 對(duì)在位內(nèi)膜MMP-9和VEGF進(jìn)行Spearman相關(guān)分析，結(jié)果顯示：(1)內(nèi)異癥組MMP-9和VEGF存在正相關(guān)關(guān)系(r= 0.805，P＜0.05)；(2)治愈組在位內(nèi)膜MMP-9和VEGF存在正相關(guān)關(guān)系(r=0.870，P＜0.05)。

3 討論

內(nèi)異癥的發(fā)病率可高達(dá)10%～15%，且呈上升趨勢。其臨床表現(xiàn)多種多樣，盆腔痛和不孕是主要的癥狀[1-2]，嚴(yán)重影響育齡婦女的身心健康及生育能力。內(nèi)異癥的病因和發(fā)病機(jī)制至今仍未明確。因越來越多的研究發(fā)現(xiàn)子宮在位內(nèi)膜與正常子宮內(nèi)膜不一樣的特質(zhì)，有學(xué)者提出“在位內(nèi)膜決定論”[3-4]。本研究從在位內(nèi)膜入手，檢測治療前內(nèi)異癥的患者和治愈后患者在位內(nèi)膜的基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達(dá)變化。

本研究結(jié)果：內(nèi)異癥患者在位子宮內(nèi)膜的MMP-9陽性表達(dá)率均明顯高于治愈組和對(duì)照組；治愈組與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。盆腔內(nèi)異癥患者在位內(nèi)膜MMP-9的活性增加，對(duì)局部組織結(jié)構(gòu)及基底膜成分的破壞能力增加，利于逆流入腹腔的內(nèi)膜組織對(duì)腹膜侵襲，促進(jìn)內(nèi)異癥的發(fā)生。治愈組的MMP-9表達(dá)較內(nèi)異癥組顯著下降。盆腔內(nèi)異癥患者手術(shù)中完全切除異位病灶，術(shù)后輔助藥物治療，治療促使炎癥細(xì)胞因子分泌減少[5]，炎癥消退，激素調(diào)節(jié)增強(qiáng)，降調(diào)MMP-9表達(dá)。

本研究結(jié)果：內(nèi)異癥患者在位子宮內(nèi)膜VEGF蛋白陽性表達(dá)率均高于治愈組和對(duì)照組；治愈組與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。此研究結(jié)果與多個(gè)報(bào)道一致，表明內(nèi)異癥患者的在位內(nèi)膜具有異位種植生長的內(nèi)在條件[6]。內(nèi)異癥組VEGF蛋白表達(dá)增多，引起毛細(xì)血管通透性增加，血漿外滲，使游離內(nèi)膜能夠獲得更多的營養(yǎng)，細(xì)胞增殖加快，建立新的血管，形成新的異位病灶[7]。治愈組在位內(nèi)膜的血管生成活性得到抑制。子宮內(nèi)膜的血管生成能力直接影響病灶的形成[8]，是內(nèi)異癥發(fā)生、發(fā)展的關(guān)鍵步驟，也是一個(gè)潛在的干預(yù)治療的新靶點(diǎn)?，F(xiàn)已經(jīng)有幾種抗血管藥物的實(shí)驗(yàn)顯示抑制血管生成可使病灶萎縮。此發(fā)現(xiàn)有望成為內(nèi)異癥治療方法的一種新選擇[9]。

進(jìn)一步的Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示：隨著內(nèi)異癥在位子宮內(nèi)膜MMP-9蛋白陽性表達(dá)率的降低，其VEGF蛋白陽性表達(dá)率亦降低。MMP-9和VEGF表達(dá)呈正相關(guān)。VEGF可促進(jìn)MMP-9的合成，并提高M(jìn)MP-9的活性和表達(dá)，調(diào)節(jié)MMP-9的轉(zhuǎn)錄水平。MMP-9亦通過和整合素的相互作用而加強(qiáng)細(xì)胞間的粘附，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的出芽，參與新生血管的形成[5]，從而促進(jìn)子宮內(nèi)膜細(xì)胞的異位粘附、種植和生長[10]。MMP-9和VEGF在盆腔內(nèi)異癥病灶形成中具有協(xié)同作用，促進(jìn)其發(fā)生和發(fā)展，并可為內(nèi)異癥的治療和預(yù)防復(fù)發(fā)提供指導(dǎo)。然而由于本研究的樣本量偏小，需更大樣本量的全面設(shè)計(jì)和深入研究。

綜上所述，內(nèi)異癥患者的在位內(nèi)膜的MMP-9和VEGF表達(dá)異常，較治愈組和對(duì)照組有明顯的差異，在手術(shù)和藥物治療后，MMP-9和VEGF表達(dá)恢復(fù)正常，手術(shù)徹底地切除內(nèi)異癥病灶聯(lián)合藥物治療可以改善內(nèi)異癥患者盆腔的微環(huán)境，延緩內(nèi)異癥病灶的再次產(chǎn)生，延遲復(fù)發(fā)。展望未來，希望能從在位內(nèi)膜MMP-9和VEGF的角度研究更多的新型試劑盒來檢測內(nèi)異癥的發(fā)生，研究更多的藥物來延緩內(nèi)異癥的復(fù)發(fā)。

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Expression of matrix metalloproteinase-9 and vascular endothelial growth factor in eutopic endometrium of patients with endometriosis.

HUANG Li-xia,MA Li-guo,CAI Ru-yu,YANG Yi.Department of Gynaecology,Shenzhen People's Hospital,Shenzhen 518020,Guangdong,CHINA

Objective To study the change of eutopic endometrium in patients with endometriosis,in order to confirm the clinical efficacy of treatment.MethodsForty patients diagnosed as endometriosis by laparoscopy and pathology from November 2013 to May 2014 in the Department of Gynaecology in our hospital were enrolled as endometriosis group.Thirty-eight patients of endometriosis cured in our hospital without recurrence after treatment were selected as cured group.Thirty healthy women were selected as control group.The expression levels of matrix metalloproteinase 9(MMP-9)and vascular endothelial growth factor(VEGF)in the three groups were detected and compared.ResultsMMP-9 and VEGF expression in endometriosis group were significantly higher than cured group and control group(P＜0.05),with no statistically significant difference between cured group and control group(P＞0.05). The expressions of MMP-9 and VEGF were positively correlated(r=0.805,P＜0.05).ConclusionMMP-9 and VEGF of eutopic endometrium in patients with endometriosis are expressed abnormally,which promote endometriotic lesions. Complete surgical excision of endometriotic lesions combined with drug treatment can postpone recurrence.

Endometriosis;Eutopic endometrium;Matrix metalloproteinase 9(MMP-9);Vascular endothelial growth factor(VEGF)

R711.71

A

1003—6350（2015）23—3478—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.23.1260

2015-05-24)

廣東省深圳市科技創(chuàng)新委員會(huì)重大項(xiàng)目(編號(hào)：JCYJ20130402092657780)

馬利國。E-mail：sunglowhlx@126.com