戴梓茹，林美芳，張晨曉（欽州學(xué)院海洋學(xué)院，廣西欽州535000）

氣相色譜法快速測(cè)定鮮牛乳中的甲醛含量

戴梓茹，林美芳*，張晨曉
（欽州學(xué)院海洋學(xué)院，廣西欽州535000）

摘要：通過試驗(yàn)建立了一種用氣相色譜法快速測(cè)定鮮牛乳中甲醛含量的方法。該方法用乙腈配制的2，4-二硝基苯肼溶液對(duì)樣品進(jìn)行處理，再用正己烷萃取，最后用氣相色譜法檢測(cè)甲醛含量。該方法回收率為94.0%～105.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）小于4.31%，檢測(cè)準(zhǔn)確性高，且操作簡(jiǎn)單便捷，高速高效，因此便于推廣應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：鮮牛乳；氣相色譜；甲醛含量

甲醛是一種熔點(diǎn)-92℃，沸點(diǎn)-21℃的原生質(zhì)毒素。它對(duì)人體中樞神經(jīng)系統(tǒng)及視網(wǎng)膜有刺激作用，對(duì)人的神經(jīng)、肺、肝臟可產(chǎn)生損害，并具有潛在的致癌作用[1]。在市場(chǎng)上收購(gòu)鮮牛奶時(shí)，由于牛奶在貯藏或運(yùn)輸過程中，若無(wú)冷藏設(shè)施，微生物會(huì)大量繁殖，致使牛奶迅速變質(zhì)。為防止牛奶細(xì)菌指數(shù)超標(biāo)，延長(zhǎng)牛奶保質(zhì)期，一些不法商販會(huì)在牛奶中加入有害防腐劑甲醛[2]，以欺騙的手段提高牛奶的某些理化指標(biāo)[3]。為了保證收購(gòu)鮮牛奶的品質(zhì)，有必要在收購(gòu)時(shí)快速檢測(cè)鮮牛奶中的甲醛含量。

目前，用氣相色譜法檢測(cè)甲醛主要有SNT 2611-2010《食品接觸材料-木制品中游離甲醛的測(cè)定-氣相色譜法》提到的檢測(cè)方法。其中通過甲醛在酸性條件下與2，4-二硝基苯肼反應(yīng)，生成穩(wěn)定的2，4-二硝基苯腙，經(jīng)環(huán)己烷萃取，用氣相色譜儀測(cè)定出木制品中的游離甲醛[4-6]。將該方法用于牛乳中甲醛含量檢測(cè)時(shí)，由于牛乳中的蛋白質(zhì)容易與環(huán)己烷等有機(jī)溶劑發(fā)生乳化，使得萃取無(wú)法順利進(jìn)行。若先將牛乳去蛋白后再進(jìn)行后續(xù)檢測(cè)，不但步驟比較繁瑣，其去蛋白過程也容易導(dǎo)致甲醛的損失，影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

本試驗(yàn)采用乙腈配制的2，4-二硝基苯肼溶液預(yù)處理牛乳及標(biāo)準(zhǔn)溶液，再用正己烷萃取并進(jìn)行氣相色譜檢測(cè)，無(wú)需將牛乳去除蛋白后再加入2，4-二硝基苯肼并進(jìn)行后續(xù)檢測(cè)，其操作簡(jiǎn)單，且檢測(cè)結(jié)果具有較高的準(zhǔn)確性。

1　材料與方法

1.1儀器與試劑

儀器：Varian GC-450氣相色譜儀（配氫火焰離子化檢測(cè)器FID），毛細(xì)管色譜柱VF-5ms（30 m×0.25 mm× 0.20 um）。

試劑：2，4-二硝基苯肼（AR）、乙腈（GR）、正己烷（GR）。2，4-二硝基苯肼溶液：稱取0.05 g 2，4-二硝基苯肼于小燒杯中，用乙腈溶解并定容至100mL，得到2，4-二硝基苯肼溶液。

1.2方法

1.2.1色譜條件

進(jìn)樣口溫度為240℃；進(jìn)樣量為1 μL，不分流進(jìn)樣；柱箱溫度為初溫140℃，以20℃/min的速度升溫至280℃并維持8 min；電子捕獲檢測(cè)器的溫度為300℃；載氣為高純氮?dú)?，流速?.0 mL/min，補(bǔ)償氣流速為25 mL/min。

1.2.2標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)液制備

制備不同甲醛濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，甲醛含量分別為0.0、25、50、100、200 ng/mL的甲醛水溶液；取各標(biāo)準(zhǔn)溶液2.0 mL，分別加入2，4-二硝基苯肼溶液1.0 mL并搖勻，得到對(duì)應(yīng)于不同甲醛濃度的標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)液。將各標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)液放入58℃～62℃的水浴中反應(yīng)9 min～11 min，待冷卻后分別向各標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)液中加入2 mL正己烷，渦旋50 s～70 s后離心分層，得到對(duì)應(yīng)于不同甲醛濃度的標(biāo)準(zhǔn)離心液；過濾各標(biāo)準(zhǔn)離心液上層清液，得到對(duì)應(yīng)于不同甲醛濃度的標(biāo)準(zhǔn)上清液，待檢測(cè)用。

1.2.3樣品反應(yīng)液制備

取待測(cè)鮮牛乳2.0 g，加入2，4-二硝基苯肼溶液1.0 mL并搖勻，得到樣本反應(yīng)液。再按照1.2.2步驟制備得到待檢測(cè)用的樣品上清液。

1.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制和樣品測(cè)定

氣相色譜法檢測(cè)各標(biāo)準(zhǔn)上清液和樣品上清液；根據(jù)各標(biāo)準(zhǔn)溶液中甲醛的濃度和與各標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)應(yīng)的氣相色譜值繪制得到標(biāo)準(zhǔn)曲線；根據(jù)與待測(cè)牛乳對(duì)應(yīng)的氣相色譜值及標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出待測(cè)牛乳中甲醛的含量。

1.2.5甲醛含量計(jì)算

甲醛含量計(jì)算見圖1。

由圖1可以看出，采用1.4中制備的標(biāo)準(zhǔn)溶液梯度線性關(guān)系良好，在樣品溶液為25 ng/mL～200 ng/mL范圍中，可以使用外標(biāo)法進(jìn)行準(zhǔn)確定量檢測(cè)。

2　結(jié)果與分析

2.1色譜分離條件的建立

由圖2～圖4可以看出使用VF-5毛細(xì)管色譜柱配電子捕獲檢測(cè)器，能夠?qū)兹┑难苌a(chǎn)物2，4-二硝基苯腙進(jìn)行很好的分離，而且由圖3可以看出，鮮牛奶中本身就含有一定量的甲醛。

2.2方法回收率與精密度

向牛乳樣本中添加不同量的甲醛，使其甲醛的濃度增量分別達(dá)到25、50、100 ng/g，分別制成加標(biāo)樣1、加標(biāo)樣2和加標(biāo)樣3。將加標(biāo)樣1、加標(biāo)樣2和加標(biāo)樣3按照1.3方法進(jìn)行處理檢測(cè)甲醛含量，每個(gè)含量水平分別進(jìn)行6次重復(fù)試驗(yàn)，計(jì)算結(jié)果如下表1所示，3個(gè)加標(biāo)樣的平均回收率為94.0%、98.4%、105.4%；相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為4.01%～4.31%。說明方法準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性都能夠滿足GB/T 27404-2008《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測(cè)》中方法驗(yàn)證的要求。

3　結(jié)論

通過對(duì)SN/T 2611-2010《食品接觸材料木制品中游離甲醛的測(cè)定-氣相色譜法》的改進(jìn)研究發(fā)現(xiàn)，使用乙腈溶解配制2，4-二硝基苯肼溶液，并且直接加入樣品進(jìn)行衍生，然后使用正己烷提取衍生后的產(chǎn)物2，4-二硝基苯腙，最后進(jìn)行離心分層，得到上清液再采用氣相色譜法檢測(cè)。該方法回收率為94.0%～105.4%，RSD小于4.31%，準(zhǔn)確度滿足測(cè)定要求，且操作簡(jiǎn)便，高效，便于推廣應(yīng)用。

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DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2015.24.040

收稿日期：2014-07-13

作者簡(jiǎn)介：戴梓茹（1982—），女（漢），副教授，博士，研究方向：食品質(zhì)量與安全。

*通信作者：林美芳（1971—），女（漢），研究方向：食品加工、食品質(zhì)量與安全。

Rapid Detection of Formaldehyde Content in Fresh Milk by Gas Chromatography

DAI Zi-ru，LIN Mei-fang*，ZHANG Chen-xiao
（Department of Marine Science，Qinzhou University，Qinzhou 535000，Guangxi，China）

Abstract：The method was established for rapid detection the formaldehyde content in fresh milk by chromatography.Pretreatment the sample in the 2，4-dinitrophenylhydrazine acetonitrile solution，and extracted with hexane，detected by gas chromatography.The recycle rate of this method and the relative standard deviation（RSD）were 94.0%-105.4%，and less then 4.31%.The method was accurate，convenient operation high speed and high efficincy.Therefore，it is easy to be spread to practical use.

Key words：fresh milk；gas chromatography；formaldehyde