桂勇 ，廖朝青 ，夏琴

(新余市中醫(yī)院，1、檢驗科；2、乳腺病科，江西 新余,338025；3、分宜縣農(nóng)醫(yī)局，江西 分宜，336600)

化學(xué)發(fā)光免疫分析儀在臨床應(yīng)用廣泛,可對血清腫瘤標志物、微量蛋白、性激素、甲狀腺激素等多個項目進行測定，具有結(jié)果快速、準確、靈敏度高、特異性好、對環(huán)境無污染可代替放射免疫(RIA)等優(yōu)點[1-7]。近年來國內(nèi)曾有學(xué)者嘗試用放射免疫、高效液相色譜(HPLC)、時間分辨熒光免疫(TRFIA)等多種方法測定尿液中的睪酮含量,并作了探討和報道[8-10]。本實驗對應(yīng)用Access化學(xué)發(fā)光儀測定尿液睪酮作實驗評價,供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1 .1混合尿液 由多份健康未成年男性的尿液混合而成,酸堿度(pH)7.8,睪酮濃度0.50nmol/L。

1.1 .2混合血清 由多份健康未成年男性的血清混合而成,睪酮濃度1.50nmol/L。

1.1 .3 高濃度睪酮尿液 取臨床睪酮濃度為380.50nmol/L的尿液標本，代替睪酮凍干標準品，以制備不同睪酮濃度的尿液標本。

1.1 .4 睪酮凍干標準品 睪酮濃度分別為1.74、5.20、13.88、27.76、55.52nmol/L， 由 Beckman-Coulter公司提供，用于制備睪酮標準液。

1.1 .5尿隱血陽性、尿糖陽性、尿蛋白陽性、高白細胞尿液樣品 血尿(Hb5.0g/L)、尿糖(45.0mmol/L)、尿蛋白(8.5 g/L)、高白細胞(WBC>10個/HP)尿液。

1.2 檢測方法 所有測定均使用Beckman-Coulter-Access2型全自動微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，試劑由Beckman-Coulter公司提供。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用相關(guān)分析和t檢驗，以P<0.05為兩樣本呈相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r的絕對值愈接近于1，相關(guān)愈密切；愈接近于0，相關(guān)愈不密切。

2 結(jié)果

2.1 精密度 取高濃度睪酮尿液,用混合尿液稀釋成低(稀釋 1：100,預(yù)計 3.82nmol/L)、中(稀釋 1：20,預(yù)計 18.60nmol/L)、高(稀釋 1:10，預(yù)計 35.04nmol/L)三種濃度睪酮尿液標本各1管,低、高濃度標本各測20次,測得睪酮濃度分別為3.80±0.13nmol/L和34.50±0.86nmol/L,批內(nèi)變異系數(shù)CV分別為3.50%和2.50%。取中濃度睪酮尿液標本,分裝30支小試管后置-25℃低溫貯存,每天取出1支測試,連測30天,睪酮濃度為18.45±0.86nmol/L,批間變異系數(shù)CV為4.65%。

2.2 準確度 (回收試驗)在0.9m l睪酮濃度為0.50nmol/L的混合尿液中加入0.1ml睪酮標準液。測定標本中睪酮濃度，以回收濃度/加入濃度計算百分回收率，結(jié)果見表1。

表1 尿液睪酮回收試驗

2.3 線性范圍 取高濃度睪酮尿液,用混合尿液從1:4倍起稀釋成76.50~0.50nmol/L不同濃度系列的尿液睪酮濃度，其線性范圍0.80~54.78nmol/L，比血清標本的線性范圍0.35~55.52nmol/L略小。

2.4 同一濃度睪酮在血清和尿液中測得值的比較取高濃度睪酮凍干標準品,用混合尿液稀釋成系列濃度的40份尿液標本，測得的睪酮濃度值為Y，用混合血清稀釋成相應(yīng)濃度的系列標本40份，測得的睪酮濃度值為X?；貧w方程為Y=0.96X+0.32，相關(guān)系數(shù)r=0.9918,t=47.91,P<0.001。

2.5 尿隱血陽性、尿糖陽性、尿蛋白陽性、高白細胞尿液樣品對睪酮測定的干擾觀察 取高濃度睪酮凍干標準品,分別用血尿 (Hb5.0g/L)、尿糖(45.0mmol/L)、尿蛋白(8.5 g/L)、高白細胞(WBC>10個/HP)尿液樣品離心后尿液從1：1倍起稀釋成不同濃度系列的尿液睪酮溶液各10管，每管各測4次，取均值，測定值為Y，理論值為X，回歸方程分別為 Y=0.95X+0.35，r=0.9725,t=11.80,P<0.001；Y=0.96X+0.30，r=0.9740,t=12.18,P<0.001；Y=0.97X+0.33，r=0.9856,t=16.43,P<0.001；Y=0.96X+0.42，r=0.9811,t=14.30,P<0.001。

3 討論

在臨床上睪酮測定一般都用血清或血漿標本,在臨床工作中經(jīng)常會發(fā)現(xiàn)多囊卵巢綜合征患者,血清睪酮水平與臨床癥狀并不完全吻合。這可能與血清睪酮測定方法及抽血時間點的選擇有關(guān),測定血清或血漿中的睪酮易受性激素結(jié)合蛋白(SHBG)和白蛋白等的影響,同時睪酮分泌呈脈沖式釋放,尤以夜間顯著,睪酮分泌常伴隨于促黃體生成素(LH)脈沖釋放約30min后,故血睪酮水平在夜間睡眠后升高,因此測定24h尿睪酮含量較常規(guī)性日間一次采血測睪酮更為合理而有意義[9]。

實驗結(jié)果提示應(yīng)用Access化學(xué)發(fā)光儀測定尿液睪酮與測定同水平的血清睪酮相關(guān)性良好，抗干擾能力強，精密度較好，但準確度稍差，線性范圍較小，當尿液睪酮含量大于54.78nmol/L時需要對尿液標本進行稀釋后再進行測定。其主要原因是尿液與血清基質(zhì)存在差異所致。臨床個體因生理、病理情況不同尿液差異很大，即使同一受試對象的尿液在不同的晝夜、時間段也會有一些差別。尿量、pH值等受采樣時患者的飲食、服藥情況影響較大?；|(zhì)的差異既影響堿性磷酸酶催化發(fā)光劑的活性，又影響到免疫反應(yīng)中抗原抗體的結(jié)合，使結(jié)果出現(xiàn)偏差，并且偏離的趨勢和幅度并不一致[11]。

綜上所述，應(yīng)用Access化學(xué)發(fā)光儀測定尿液睪酮可行，但須與血清同時進行測定結(jié)果更有參考價值。

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