鄭家新

微柱凝膠法診斷新生兒溶血病實(shí)驗(yàn)研究

鄭家新

目的 探討微柱凝膠法診斷新生兒溶血病的方法及準(zhǔn)確度。方法 選取出生的80例疑似溶血病HDN新生兒分別采取MGCT和TCT檢測(cè)紅細(xì)胞抗體，比較兩種方法準(zhǔn)確性以及MGCT3種方法檢查結(jié)果陽(yáng)性率差異。結(jié)果 本組80例疑似HDN新生兒，經(jīng)綜合分析確診65例。MGCT檢測(cè)Se、Sp、Ac、+PV及-PV均顯著高于TCT檢測(cè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；MGCT3種方法中IAT和放散試驗(yàn)陽(yáng)性率均顯著高于DAT，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 MGCT診斷HDN敏感度和特異性較強(qiáng)，準(zhǔn)確率較高，操作簡(jiǎn)單，臨床應(yīng)用和推廣價(jià)值較高。

MGCT；TCT；HDN

新生兒溶血病(HDN)在臨床上較為常見(jiàn)，屬于紅細(xì)胞破壞性貧血，能夠通過(guò)新生兒血清中紅細(xì)胞抗體檢測(cè)進(jìn)行診斷。臨床上檢測(cè)新生兒血清紅細(xì)胞抗體的傳統(tǒng)方法是抗人球蛋白試驗(yàn)(TCT)，但操作較為復(fù)雜，結(jié)果準(zhǔn)確率不能令人滿意[1]。江西省景德鎮(zhèn)市婦幼保健院自2008年起開(kāi)始采用微柱凝膠法抗人球蛋白試驗(yàn)(MGCT)，本文選取80例疑似HDN新生兒作為研究對(duì)象，探討微柱凝膠法診斷新生兒溶血病的方法及準(zhǔn)確度，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)選擇本院2011年3月～2013年3月出生的新生兒中疑似HDN的80例足月新生兒作為研究對(duì)象。其中男51例，女29例，患者日齡24h～7d，平均日齡(4.26±2.48)d。

1.2 方法 新生兒均采取MGCT和TCT檢測(cè)紅細(xì)胞抗體。紅細(xì)胞鹽水懸濁液配制：使用生理鹽水洗滌新生兒紅細(xì)胞3次，配成5%紅細(xì)胞鹽水懸濁液備用[2]。

1.2.1 MGCT (1)直接抗人球蛋白試驗(yàn)(DAT)：取紅細(xì)胞鹽水懸濁液10μL加入至1孔抗IgG卡，離心10min后凝集紅細(xì)胞停留在膠表面或膠中判定為陽(yáng)性。

(2)間接抗人球蛋白試驗(yàn)(IAT)：取新生兒血清40μL，分別加入8孔抗IgG卡前3孔，并依次加入5%A、B、O試劑紅細(xì)胞懸液進(jìn)行觀察。

(3)放散試驗(yàn)：使用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞3次，加入2份抗A和抗B分型血清充分混合后離心，除去上清液，洗滌3次后加入1/2容積的生理鹽水，置入56℃的水浴充分放散抗體。于8孔抗IgG卡后3孔分別加入40μL放散液及5%A、B、O試劑紅細(xì)胞懸液，使用MGCT配套離心機(jī)離心5min后觀察[3]。

1.2.2 TCT (1) DAT：取1滴配制好的紅細(xì)胞鹽水懸濁液加入1支潔凈試管中，滴入1滴抗人球蛋白血清后搖勻，離心1min后出現(xiàn)凝集為陽(yáng)性。

(2) IAT：取3支潔凈試管，均滴加2滴新生兒血清，逐一滴加1滴5%A、B、O型紅細(xì)胞鹽水懸液。致敏后出現(xiàn)凝集判定為存在相應(yīng)抗體；若不致敏，洗滌3次加入1滴抗IgG的抗人球蛋白血清，離心后出現(xiàn)凝集為陽(yáng)性。

(3)放散試驗(yàn)：放散液配制與MGCT相同，取放散液離心后用2%A型和B型試劑紅細(xì)胞鑒定抗體[4]。

1.3 HDN診斷標(biāo)準(zhǔn) (1)臨床診斷：母嬰血型配伍不合；有分娩原因不明的黃疸、水腫兒或貧血史；新生兒娩出后出現(xiàn)肝脾腫大、貧血或黃疸，出生后2～4d黃疸達(dá)到高峰，血清膽紅素＞205μmol/L。(2)實(shí)驗(yàn)室診斷：新生兒直接抗人球蛋白試驗(yàn)、間接抗人球蛋白試驗(yàn)及放散試驗(yàn)中1項(xiàng)或1項(xiàng)以上為陽(yáng)性[5]。

比較MGCT和TCT敏感度(Se)、特異性(Sp)、準(zhǔn)確度(Ac)、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值(+PV)及陰性預(yù)測(cè)值(-PV)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有研究數(shù)據(jù)均使用SPSS21.0處理，計(jì)量資料采用“x±s”表示，計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，分別行t檢驗(yàn)和配對(duì)χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法Se、Sp、Ac、+PV及-PV比較 本組80例疑似HDN新生兒，經(jīng)綜合分析確診65例。MGCT檢測(cè)Se、Sp、Ac、+PV及-PV陽(yáng)性率分別為92.30%、86.67%、91.25%、96.77%、72.22%均顯著高于TCT組80.00%、80.00%、78.75%、92.86%、45.83%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.672、5.778、9.306、4.325、13.654，均P＜0.05)。

2.2 不同檢查方法結(jié)果陽(yáng)性率的對(duì)比 IAT和放散試驗(yàn)陽(yáng)性率分別為53.75%、60.00%均顯著高于DAT 25.00%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=13.682、15.339，均P＜0.05)。

3 討論

臨床研究表明紅細(xì)胞表面多種抗原系統(tǒng)均可引發(fā)HDN，以ABO系統(tǒng)和Rh系統(tǒng)最為常見(jiàn)[6-8]。臨床檢測(cè)HDN的常用方法有DAT、IAT以及放散試驗(yàn)等，其中DAT用于檢測(cè)紅細(xì)胞是否已經(jīng)受到不完全抗體致敏，IAT用于檢驗(yàn)抗體及其類(lèi)型，放散試驗(yàn)用于鑒別紅細(xì)胞上抗原的種類(lèi)[9]。

由本研究可以看出，傳統(tǒng)的TCT操作步驟較為復(fù)雜，操作過(guò)程中易受到諸多因素的影響，會(huì)出現(xiàn)不同程度的偏差。MGCT是一種新型血清檢驗(yàn)方法，在微柱凝膠介質(zhì)中可促進(jìn)紅細(xì)胞抗原結(jié)合相應(yīng)抗體，離心凝集的紅細(xì)胞被篩狀凝膠介質(zhì)阻擋在分子篩內(nèi)，有效篩除未結(jié)合的紅細(xì)胞[10]。另外，抗人球蛋白、血型抗體直接加入凝膠，無(wú)需另操作加入，因而使操作步驟得到了簡(jiǎn)化，避免了多種人為因素的干擾和誤差發(fā)生，結(jié)果能夠形成統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，減少了主觀因素的影響。

曾德理采用MGT檢測(cè)新生兒ABO溶血病的同時(shí)，選擇抗人球蛋白試管（TAT）作對(duì)照。結(jié)果顯示，121例作Coombs試驗(yàn)對(duì)照：MGT檢測(cè)陽(yáng)性31例，TAT檢測(cè)陽(yáng)性18例；游離抗體試驗(yàn)：MGT陽(yáng)性61例，TAT陽(yáng)性為55例；抗體釋放試驗(yàn)共有126例作對(duì)照：MGT陽(yáng)性為74例，TAT陽(yáng)性為59例[11]。該項(xiàng)研究表明，在檢測(cè)新生兒ABO溶血病方面，MGT陽(yáng)性檢出率高于傳統(tǒng)TAT，具有更高的敏感性及特異性。本研究結(jié)果顯示MGCT敏感度、特異性以及準(zhǔn)確率均顯著高于TCT(P＜0.05)，假陽(yáng)性率較低，具有顯著臨床優(yōu)勢(shì)。與上述研究結(jié)論具有相似性，總體來(lái)看，MGCT較傳統(tǒng)TCT診斷HDN更加快捷和準(zhǔn)確，臨床應(yīng)用和推廣價(jià)值較高。

[1] 陳燕萍，王長(zhǎng)奇，朱金萍.新生兒溶血病血清免疫三項(xiàng)抗體檢測(cè)在臨床上應(yīng)用[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2009，27(5)：545-546.

[2] 王宇宏，劉冰.用微柱凝膠法診斷新生兒溶血病的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2011，15(12)：2018-2020.

[3] 任飛翔,孫素梅.兩種方法檢測(cè)新生兒溶血病“三項(xiàng)試驗(yàn)”的效果比較[J].中國(guó)基層醫(yī)藥,2015,8(10)：1493-1495.

[4] 李雪，高宏敏.微柱凝膠法在新生兒溶血病診斷中的應(yīng)用[J].臨床醫(yī)學(xué)，2011，31(1)：93-94.

[5] 王萍，肖筠，魏紅璐.微柱凝膠法和傳統(tǒng)試管法在新生兒溶血病診斷中的比較研究[J].中國(guó)計(jì)劃生育學(xué)雜志，2012，20(8)：548-549.

[6] 孫小純,張振林,林偉強(qiáng)，等.微柱凝膠法與凝聚胺法在新生兒ABO溶血病交叉配血試驗(yàn)中的應(yīng)用效果比較[J].中國(guó)基層醫(yī)藥, 2013,20(21)：3299-3300.

[7] 王宇宏，劉冰.用微柱凝膠法診斷新生兒溶血病的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2011，15(12)：2018-2020.

[8] 林瓊琳，郭雅春，彭燕，等.微柱凝膠法檢測(cè)南昌地區(qū)新生兒溶血病及其相關(guān)性分析[J].中國(guó)輸血雜志，2013，26(8)：741-742.

[9] 楊劍，劉劍榮，黃永建，等.新生兒ABO溶血病溶血三項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果分析[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2010，28(5)：525-526.

[10] 曾德理,曾惠瓊.新生兒微柱凝膠法交叉配血不合原因分析及處理[J].廣西醫(yī)學(xué),2010,32(7)：839-840.

[11] 曾德理.檢測(cè)新生兒ABO溶血病的兩種方法比較[J].中外健康文摘,2011,8(18)：43-44.

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.35.031

江西 335000 江西省景德鎮(zhèn)市婦幼保健院 （鄭家新）