廖 然 謝 偉 南華大學(xué)附屬南華醫(yī)院藥劑科(衡陽421000)

HPLC法測(cè)定解毒止痛顆粒中連翹苷的含量

廖 然 謝 偉△南華大學(xué)附屬南華醫(yī)院藥劑科(衡陽421000)

目的:建立解毒止痛顆粒中君藥連翹的有效成分含量。方法:采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(23：77)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為230nm。結(jié)果: 連翹苷濃度在26.9～134.5μg/mL范圍內(nèi)，樣品的峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系；測(cè)定回收率、重復(fù)性和中間精密度均良好；各批供試品的含量均在標(biāo)示量的95%～105%范圍內(nèi)。結(jié)論:本方法操作簡(jiǎn)便,精密度好,結(jié)果準(zhǔn)確可靠,可用于該產(chǎn)品的質(zhì)量控制。

解毒止痛顆粒是由連翹、金銀花、梔子等12味中草藥配伍組成，方中重用連翹為君藥，藥用功效為解毒止痛，主要用于治療風(fēng)熱之邪侵入人體引起的咽喉腫痛，目赤、牙齦紅腫等癥，預(yù)試驗(yàn)中具有非常顯效的治療作用。本文采用HPLC法測(cè)定所述中藥制劑中君藥所含有效成分連翹苷的含量，以期為該產(chǎn)品的質(zhì)量控制提供一定依據(jù)。

1 儀器與試藥 1.1 儀 器 Waters 2695高效液相色譜儀，Empower色譜工作站，2996二極管陣列檢測(cè)器；HB3120U型數(shù)控超聲波發(fā)生器；Sartorius BT125D電子天平。

1.2 試 藥 連翹苷對(duì)照品(由中國食品藥品檢定研究院提供)；解毒止痛顆粒及缺連翹陰性樣品(實(shí)驗(yàn)室自制)；乙腈、甲醇為色譜純；其余試劑均為分析純；水為高純水。

2 方法與結(jié)果[1-5]2.1 色譜條件的確定

2.1.1檢測(cè)波長選擇： 取連翹苷適量，用甲醇溶解并逐步稀釋，按《中國藥典》2010年版一部附錄項(xiàng)下紫外分光光度法，于200～400nm波長范圍內(nèi)掃描。結(jié)果：連翹苷在230nm處有最大吸收，因此，選擇230nm作為本有效成分的檢測(cè)波長。

2.1.2色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)： 采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，以乙腈-水(23：77)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為230nm，流速1.0mL/min；柱溫30℃；理論板數(shù)按連翹苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。結(jié)果：在本色譜條件下，連翹苷色譜峰出峰時(shí)間適宜，峰形良好，與相鄰雜質(zhì)峰均能良好分離。

2.2 含量測(cè)定 2.2.1 溶液的配制：2.2.1.1對(duì)照品溶液的制備：精密稱取連翹苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含50μg的溶液，即得對(duì)照品溶液。

2.2.1.2供試品溶液的制備：取重量差異項(xiàng)下的本品5片，研細(xì)，取約1.5g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理30h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，精密量取續(xù)濾液25mL，蒸干，用水30mL分次溶解，加于已處理好的D101大孔樹脂柱(內(nèi)徑1.5 cm，長20cm)上，以每分鐘約3～4mL的流速，用水80mL洗脫，棄去洗脫液，再用30%甲醇100mL洗脫，棄去洗脫液，繼用甲醇100mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，移?0mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

2.2.2專屬性考察：照處方、工藝制備缺連翹藥材的陰性樣品，并取試驗(yàn)樣品1.0g，同上述“2.2.1.2”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備缺連翹陰性樣品溶液。

精密吸取陰性樣品溶液、對(duì)照品溶液、供試品溶液各10μL，按上述確定的色譜條件進(jìn)行分析。結(jié)果表明陰性樣品對(duì)連翹苷測(cè)定無干擾，供試品色譜中連翹苷色譜峰與周圍峰分離度良好。

2.2.3線性關(guān)系：取連翹苷約20mg，精密稱定，置50mL量瓶中，加稀釋劑溶解并稀釋到刻度，搖勻。量取1.0mL、2.5mL、5.0mL、7.5mL、9.0mL，分別置于25mL量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻。分別取上述溶液20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積A為縱坐標(biāo)，以濃度C(μg/mL)為橫坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程。結(jié)果：回歸方程為A =56700C+12699，R=0.9998，表明連翹苷濃度在26.9～134.5μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.4回收率試驗(yàn)：取已知含量的本品內(nèi)容物適量，稱取6份，每份約0.2g，精密稱定，加入一定量的連翹苷對(duì)照品溶液，分別使得連翹苷的加入量為已知含量供試品中連翹苷含量的75%、100%和125%，置于錐形瓶中，按既定方法制樣、測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果連翹苷的平均回收率為99.57%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.8%，符合要求。結(jié)果見表1。

2.2.5測(cè)定重復(fù)性：取本品，按含量測(cè)定方法配制供試品溶液。精密量取10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。連續(xù)測(cè)定6次，計(jì)算含量及其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果：平均含量為100.1%，RSD=0.21%，表明本方法重復(fù)性良好。

表1 連翹苷加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2.6中間精密度：取6批樣品，在不同日期，由不同分析人員，照含量測(cè)定方法測(cè)定含量，考察方法的精密度。結(jié)果：平均含量為100.5%，RSD=0.49%，表明該方法精密度良好。

2.2.7溶液穩(wěn)定性：取本品，按含量測(cè)定方法配制供試品溶液。分別在室溫條件下于第0、1、2、4、8、10h，各精密量取10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)的含量。結(jié)果：本品含量隨時(shí)間增加而降低，但在8個(gè)h內(nèi)基本穩(wěn)定，因此，含量測(cè)定時(shí)供試品溶液臨測(cè)前配制。

2.2.8供試品含量測(cè)定：取本品3批，按含量測(cè)定方法測(cè)定，結(jié)果：三批供試品的含量均在標(biāo)示量的95.0%～105.0%范圍內(nèi)，符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求。

3 討 論 筆者在建立連翹苷的含量檢測(cè)方法中，著重考察了色譜柱、流動(dòng)相、pH值、流速、溫度等參數(shù)對(duì)測(cè)定結(jié)果的穩(wěn)定性、精密性影響，最終優(yōu)選出的HPLC方法靈敏、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)，有效成分連翹苷濃度在26.9～134.5μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，此方法操作簡(jiǎn)便，可行，精密度高。

此外，筆者還曾嘗試對(duì)連翹、金銀花、梔子等藥物中的有效成分建立“一測(cè)多評(píng)”的質(zhì)量監(jiān)控、評(píng)價(jià)方法，然由于試驗(yàn)方法的穩(wěn)定性及其精密性尚需進(jìn)一步優(yōu)選，因此，文中未曾提及，此后將進(jìn)一步探索研究。

[1] 王月茹,趙 濤,盧 露,等.陜產(chǎn)中藥鐵筷子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].陜西中醫(yī)，2012，33(6)：739-740.

[2] 王月茹,趙 濤,盧 露,等.陜產(chǎn)中藥鐵筷子顯微鑒別研究[J].陜西中醫(yī)，2012，33(10)：1416-1417.

[3] 阮 鳴.金銀花揮發(fā)油的萜類化學(xué)成分研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2005,16(1)：59-60.

[4] 張曉紅,王月茹,盧新義,等.高效液相色譜法測(cè)定千金救心膠囊中延胡索乙素含量[J].陜西中醫(yī),2013,07:895-897.

[5] 彭修娟,楊新杰,王月茹.逍遙顆粒水提工藝研究[J].陜西中醫(yī),2014,09:1251-1252.

(收稿2014-08-27；修回2014-10-09)

連翹苷/分析 色譜法，高壓液相 @解毒止痛顆粒

R284

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.01.053

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