陳偉銘 竇建衛(wèi) 王靜怡 王 凌 路 波 陜西省中醫(yī)藥研究院(西安 710003)

正交試驗優(yōu)選養(yǎng)心開郁片醇沉工藝*

陳偉銘 竇建衛(wèi)△王靜怡▲王 凌 路 波 陜西省中醫(yī)藥研究院(西安 710003)

目的:優(yōu)選養(yǎng)心開郁片醇沉工藝條件。方法：以出膏率和黃芪甲苷含量為指標，采用L9(34)正交試驗法，優(yōu)選養(yǎng)心開郁片醇沉工藝條件。結果：最佳醇沉最佳工藝條件為：藥液濃縮至相對密度1.10～1.20(60℃)，加入乙醇使含醇量達60%，靜置時間24h。結論：經(jīng)正交試驗優(yōu)選養(yǎng)心開郁片的醇沉工藝是科學可行的。

養(yǎng)心開郁片是王靜怡主任醫(yī)師的經(jīng)驗方，用于治療輕-中度抑郁癥。具有斂陰清火、益氣養(yǎng)心之功，用于失眠多夢、心悸氣短、心神郁悶、淡漠無欲等癥。本文采用L9(34)正交設計試驗對該制劑的水提醇沉工藝進行優(yōu)選，確保養(yǎng)心開郁片的質量和療效。

1 試藥與儀器 1.1 試 藥 黃芪甲苷對照品(供含量測定用，批號：110781-200311)購于中國藥品生物制品研究院；甲醇是色譜純(TEDIA公司)；水是超純水；其他試劑均為分析純。

1.2 儀 器 高效液相色譜儀(ELSD-3000型蒸發(fā)光散射檢測器；N2010色譜工作站；Lab Alliance型恒流泵)。

2 方法與結果 2.1 醇沉工藝正交試驗設計 醇沉工藝與醇沉前藥液的相對密度、醇沉時的含醇量、靜置時間等因素關系密切。為選擇最佳醇沉工藝條件，選用L9(34)正交設計表，以出膏率和黃芪甲苷含量作為考察指標，進行試驗，其因素水平表見表1。

表1 醇沉因素水平表

2.2 試驗步驟 按處方比例稱取紅參、黃芪、五味子等四味藥共132g，加水浸泡2h，水煎煮提取2次，濾過，合并濾液，濃縮藥液，加入乙醇使含醇量達一定濃度，靜置，取上清液分別測定出膏率及黃芪甲苷含量。

2.3 出膏率測定 精密量取濃縮液20mL，回收乙醇至無醇味，放于恒重的蒸發(fā)皿中水浴烘干，105℃烘箱中烘干至恒重，取出并置于干燥器中放冷，稱重，計算出膏率。

2.4 黃芪甲苷含量測定 2.4.1色譜條件：色譜柱：Diamosil C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；蒸發(fā)光散射檢測器：漂移管溫度75℃，氮氣流速2.5L·min-1。流動相：乙腈-水(32:68)；按黃芪甲苷峰計算理論板數(shù)應不低于4000。

2.4.2測定方法[1-4]：取黃芪甲苷對照品，加入甲醇，配置成對照品溶液(0.5mg /1mL),稱取適量出膏率項下浸膏粉，加水溶解后，用水飽和的正丁醇提取5次，分別提取35，35，20，20，15mL，合并后再用氨試液洗滌4次，分別提取25，20，20，20mL，棄去氨液，蒸干正丁醇液，加熱水10～20mL使殘渣溶解，充分冷卻后通過D101型大孔吸附樹脂柱(內徑1.5cm ，長12cm)，以水50mL洗脫，棄去水液。用40%乙醇30mL洗脫，棄去40%乙醇洗脫液，再用70%乙醇70mL洗脫，收集洗脫液后蒸干，用甲醇溶解，轉移至 5mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，過0.22μm微孔濾膜，作為供試品溶液；精密吸取供試品溶液20μL，對照品溶液10μL，20μL，注入液相色譜儀測定，用外標兩點法對數(shù)方程計算。

2.5 醇沉工藝正交試驗結果 選擇黃芪甲苷的提取量與出膏率的綜合評分作為此次試驗的評價指標。黃芪甲苷的含量權重系數(shù)定為0.6，出膏量權重系數(shù)定為0.4。醇沉工藝進行了9次試驗，試驗數(shù)據(jù)、方差分析結果見表2、3。

表2 醇沉L9(34) 正交試驗表

表3 醇沉工藝方差分析表

注：F0.05(2，2)=19.0，F(xiàn)0.01(2，2)=99.0。

方差分析結果表明：含醇量對評價指標有顯著性的影響，由正交試驗結果可以看出，最佳工藝為A2B2C2，即藥液濃縮至相對密度1.10～1.20(60℃測)，加入乙醇使含醇量達60%，攪勻后靜置24h。

2.6 驗證試驗 按處方量稱取各藥材共1320g，共三份，按照所選提取條件以及醇沉條件試驗，進行純化，結果黃芪甲苷含量為0.37mg/g(RSD=1.35%)，出膏率為24.65%(RSD=1.78%)。驗證試驗結果表明，優(yōu)化得到的醇沉工藝穩(wěn)定可行。因此確定養(yǎng)心開郁片的醇沉工藝為：藥液濃縮至相對密度為1.10～1.20(60℃)測，加醇使含醇量達60%，靜置24h。

3 討 論 對養(yǎng)心開郁片的水提液進行了醇沉精制，以黃芪甲苷含量及出膏率作為考察指標。正交試驗結果經(jīng)直觀和方差分析表明，含醇量是影響醇沉工藝的主要因素，最終確定養(yǎng)心開郁片的醇沉工藝為：藥液濃縮至相對密度為1.10～1.20(60℃)測，加醇使含醇量達60%，靜置24h。驗證試驗表明，該工藝穩(wěn)定可行，為該制劑的進一步研究開發(fā)利用奠定了扎實的實驗基礎。醇沉精制后，除去了藥材中較多的雜質，減少了給藥劑量，提高了藥物的穩(wěn)定性。

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(收稿2014-08-08；修回2014-09-13)

*陜西省科技統(tǒng)籌創(chuàng)新工程計劃項目(2011KTCQ03-01)

工藝學, 制藥 正交試驗 @養(yǎng)心開郁片

R284

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.01.052

△西安交通大學醫(yī)學院 (西安 710061)

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