延安大學附屬醫(yī)院腫瘤科(延安 716000) 馮 蓓 楊衛(wèi)衛(wèi) 楊小平 馮 艷

·臨床病理·

p16基因在不同非小細胞肺癌之間的表達比較

延安大學附屬醫(yī)院腫瘤科(延安 716000) 馮 蓓 楊衛(wèi)衛(wèi) 楊小平 馮 艷

目的：探討p16基因在不同類型非小細胞肺癌中的表達。方法：采用鏈霉素抗生物素-過氧化酶免疫組化法(SP法)檢測63例非小細胞肺癌患者及26例肺良性病變患者中p16蛋白的表達情況。結果：肺良性疾病組織中p16蛋白陽性率為100%，而非小細胞肺癌組織中P16蛋白陽性率為47.62%，兩者相比有顯著性差異(P<0.05);不同組織、非小細胞肺癌不同發(fā)展階段的p16蛋白表達情況也呈顯著性差異(P<0.05)。結論：p16的基因表達率與非小細胞肺癌不同組織類型有明顯差異；p16的基因表達率會隨著非小細胞肺癌的發(fā)展階段產生不同的變化。

原發(fā)支氣管肺癌，簡稱肺癌，是最常見的惡性腫瘤之一，也是人類癌癥死亡的主要原因之一，無論男女，其發(fā)病率和病死率呈逐年上升趨勢，其中病死率已占癌癥病死率之首[1]。但早期肺癌癥狀不易表現出來，75 %以上的患者在確診時腫瘤已局部進展或發(fā)生轉移，在這些患者中只有將近5%的肺癌患者診斷后存活能夠超過5年以上[2]。大多數患者在臨床診斷時已屬晚期，隨著腫瘤分子生物學研究領域的發(fā)展，許多人在研究腫瘤基因的異常表達與腫瘤的關系中發(fā)現，在肺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中常伴隨著一些腫瘤基因的異常變化。近年來肺癌的早期診斷越來越受到重視[3]，因此檢測人體組織中某些基因的異常變化對肺癌的早期診斷及惡性程度的判定具有一定的臨床意義[4]。腫瘤抑癌基因的重要關鍵點就是防止細胞周期發(fā)生紊亂而引起的無限制的細胞增殖。p16基因就是這樣一種抑癌基因，若p16一旦失活，失活后的p16蛋白對細胞的抑制作用減弱，就會引起細胞的增殖加快[5]，使細胞周期調節(jié)失去控制，無限制的進入了S期。后果就是導致腫瘤細胞逃避負性調控[6]而引起惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展。p16基因異常是腫瘤發(fā)生與發(fā)展過程中一個重要的因素[7]，尤其是在侵襲力更強的腫瘤中p16 的過表達作用更明顯[8]?？梢娫趷盒阅[瘤中的起因和發(fā)展與p16基因的失活有著重要的聯系，需要我們人類對其有更加深入廣泛的研究。本研究采用免疫組化技術大范圍檢測不同類型及階段非小細胞肺癌組織中p16蛋白的表達陽性率，旨在為臨床診斷提供更為有效的依據。

資料與方法

1 臨床資料 收集我院病理證實的肺癌患者63例，其中男39例，女24例，年齡38～71歲，平均53歲。鱗癌36例，腺癌27例。TNM作為分期標準：I期22例，II期19例，III期22例。高、中分化40例，低分化23例；伴有淋巴結轉移36例，無轉移者27例。另選肺良性患者26例為對照組，其中男15例，女11例，年齡24～72歲，支氣管擴張9例，肺炎性甲瘤5例，結核12例。

2 研究方法 取患者手術后切除的新鮮病變組織標本。通過用10%的甲醛溶液固定，石蠟包埋，最后制成厚4μm的切片，用鏈霉素抗生物素-過氧化酶免疫組化法(SP法)對組織標本進行p16蛋白染色，應用圖像分析系統(tǒng)進行定量灰度掃描后進行分析。分析p16蛋白表達情況。免疫組化染色：嚴格按照試劑盒說明書進行每一項實驗步驟。

3 結果判定 棕色顆粒(見圖2)為p16蛋白的陽性反應，圖1為p16蛋白對照組。陽性細胞等級劃分：<5%; 5%～25%;25%5～0%;50%～75%;>75%。

4 統(tǒng)計學處理 本研究采用χ2檢驗與Spearman等級相關法，以P<0.05為有顯著性差異，P<0.01為有極顯著性差異。

結 果

1 非小細胞肺癌不同類型及發(fā)展階段之間p16蛋白的表達差異 見附表。非小細胞肺癌p16蛋白表達與組織學類型、TNM分期、淋巴結轉移相關(P<0.05)，與分化程度無關(P>0.05)。

2 兩組患者p16蛋白表達率比較 見圖1～2。良性肺組織中的p16蛋白表達率達到了100%，遠高于各肺癌組織中該基因蛋白的表達率(47.62%，30/63)，兩組患者間有顯著性差異(P<0.05)。

討 論

p16屬于腫瘤抑癌基因，在染色體的9p21區(qū)[3]；通過參與細胞周期的進程，抑制了細胞的增殖和分裂，直接參予調控的一種細胞周期的基本基因。 p16基因編碼的蛋白可以把細胞阻滯在G1期，阻止細胞進入S期。p16基因的失活最終的結果就是導致了細胞周期的正常調控，使得細胞異常增殖和腫瘤的發(fā)生?；蛉笔АⅫc突變及甲基化異常均可使p16失活[9]。p16基因失活后則無法通過表達蛋白與CDK4-CyclinD復合物結合，使細胞無限制進入G1/S期，并加速分裂，后果就是導致腫瘤細胞逃避負性調控[6]而引起惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展。因此，p16基因在發(fā)生任何異常時，都可以導致惡性腫瘤的發(fā)生。腫瘤與基因的改變有著重要的聯系[10]，已有實驗針對p16基因甲基化，證實對肺癌的早期診斷有一定的臨床意義[11]。由于p16本身其具有重要的生物學功能，同時它具有純合性缺失或突變存在很多的腫瘤組織中，使得p16基因可以用于癌癥靶標的治療。同時p16基因的分子量小，在用于基因的診療過程中，更加方便，更加容易操作。并且與其他的腫瘤基因的相互作用中，可以發(fā)揮更好的協(xié)同作用，抑癌的作用得到了加強。這對靶向藥物的發(fā)明有著極其重要的臨床意義[12]。

附表 不同類型及發(fā)展階段之間肺癌p16蛋白的表達差異

圖1 p16蛋白對照組

圖2 p16蛋白陽性反應組

本研究結果得出：p16蛋白在良性肺病變組織中的陽性率表達顯著高于肺癌病灶，表明p16蛋白的損失可能與p16基因失活有關，肺癌的發(fā)展有可能與該蛋白的表達缺失有關。腺癌和鱗癌的陽性表達率差異顯著，明顯高于鱗癌。Ⅰ～Ⅱ期肺癌陽性表達率顯著高于III期，淋巴結蛋白轉移的p16蛋白陽性率顯著下降(轉移的為19.44%，沒轉移的為62.96%)；可見，p16基因缺失的比例會隨著癌癥程度加重及發(fā)生轉移而增加，可用于預測肺癌的發(fā)展狀況，是一項很重要的指標。

最新研究表明：細胞周期蛋白復合物是用于調節(jié)G1的節(jié)點，其中，Rb蛋白磷酸化中起著必不可少的作用。TRIO-18研究已經證實PD 0332991(Palbociclib)在治療晚期乳腺癌中的有效性。Palbociclib可以選擇性地抑制CDK4和CDK6，是一種口服的靶向藥，它可以抑制腫瘤細胞的發(fā)展，使細胞周期的調控恢復正常。在陳首慧[13]的研究中證實5-Aza-CdR能逆轉p16基因甲基化狀態(tài),5-Aza-CdR有可能作為肺癌治療的有效藥物。

因此，檢測p16基因在肺癌組織中的表達水平，是對臨床的早期診斷，及判斷腫瘤的性質及預后的一項重要指標，對潛在的靶向藥物治療提供了一定的依據。

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(收稿：2014-12-10)

癌，非小細胞肺/病理學 肺疾病/病理學 蛋白/代謝 @p16蛋白

R734.2

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10.3969/j.issn.1000-7377.2015.05.045