談暠媛　魯小翠

摘要：針對飼料中維生素A含量的檢測方法-HPLC進(jìn)行了詳細(xì)的解析，對各個步驟應(yīng)該注意的事項(xiàng)進(jìn)行了歸納總結(jié)，為飼料中維生素A的含量檢測提供參考意見。

關(guān)鍵詞：維生素A；皂化法；高效液相色譜

中圖分類號：S816.2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B 文章編號：1007-273X（2014）12-0062-01

維生素是動物所需的五大營養(yǎng)素之一。其中維生素A的主要營養(yǎng)作用有：維生素A是視紫紅質(zhì)（感光色素）的重要組成成分，維持正常視覺功能；維生素A可保護(hù)上皮組織，防止上皮細(xì)胞萎縮、角化，保護(hù)呼吸道、消化道、生殖泌尿器官黏膜，利于公畜精子生成；增強(qiáng)動物免疫力，促進(jìn)骨骼發(fā)育。

維生素A的化學(xué)名是視黃醇，呈淡黃色油狀物，易氧化，遇光易變質(zhì)。在飼料中的維生素A是通過附著在一定載體上以視黃醇乙酸酯或視黃醇棕櫚酸酯的形式添加進(jìn)去的[1，2]。

1 方法解析

目前檢測飼料中維生素A的含量主要是分為皂化法[3]和直接提取法。直接提取法主要適用于維生素預(yù)混料，定量限較高。皂化法一般適用于維生素A含量較低的配合料、濃縮料及復(fù)合預(yù)混料。

針對GB/T 17817-2010 《飼料中維生素A的測定 高效液相色譜法》中第一法皂化提取法提出幾點(diǎn)見解。

皂化法分為以下幾個步驟：皂化—提取—水洗至中性—濃縮—過膜—供高效液相色譜法檢測。

1.1 皂化

皂化是指在堿性環(huán)境下，油脂被水解生成羧酸鹽和醇的反應(yīng)。由于維生素A在酸性環(huán)境下不穩(wěn)定，在堿性環(huán)境下穩(wěn)定，易氧化，耐熱性好。所以維生素A的皂化步驟是在堿性環(huán)境下，加入抗氧化劑抗壞血酸，在沸水浴上回流30 min，將維生素A提取出來，將其他成分轉(zhuǎn)化成可溶于水的成分。需注意的是：①L-抗壞血酸乙醇溶液易氧化，所以最好臨用新配；②在回流過程中需不時振蕩皂化瓶，防止試樣粘附瓶壁，導(dǎo)致皂化不充分；③皂化結(jié)束時用5 mL無水乙醇和5 mL水自冷凝水頂端沖洗其內(nèi)部，將附在冷凝管內(nèi)壁上的蒸汽水滴沖洗下去。

1.2 提取

提取是用無水乙醚將維生素A（不皂化物）從皂化后的溶液中提取出來。由于維生素A是脂溶性維生素，不溶于水，易溶于乙醚，所以可通過液液萃取的方式將維生素A提取出來，并去除水溶性物質(zhì)。需注意的是：①第一次液液萃取時，需用50 mL的水分2～3次沖洗皂化瓶，將瓶底的殘?jiān)芙獠⑷敕忠郝┒分?；②一開始振搖時要緩慢，并不時開蓋放氣，待氣量減小后，再劇烈充分地振搖。

1.3 水洗

水洗是每次用100 mL水洗滌提取后的乙醚，直至水層洗至中性。需注意的是：①第一次水洗時振搖力度要小，可防止乳化不易分層，逐次水洗時振搖力度可增強(qiáng)；②由于水和乙醚有一定程度的互溶性，每個樣品水洗的次數(shù)要相同，否側(cè)對樣品的平行性有影響。

1.4 濃縮

濃縮是將洗至中性的乙醚提取液通過無水硫酸鈉脫水，轉(zhuǎn)移至250 mL棕色容量瓶中，加100 mg BHT溶解，用乙醚定容至刻度。再從中分取一定體積置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器燒瓶中，部分真空旋干或者氮?dú)獯蹈?。需注意的是：①脫水時可將乙醚提取液通過裝有約5 g無水硫酸鈉的濾紙，無水硫酸鈉一定要是粉末狀，有結(jié)塊時需烘干再使用，并且乙醚提取液通過的速度不要太快，否則均會影響脫水效果；②過濾完后，有一定量的乙醚提取液吸附在無水硫酸鈉上，需用10 mL的乙醚洗滌分液漏斗和無水硫酸鈉2～3次，將洗液并入容量瓶中；③水浴的溫度要控制在45 ℃左右，不能太高；④乙醚真空旋轉(zhuǎn)蒸干至3～5 mL，取下，立即用氮?dú)獯蹈?，或直接水浴蒸干。如果用真空旋轉(zhuǎn)將乙醚完全蒸干，維生素A含量損失較大，且氮吹時氮?dú)獠荒荛_太大，避免樣品吹出瓶外。

1.5 溶解測定

將吹干后的殘?jiān)谜和椋ㄕ嗌V檢測）或甲醇（反相色譜檢測）溶解稀釋，使維生素A最后濃度在5 ～10 IU/mL，通過0.45 μm過濾膜過濾，用于高效液相色譜儀分析。經(jīng)過試驗(yàn)證明，可用無毒的無水乙醇代替甲醇溶解殘?jiān)?/p>

2 小結(jié)

在試驗(yàn)中還應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：①檢測樣品要密封保存，避光（避免日光和暴曬）；②檢測的飼料樣品不能研磨，研磨會導(dǎo)致樣品溫度過高并破壞維生素A的包被，使其容易氧化，對維生素A的含量測定有影響；③試驗(yàn)時應(yīng)避光，在通風(fēng)柜里進(jìn)行，盡量使用棕色玻璃器皿；④分液漏斗振搖后，靜置的時間一定要長，大約10 min左右；⑤檢測時標(biāo)準(zhǔn)品和樣品同時皂化處理可以相互抵消皂化過程中維生素A的熱損失。

參考文獻(xiàn)：

[1] 錢玲慧，廖佳宇，李亞妮，等.測定維生素A的三種方法比較[J].實(shí)驗(yàn)技術(shù)與管理，2012（5）：43-48.

[2] 蘇佳妍，岳青陽，于大海，等.維生素A含量測定方法的研究[J].山西醫(yī)藥雜志，2010，39（6）：557-558.

[3] GB/T 17817-2010飼料中維生素A的測定 高效液相色譜法[S].2010.