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(廣東省佛山市第一人民醫(yī)院檢驗科 528000)

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·論 著·

Grubbs法在酶聯(lián)免疫吸附試驗乙型肝炎兩對半室內(nèi)質(zhì)控的應(yīng)用探討

伍啟康，陳斌鴻，陳展?jié)?，鄭雪蓮，戴偉?/p>

(廣東省佛山市第一人民醫(yī)院檢驗科 528000)

目的 探討Grubbs法結(jié)合±3 s、±2 s和7T規(guī)則在乙型肝炎兩對半酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)定量檢測中的臨時室內(nèi)質(zhì)控的可行性。方法 查閱同一質(zhì)控批號的ELISA乙型肝炎兩對半定量檢測的連續(xù)20批室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)，并對Grubbs法結(jié)合±3 s、±2 s和7T規(guī)則應(yīng)用進行統(tǒng)計分析。結(jié)果 ELISA乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎表面抗體(HbsAb)、乙型肝炎E抗原(HbeAg)定量測定中20次測定值均處于在控狀態(tài)；乙型肝炎E抗體(HbeAb)定量測定中Grubbs法顯示20次測定值均處于在控狀態(tài)，但第13次測定結(jié)果違反了±2 s規(guī)則，判定為警告狀態(tài)，保留數(shù)據(jù)，且予以注意，積極分析原因，避免后續(xù)的檢測繼續(xù)警告甚至失控；乙型肝炎核心抗體(HbcAb)測定20次測定值均處于在控狀態(tài)。結(jié)論 Grubbs法結(jié)合±3 s、±2 s和7T規(guī)則能作為ELISA乙型肝炎兩對半定量檢測的臨時室內(nèi)質(zhì)控方法。

Grubbs法； 酶聯(lián)免疫吸附試驗； 室內(nèi)質(zhì)控

室內(nèi)質(zhì)量控制(IQC)是臨床實驗室檢測結(jié)果可靠性的前提，做好IQC是臨床實驗室檢測質(zhì)量的保證。國內(nèi)大部分市縣級醫(yī)院普遍應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)來檢測乙型肝炎兩對半，ELISA試劑盒的有效期短，批號更換頻繁，短時間內(nèi)難以積累最佳條件下20次質(zhì)控物的檢測結(jié)果[1]。Grubbs法是一種離群值檢驗的統(tǒng)計方法，該法只需測定3次，即可對第3次結(jié)果進行質(zhì)控分析，適用于試劑有效期短，批號更換頻繁或不常開展的檢驗項目[2]。但Grubbs法也存在著自身的缺陷，具體表現(xiàn)為“回顧性失控檢出”現(xiàn)象和前3次測定結(jié)果對后續(xù)質(zhì)控結(jié)果的影響較大，不能直接用于本室日常的IQC。因此，作者探討了Grubbs法結(jié)合±2 s、±3 s和7T規(guī)則作為ELISA乙型肝炎兩對半定量檢測臨時IQC的可行性，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗試劑 ELISA乙型肝炎兩對半定量檢測試劑盒[豐華公司，乙型肝炎表面抗原(HBsAg)試劑批號201112003，乙型肝炎表面抗體(HbsAb)試劑批號201205001，乙型肝炎E抗原(HbeAg)試劑批號201209002，乙型肝炎E抗體(HbeAb)試劑批號201208002，乙型肝炎核心抗體(HbcAb)試劑批號201203002]。

1.1.2 質(zhì)控血清

1.1.3 實驗儀器 全自動酶免疫分析儀(安圖Auto CLIA)。

1.2 方法

1.2.1 乙型肝炎兩對半定量檢測 采用ELISA法進行檢測，嚴格按照試劑盒操作步驟和全自動酶免儀的操作要求進行檢測。

1.2.3 結(jié)合其他規(guī)則分析 在應(yīng)用Grubbs法對測定值進行室內(nèi)質(zhì)控分析的同時，結(jié)合±2 s、±3 s和7T規(guī)則，±2 s為警告規(guī)則，±3 s和7T為失控規(guī)則。當Grubbs法與以上3個規(guī)則相矛盾時，應(yīng)當從Grubbs法與±2 s、±3 s和7T規(guī)則的適用條件、質(zhì)控方法的性能與缺陷以及測定值的統(tǒng)計學分析結(jié)果綜合判定可疑測定值的質(zhì)控狀態(tài)，確保室內(nèi)質(zhì)控的及時準確，保障實驗室檢測結(jié)果的質(zhì)量。

2 結(jié) 果

2.1 Grubbs法質(zhì)控分析結(jié)果 將獲得的20次質(zhì)控測定值按照Grubbs法的操作進行統(tǒng)計分析，HbsAg、HbsAb、HbeAg、HbeAb所得結(jié)果均處于在控狀態(tài)；HbcAb的20次質(zhì)控測定值按照Grubbs法的操作進行統(tǒng)計分析，顯示第3次測定值為1.72，可疑值為1.72，SI上限大于n2s且小于n3s，即處于“警告”狀態(tài)，而其后的測定值均處于在控狀態(tài)，如圖1所示，按照Grubbs法規(guī)則應(yīng)舍去可疑值1.72，重新測定再分析，則20次測定結(jié)果均處于在控狀態(tài)，如圖2所示，但圖2中出現(xiàn)比可疑值1.72大的測定值被判為在控的現(xiàn)象，觀察可見前兩次測定值相距較近，經(jīng)分析應(yīng)將前兩次(1.12,1.03)看作一次測定取平均值(1.08)作為測定值，從第4次測定值開始進行質(zhì)控，則20次測定結(jié)果均處于在控狀態(tài)。

圖1 Grubbs法應(yīng)用于ELISA法HbcAb定量測定質(zhì)控分析結(jié)果(剔除可疑值前)

圖2 Grubbs法應(yīng)用于ELISA法HbcAb定量測定質(zhì)控分析結(jié)果(剔除可疑值后)

2.2 ±2 s、±3 s和7T規(guī)則質(zhì)控分析結(jié)果 ±2 s、±3 s和7T規(guī)則對質(zhì)控數(shù)據(jù)進行分析，除HbeAb定量測定中第13次測定結(jié)果違反了±2 s規(guī)則外，HbsAg、HbsAb、HbeAg、HbcAb的各個測定值均處于在控狀態(tài)。HbeAb具體質(zhì)控分析見圖3，該次測定數(shù)據(jù)判定為警告狀態(tài)，保留數(shù)據(jù)，且予以注意，積極分析原因，避免后續(xù)的檢測繼續(xù)告警甚至失控。

圖3 ±2 s、±3 s和7T規(guī)則應(yīng)用于ELISA法HbeAb定量測定質(zhì)控分析結(jié)果

3 討 論

目前，大部分臨床實驗室免疫學檢驗項目多采用ELISA的方法，其中乙型肝炎兩對半定量試劑盒的應(yīng)用較為廣泛，但ELISA試劑盒收到酶試劑的限制，有效期較短，批號更換頻繁，應(yīng)選擇一種更合適的質(zhì)控方法作為更換試劑盒批號時的臨時質(zhì)控方法，以便于在更換試劑盒批號保證檢驗質(zhì)量。

Grubbs法是一種離群值檢驗的統(tǒng)計方法，一組測定值中明顯偏離測定值群體的過大值或過小值稱為離群值，它可能是測定結(jié)果隨機波動的極值，也可能是與群體測定值非屬同質(zhì)總體的異常值[3]。Grubbs法用于正態(tài)分布的樣本中判斷異常值，應(yīng)用于室內(nèi)質(zhì)控即從所有質(zhì)控品測定值中判斷明顯偏離測定均值的可疑測定值是否為異常值，從而判斷檢測是否在控。由此可見，Grubbs法并不是判斷當次檢驗結(jié)果是否處于質(zhì)控狀態(tài)的方法，而是判斷當次及之前測定值中偏離均值最遠的測定值是否失控的方法。正因這一特點，Grubbs法存在著“回顧性失控檢出”的缺陷，具體表現(xiàn)為在測定次數(shù)較少時有些離群值可能不一定會顯示失控，但隨著測定次數(shù)增加，測定值逐漸趨于穩(wěn)定，這時以前的離群值將“暴露”出來顯示為失控，這些離群值稱為“遲后異常值”[4]。這種情況多出現(xiàn)在最初幾次測定、均值及標準差不斷改變和CV偏大時，觀察結(jié)果可見本研究各項質(zhì)控測定值CV大部分在25%以內(nèi)，結(jié)合±2 s、±3 s規(guī)則即可避免“回顧性失控檢出”現(xiàn)象。

值得注意的是，本次質(zhì)控過程中出現(xiàn)了Grubbs法對可疑值的錯判現(xiàn)象(圖1)。HbcAb定量測定中第3次測定值1.72按照Grubbs法判定應(yīng)當刪去，應(yīng)重新測定作統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)，表1中第11次測定值為1.83，第18次測定值為1.82，這兩個測定值均比可疑值1.72大，但都判定為在控狀態(tài)，這種結(jié)果可歸因于前兩次測定值(1.12和1.03)相距較近，而跟第3次測定結(jié)果相距較遠。當前3次測定值的CV值小于5%時，第4個在控數(shù)據(jù)允許CV值范圍超過16%就提示失控[5]，作者認為當前兩個測定值相距較近時，對第3個測定值的允許CV值范圍就越小，則對第3個測定值的判定越容易出現(xiàn)假失控。文獻[6]也表明若測定過程中前兩次測定值相等時，SI上限和SI下限均為一常數(shù)，此時Grubbs法已不能起到監(jiān)控作用，這種問題是由于樣本量少，造成的抽樣誤差引起的，解決方法是增加樣本量，把兩次相同的測定值看成是一個測定結(jié)果，從第4次測定值開始進行質(zhì)控。由后期制作的L-J圖作回顧分析時也可見可疑值1.72并未失控，此時應(yīng)結(jié)合±2s、±3s和7T規(guī)則作出判斷。作者認為應(yīng)取前兩次測定值的平均值作為一次測定的結(jié)果，保留可疑值1.72，從第4次測定開始作質(zhì)控分析，則20次測定值均處于在控范圍，這一結(jié)果也符合L-J圖回顧分析的結(jié)果。HbeAb定量測定中Grubbs法顯示20次測定值均處于在控狀態(tài)，但第13次測定結(jié)果2.39違反了±2 s規(guī)則，應(yīng)當結(jié)合實際分析，可疑值未違反Grubbs法失控規(guī)則，此結(jié)果判定為“警告”，可保留數(shù)據(jù)但應(yīng)予以注意，積極分析原因，避免后續(xù)的檢測繼續(xù)告警甚至失控。

Grubbs法主要使用于定量分析，只要質(zhì)控測定值在在控條件下呈正態(tài)分布的情況下皆可應(yīng)用[7]。文獻[8]報道Grubbs法前3次測定值對后續(xù)測定值的質(zhì)控影響較大，易出現(xiàn)假失控和假在控，沈菁等[3]認為可結(jié)合實驗室的實際情況，制訂合適的允許CV范圍，可減少假失控和假在控的結(jié)果，作者認為是一種合理、可行之法。

本研究表明Grubbs法結(jié)合±3 s、±2 s和7T規(guī)則能作為ELISA乙型肝炎兩對半定量檢測臨時室內(nèi)質(zhì)控方法是可行的，當測定值累積到20次后，應(yīng)繪制L-J質(zhì)控圖作為日常室內(nèi)質(zhì)控方法。

[1]袁明月,文鴻雁,楊志,等.基于Grubbs準則的小波閾值改進研究[J].人民長江,2014,14(10):69-71.

[2]張璇,程敏熙,肖鳳平.利用Origin對數(shù)據(jù)異常值的剔除方法進行比較[J].實驗科學與技術(shù),2012,1(10):74-76.

[3]沈菁,徐如梅,池春燕,等.即刻法用于酶聯(lián)免疫吸附試驗室內(nèi)質(zhì)控的探討[J].海南醫(yī)學,2009,20(4):11-13.

[4]丁海明,潘婉儀.ELISA定性實驗“即刻法”室內(nèi)質(zhì)控的評價與應(yīng)用[J].現(xiàn)代醫(yī)學檢驗雜志,2009,24(3):28-30.

[5]陳飛.即刻法在手工ELISA室內(nèi)質(zhì)控方法中的探討和改良[J].國際檢驗醫(yī)學雜志,2011,32(19):2242-2243.

[6]段紅蕾,吳青梅,李潔,等.Grubbs與Levey-Jennings質(zhì)控圖在唐氏篩查質(zhì)量控制中的應(yīng)用[J].檢驗醫(yī)學,2009,2(10):155-156.

[7]秦曉光.如何正確理解和使用“即刻性”質(zhì)控法[J].中華檢驗醫(yī)學雜志,2006,29(2):190-192.

[8]周守勤,孔斌,張作青,等.Grubbs法在酶聯(lián)免疫法室內(nèi)質(zhì)控中探討[J].臨床和實驗醫(yī)學雜志,2011,22(10):1791.

Study on application of Grubbs method in internal quality control for hepatitis B determination by ELISA

WUQi-kang,CHENBin-hong,CHENZhan-ze,ZHENGXue-lian,DAIWei-liang

(DepartmentofClinicalLaboratory,FoshanMunicipalFirstPeople′sHospital,Foshan,Guangdong528000,China)

Objective To investigate the feasibility of the Grubbs method combined with the ±3 s,±2 s and 7Trule applied to the temporary internal quality control method for hepatitis B determination by ELISA.Methods The continuous 20 batches of internal quality control data in the hepatitis B quantitative determination by ELISA at the same quality control batch number were consulted and the application of Grubbs method combined with the ±3 s,±2 s and 7Trule was statistically analyzed.Results The 20 times detection values in the HBsAg,HbsAb and HbeAg quantitative determination by ELISA were in the controlled state;the 20 times detection values displayed by the Grubbs method in the HbeAb quantitative determination were in the controlled state,but the thirteenth detection results violated the ±2 s rule,which was judged as a warning condition,its data were retained and paid attention,the reasons were actively analyzed to avoid the subsequent determination being warning or out of control again;the 20 times detection values in the HbcAb quantitative determination by ELISA were in the controlled state.Conclusion The Grubbs method combined with the ±3 s,±2 s and 7Trule can be used as the temporary internal quality control method for hepatitis B determination by ELISA.

Grubbs method; ELISA; internal quality control

伍啟康，男，本科，副主任技師，主要從事臨床檢驗工作。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.14.048

A

1672-9455(2015)14-2088-02

2015-02-25

2015-03-20)