但 剛，胡莉娜，江忠勇，劉 媛，耿 雪，謝 靜，熊 杰(成都軍區(qū)總醫(yī)院臨床實驗醫(yī)學研究與保障中心檢驗科/高濕醫(yī)學全軍重點實驗室，成都 610083)

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膿毒癥患者血小板功能相關指標檢查及臨床意義*

但 剛，胡莉娜，江忠勇，劉 媛，耿 雪，謝 靜，熊 杰△(成都軍區(qū)總醫(yī)院臨床實驗醫(yī)學研究與保障中心檢驗科/高濕醫(yī)學全軍重點實驗室，成都 610083)

目的 探討膿毒癥患者血小板聚集功能及P選擇素、活化GPⅡb/Ⅲa等血小板活化指標的變化及其意義。方法 檢測56例膿毒癥患者血小板聚集功能及P選擇素、活化GPⅡb/Ⅲa的變化。將膿毒癥患者分為器官功能不全組和器官功能正常組進行比較分析，并與50例健康對照組進行比較。結果 膿毒癥患者血小板聚集率顯著升高，與健康對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，血小板表面表達的P選擇素、活化GPⅡb/Ⅲa明顯升高，與健康對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；器官功能不全組血小板聚集率及血小板表面表達的P選擇素、活化GPⅡb/Ⅲa與器官功能正常組比較顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結論 膿毒癥患者血小板處于高激活狀態(tài),血小板聚集率顯著升高，易導致患者發(fā)生血栓，血小板聚集率及活化指標可作為判斷臟器功能損害的指標之一。

膿毒癥； 血小板聚集； P選擇素； GPⅡb/Ⅲa

目前研究指出，感染膿毒癥后極易誘發(fā)全身炎癥反應綜合征(SIRS)，其主要原因是血小板和中性粒細胞在受到感染、燒傷、外科大手術、中毒后通過瀑布放大反應，導致各種致炎因子，如白細胞介素、腫瘤細胞的激活，引起膿毒癥性休克、多器官功能障礙綜合征[1]。而且據(jù)文獻[2]報道膿毒癥發(fā)生后若不積極治療，可以導致病情迅速進展，有30%～45%的病死率。因此，對膿毒癥的治療成為臨床工作的重點。有學者發(fā)現(xiàn)臨床進行抗血小板藥物治療可對膿毒癥的預后有所改善。本文選擇2013年3月至2014年3月本院重癥醫(yī)學科收治的56例膿毒癥患者作為研究對象，探討膿毒癥患者血小板聚集功能及P選擇素、活化GPⅡb/Ⅲa等血小板活化指標的變化及其意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年3月至2014年3月本院重癥醫(yī)學科收治的56例膿毒癥患者，均符合2001年美國危重病醫(yī)學會、美國胸科醫(yī)師學會和歐洲危重病醫(yī)學會聯(lián)席會上所定義的膿毒癥診斷標準[1]：符合下列感染參數(shù)中的2項以上和炎癥參數(shù)中的1項以上。感染參數(shù):(1)發(fā)熱(中心體溫超過38.3 ℃或低于36.0 ℃)；(2)心率(>90次/分)；(3)氣促(呼吸超過30次/分)；(4)意識改變；(5)水腫或液體正平衡大于20 mL/kg；(6)血糖大于7.7 mmol/L。炎癥參數(shù)：(1)白細胞增多癥(白細胞大于12.0×109/L或白細胞小于4.0×109/L)或血液中不成熟白細胞大于10%；(2)C反應蛋白(CRP)>正常2個標準差；(3)降鈣素原大于正常2個標準差。所診斷的膿毒癥患者中，發(fā)生一個以上臟器功能不全者31例，為器官功能不全組；臟器功能正常者25例，為器官功能正常組；抽取同期來院健康體檢者50例，設為健康對照組。3組研究對象年齡、性別構成比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

1.2 方法 抽取患者臥位靜脈血，血小板聚集功能檢查采用0.9%枸櫞酸鈉抗凝；血小板活化指標P選擇素、活化GPⅡb/Ⅲa檢測采用乙二胺四乙酸二鉀抗凝，各抽取3 mL待查。

1.3 檢測指標

1.3.1 血小板聚集功能檢測 采用美國Helena Laboratories公司生產(chǎn)的血小板聚集儀(AggRAM)進行檢測，誘導劑為Helena Laboratories Beaumont,TX生產(chǎn)的二磷酸腺苷(ADP)，ADP最終誘導濃度為5 μmol/L，配套磁珠及反應試管。

1.3.2 流式細胞儀檢測血小板活化指標 P選擇素、活化GPⅡb/Ⅲa選用美國Beckman Coulter公司生產(chǎn)的Epics XL流式細胞儀。試劑為單克隆抗體:血小板活化后期標志物(CD62P PE)為藻紅蛋白標記的抗P-選擇素的單克隆抗體，活化的GPⅡb/Ⅲa復合物(PAC-1FIT C)為異硫氰酸熒光素標記的抗GPⅡb/Ⅲa單克隆抗體(均購自美國BD公司)。

2 結 果

膿毒癥患者與健康對照組各項指標比較見表1。與健康對照組比較，膿毒癥患者血小板聚集率、P選擇素、活化GPⅡb/Ⅲa明顯升高，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。器官功能不全組與器官功能正常組相比，患者血小板聚集率、P選擇素、活化GPⅡb/Ⅲa均明顯升高，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

表1 膿毒癥患者與健康對照組各項指標比較±s,%)

注：與健康對照組比較，*P<0.05；與器官功能正常組比較，△P<0.05。

3 討 論

膿毒癥是由感染引起的SIRS，而且隨著病情的發(fā)展，膿毒癥可以逐步發(fā)展為休克和多器官功能障礙綜合征，最后導致死亡[3]。目前研究發(fā)現(xiàn)，臨床上危重癥患者中死亡的首要原因為膿毒癥，占30%～45%。因此采取合理的指標發(fā)現(xiàn)膿毒癥患者病情的發(fā)展，對于早期治療和早期干預有積極作用。

血小板由骨髓造血組織中的巨核細胞產(chǎn)生，定向分化成原始的巨核細胞，逐步成為成熟的巨核細胞[4]。血小板的變化對指導炎癥有重要作用。有學者取出膿毒癥合并多器官功能障礙綜合征患者血漿中的血小板，然后放入健康的白兔中，結果顯示，3 h后白兔體內(nèi)出現(xiàn)高凝狀態(tài)，大量血小板黏附于血管內(nèi)皮細胞中，而且隨著時間延長，白兔體內(nèi)出現(xiàn)彌散性血管內(nèi)凝血，大量組織器官微循環(huán)出現(xiàn)栓塞[5]。研究還發(fā)現(xiàn)，膿毒癥不僅增加血小板通過使白細胞介素-6轉錄因子活化,激活JAK激酶等酪氨酸激酶,增加對內(nèi)皮細胞的黏附性，還增強膿毒癥中受損內(nèi)皮細胞的凝血活性。此外血小板還具有調整血管機能的作用，釋放營養(yǎng)素，減少氧自由基毒性，維持血管的完整性[6-8]。

膿毒癥發(fā)生后，中性粒細胞通過激活免疫細胞膜Ⅱ類分子的表達，使P選擇素糖蛋白配體水平增高，加強與血小板表面結合，形成血小板-中性粒細胞聚集，當血小板磷酸化后，血小板黏附在表達有P選擇素糖蛋白的組織中，發(fā)生聚集和促進白色血栓形成[9]。本研究發(fā)現(xiàn)，膿毒癥患者血小板聚集率及血小板活化指標P選擇素、活化GPⅡb/Ⅲa均明顯升高，顯著高于健康對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；在膿毒癥患者中，器官功能不全組患者血小板聚集率及血小板活化指標P選擇素、活化GPⅡb/Ⅲa均明顯升高，顯著高于器官功能正常組患者，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。進一步說明血小板聚集率的升高及活化指標的升高與膿毒癥病情密切相關，由此提示在膿毒癥發(fā)病過程中出現(xiàn)明顯的血小板活化和聚集，活化的血小板形成循環(huán)血栓并黏附于血管內(nèi)皮上。內(nèi)源性凝血途徑與外源性凝血途徑活化血小板，使血小板可通過纖維蛋白互相聚集[10]；活化后的血小板自身以“自分泌”形式形成級聯(lián)放大效應，誘導更多血小板過度聚集，形成循環(huán)血栓[11]。

此外膿毒癥患者血小板激活程度與臟器功能損害程度有關,器官功能不全組患者均有一個或多個臟器受損，其血小板聚集率及血小板活化指標P選擇素、活化GPⅡb/Ⅲa均明顯高于器官功能正常組患者，顯示臟器功能損害越嚴重,血小板活性越高。由此提示血小板激活指標可作為判斷膿毒血癥患者臟器功能損害的指標之一[12-13]。

綜上所述,膿毒癥患者血小板膜糖蛋白顯著增高,激活的血小板與中性粒細胞、內(nèi)皮細胞等細胞的黏附作用增強，這可能誘發(fā)微循環(huán)障礙，容易發(fā)生多器官功能障礙。在臨床應用中，對膿毒癥患者血小板聚集功能及血小板活化指標P選擇素、活化GPⅡb/Ⅲa進行檢測，可用于指導評估患者的病情及預后判斷。

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Detection of platelet function related indicators in patients with sepsis and their clinical significance*

DANGang,HULi-na,JIANGZhong-yong,LIUYuan,GENGXue,XIEJingXIONGJie△

(DepartmentofClinicalLaboratory,CenterofClinicalLaboratoryMedicineandAssurance/theKeyLaboratoryofHighWetMedicine,GeneralHospitalofChengduMilitaryRegion,Chengdu,Sichuan610083,China)

Objective To explore the platelet aggregation function and the change of the P selectin,activated GPⅡb/Ⅲa in the patients with sepsis and their significance.Methods The platelet aggregation function and P selectin,activated GPⅡb/Ⅲa levels were detected in 56 cases of sepsis.The sepsis patients were divided into the organ dysfunction group and the normal organ function group for conducting the comparative analysis,and the comparison with 50 healthy controls were performed.Results The platelet aggregation rate in sepsis patients was significantly increased,showing the statistically significant difference compared with healthy control group(P<0.05),the levels of P selectin and activated GPⅡb/Ⅲis expressed on platelet surface were significantly increased,showing the statistically significant difference compared with healthy control group (P<0.05);the platelet aggregation rate and the levels of P selectin and activated GPⅡb/Ⅲexpressed on platelet surface in the organ dysfunction group were significantly increased compared with the normal organ function group,the difference was statistically significant(P<0.05).Conclusion The platelets in sepsis patients are in high activated state,and the platelet aggregation rate is significantly increased,which is easily cause the patients to develop thrombosis.The platelet aggregation rate and activated indexes can be used as the indicators for judging visceral function damage.

sepsis; platelet aggregation; P selectin; GPⅡb/Ⅲa

國家高技術研究發(fā)展計劃(863計劃)(2011AA02A111)；四川省衛(wèi)計委科研課題(140007)。

但剛，男，本科，主管技師，主要從事臨床血液學診斷。

△通訊作者，E-mail：byx410@sina.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.09.005

A

1672-9455(2015)09-1191-02

2014-10-24

2015-01-26)