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技術(shù)與方法

黔產(chǎn)藍布正基于總多酚含量的干燥方法研究

張建永1，楊曉偉1，段燦燦1，聶緒強1，裴 顯1，周清娣2

(1.遵義醫(yī)學院 藥學院,貴州 遵義563099；2.悉尼大學 化學學院，NSW2006澳大利亞)

[摘要]目的 黔產(chǎn)藍布正基于總多酚含量干燥方法的優(yōu)選。方法 建立紫外分光光度測定藍布正總多酚含量的方法，比較烘干法、晾干法及陰干法干燥對藍布正總多酚含量的影響。結(jié)果 建立的方法準確、快速、重復性好。第1批藍布正經(jīng)烘干法處理的總多酚含量明顯高于晾干法(6.53%vs. 5.84%)，與陰干法(6.58%)相當；第2批藍布正經(jīng)烘干法處理的總多酚含量也明顯高于晾干法(5.76%vs. 5.37%)，與陰干法相當(5.70%)；同時兩批烘干法的干燥時間少于晾干法、陰干法(19 hvs. 5 d, 5 d)。結(jié)論 烘干法可作為傳統(tǒng)方法的替代方法，為藍布正產(chǎn)地加工提供實驗依據(jù)。

[關(guān)鍵詞]藍布正；干燥方法；總多酚；含量測定

藍布正為薔薇科植物路邊青GeumaleppicumJacq.或柔毛路邊青GeumjaponicumThunb.var.chineseF.bolle的干燥全草，亦被稱為水楊梅，追風七，頭暈藥等[1]。貴州分布的多為柔毛路邊青，據(jù)本草記載，藍布正具益氣健脾，補血養(yǎng)陰等功效，用于氣血不足，脾虛帶下等[2]?，F(xiàn)代研究表明藍布正含有的化學成分為鞣質(zhì)多酚類、黃酮類、苯丙素類、三萜類化合物、揮發(fā)油類、氨基酸類和無機元素等[3-4]，其中多酚類化合物是其重要活性成分。沒食子酸是2010版《中國藥典》用于藍布正質(zhì)量控制的指標成分。目前藍布正的干燥方式多采用晾干法和陰干法，然而貴州省的亞熱帶高原季風濕潤氣候易使藥材發(fā)霉變質(zhì)，同時多酚類化合物在濕熱和強光環(huán)境中易被氧化，具有不穩(wěn)定性，因此是否可采用其他干燥方法取代之尚不清楚，亦未見基于藍布正中多酚類成分的含量比較不同干燥方法的實驗報道。本文采用烘干、晾干、陰干三種方法對藍布正進行干燥，通過比較總多酚含量優(yōu)選藍布正的干燥方法，為藍布正的產(chǎn)地加工提供實驗參考。

1材料與試劑

1.1儀器101-4型電熱鼓風恒溫干燥箱，上海市崇明實驗儀器廠；DHG-9123A 型電熱恒溫鼓風干燥箱，上海精宏實驗設(shè)備有限公司；FW177 型中藥材粉碎機，天津泰斯特儀器有限公司；TU-1901 型雙光束紫外可見分光光度計，北京普析通用儀器有限責任公司；電熱恒溫水浴鍋，中國上海科試實驗制造廠；KQ-500DE 型數(shù)控超聲清洗器，江蘇昆山超聲儀器廠；80-2B 型離心機，上海安亭科學儀器廠。

1.2試藥沒食子酸(批號：110831-201204)，中國食品藥品檢定研究院；藍布正藥材2批次為2013年10～11月份采自貴州省遵義縣楓香鎮(zhèn)，均經(jīng)遵義醫(yī)學院藥學院生藥學教研室楊建文主任鑒定為柔毛路邊青(GeumjaponicumThunb.var.chineseF.bolle)的全草，憑證標本保存于遵義醫(yī)學院藥學院。硫酸亞鐵、酒石酸鉀鈉、十二水磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀及乙醇等均為分析純，國藥化學試劑有限公司；水為雙蒸水。

2方法

2.1干燥方法

2.1.1 藍布正藥材的預處理將采收來的藍布正用清水洗凈泥土，甩干水分后將其莖剪為5 mm左右，以備干燥用。藥材隨機用于晾干法、陰干法和烘箱干燥法。

2.1.2自然晾干法 將預處理的藍布正置于報紙上，放于室外陽光充足處進行晾曬干燥，在晾曬的過程不時翻動，加快干燥速度，干燥后立即放入自封袋內(nèi)，標號，置于干燥器內(nèi)保存。

2.1.3自然陰干法將預處理的藍布正置于報紙上，放于室內(nèi)陰涼通風處進行陰干干燥，在干燥的過程不時翻動，加快干燥速度，干燥后立即放入自封袋內(nèi)，標號，置于干燥器內(nèi)保存。

2.1.4烘箱干燥法 將預處理的藍布正置于報紙上，放于烘箱內(nèi)，為防止溫度過高影響有效成分分解，控溫40～45 ℃，鼓風干燥，在干燥的過程不時翻動，加快干燥速度，干燥后立即放入自封袋內(nèi)，標號，置于干燥器內(nèi)保存。

2.1.5干燥終點和水分測定方法干燥終點依據(jù)2010版《中國藥典》一部中規(guī)定的藍布正含水量應(yīng)少于11%，測定方法采用藥典規(guī)定的第一法(烘干法)。

2.2藍布正中總多酚含量測定方法的建立本文以沒食子酸為對照品，參考文獻中報道的方法[5]，建立藍布正總多酚的酒石酸亞鐵顯色法，以紫外分光光度計測定藍布正中總多酚的含量，同時進行了方法學驗證。

2.2.1反應(yīng)溶液的配制酒石酸亞鐵溶液的配制：精密稱取硫酸亞鐵約1.0 g，酒石酸鉀鈉約5.0 g用水溶解并定容至1 L棕色容量瓶中，即得酒石酸亞鐵溶液； pH 7.5磷酸鹽緩沖溶液配制：精密稱取十二水磷酸氫二鈉約23.9 g，加水溶解，定容至1 L棕色容量瓶中，計作溶液A； 精密稱取經(jīng)110 ℃烘干2 h磷酸二氫鉀約9.1 g，加水溶解定容至1 L棕色容量瓶中，計為溶液B。取溶液A 85 mL與溶液B 15 mL充分混合均勻，調(diào)pH 至7.5，即得。

2.2.2對照品溶液的制備精密稱取沒食子酸對照品約50.0 mg，放入50 mL棕色容量瓶中，以蒸餾水溶解并定容，制得沒食子酸母液(1 mg / mL)。精密吸取母液1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 mL至10 mL棕色容量瓶中以蒸餾水定容至刻度，搖勻后過0.22 μm微孔濾膜，即得0.10, 0.20, 0.30, 0.40, 0.50, 0.60, 0.70, 0.80 mg /mL的系列標準溶液。

2.2.3供試品溶液的制備取干燥的藍布正藥材，粉碎，過60目篩，每份樣品均有少量殘渣，為保證不同樣品之間的一致性，本研究將殘渣和粉末的重量按相同比例精密稱取藍布正約0.1 g，放于25 mL容量瓶中，以25%乙醇定容至刻度，蓋上瓶塞，超聲提取30 min(頻率100 kHz)。 超聲完畢取出容量瓶冷卻待至室溫，以25%乙醇補足損失的重量，搖勻后1200 g /min離心5 min, 取上層澄清液，以0.22 μm的微孔濾膜，即得供試品溶液。

2.2.4標準曲線的繪制分別精密量取2.2.2項下不同濃度的標準溶液2 mL置于8個25 mL容量瓶中，加入4 mL蒸餾水、5 mL酒石酸亞鐵溶液，混勻后用pH 7.5的磷酸鹽緩沖液定容至刻線。以蒸餾水代替待測液作空白對照，用紫外分光光度計測543 nm波長處的吸光度，以吸光度A為縱坐標，樣品濃度C為橫坐標繪制標準曲線，計算標準曲線方程Y=16.125X+ 0.018(r=0.9992),結(jié)果表明沒食子酸對照品溶液在0.008 ～ 0.064 mg / mL的濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，見圖1。

圖1　沒食子酸的標準曲線

2.2.5精密度試驗按2.2.3項下方法制備供試品溶液1份，按2.2.4項下方法顯色分析，連續(xù)分析測定6次，代入標準曲線方程，計算樣品含量，結(jié)果RSD為0.19 %，表明本方法精密度良好。

2.2.6重復性試驗取同一批次烘干的藍布正粉末7份，精密稱定，按2.2.3項下方法制備供試品溶液，按2.2.4項下方法顯色分析，代入標準曲線方程計算藍布正中多酚的平均含量為5.65 %，RSD為1.93 %，表明本文所建立的方法重復性良好。

2.2.7穩(wěn)定性試驗取同一批次烘干法干燥的藍布正粉末1份，精密稱定。按2.2.3項下方法制備供試品溶液，在室溫下放置，分0、4 、8 h 3個不同時間段考察不同測定時間樣品的穩(wěn)定性。移取每組所提取溶液2 mL, 按2.2.4項下方法顯色分析，代入標準曲線方程計算藍布正中多酚的平均含量為5.65 %, RSD為2.13%, 表明樣品溶液在室溫放置0～8 h內(nèi)穩(wěn)定。

3結(jié)果

3.1加樣回收率精密稱取已知含量的藍布正粉末約50 mg，加入一定量的對照品，按2.2.3項下方法制備供試品溶液，按2.2.4項下方法顯色分析，計算加樣回收率，結(jié)果(見表1)。

表1加樣回收率試驗結(jié)果

編號取樣量(mg)已知量(mg)加入量(mg)測得量(mg)回收率(%)平均值(%)RSD(%)150.012.822.815.509795.21250.032.822.815.432192.75350.292.842.895.8585104.43450.002.822.745.315994.94550.172.832.755.374098.37650.182.832.755.567899.4097.524.30

3.2不同干燥方法處理的藍布正中沒食子酸的含量測定分別取2批樣品，每批樣品中每種干燥方法平行取2份，按2.2.3項下方法制備供試品溶液，按2.2.4項下方法顯色分析，計算不同干燥方法處理的樣品含量，結(jié)果見表2。比較不同干燥方法的干燥時間及對有效成分的影響。從表2可見，烘干法所用干燥時間最短(19 h)，晾干法與陰干法干燥時間一樣，均需5 d。不同干燥方法對于藍布正中多酚含量的積累不一致，檢測二批樣品的多酚含量，烘干法均高于晾干法，但與陰干法的含量差異不大。

表2不同干燥方法對藍布正總多酚含量的影響

干燥方法干燥時間總多酚含量(%)第1批第2批烘干法19h6.535.76晾干法5d5.845.37陰干法5d6.585.70

4討論

藍布正是貴州特色民族藥，多分布于貴陽、遵義、凱里、都勻、獨山、惠水、松桃等地，資源豐富[6]，現(xiàn)代藥理研究表明其具較好的心腦血管活性。多酚作為藍布正中重要的藥效組分，具有較高的含量，因此在產(chǎn)地干燥中應(yīng)注意對多酚類成分的保存，減少加工過程中有效成分的影響。

4.1藍布正樣品預處理及取樣方法優(yōu)化藍布正為全草入藥，干燥后不易加工，因此本實驗對藍布正干燥之前, 對其進行了清洗和修剪, 保證了實驗結(jié)果的重現(xiàn)性。同時在藍布正粉碎過篩的過程中，總有一些未通過60目篩的殘渣，為了保證結(jié)果的一致性，本研究將殘渣與過篩的重量均進行稱量，獲得不同樣品的粉末與殘渣比，在稱量中按相同比例進行稱取，可有效保證批次間樣品測定結(jié)果

的合理和準確，同時也可減少通過增加粉碎時間產(chǎn)生的熱量對有效成分的影響。

4.2供試品溶液制備方法的優(yōu)選在藍布正樣品溶液的制備方法優(yōu)化中，本研究首先考察了0 %、20 %、25 %、30 % 4個不同質(zhì)量分數(shù)的乙醇對藍布正中總多酚的提取效果(n = 2)，基于總多酚的含量和重復性最終優(yōu)化出25%乙醇為藍布正多酚的提取溶劑；同時本研究考察了超聲和回流提取對藍布正多酚的提取效果，以提取的多酚含量為標準，結(jié)果表明回流法提取的總多酚含量雖然高于超聲法，但重復性較差，超聲法提取的重復性較好，綜合考慮選取超聲提取法。此外本研究對超聲提取時間進行了優(yōu)化，結(jié)果表明超聲 30 min處理的藍布正多酚含量較低，表明提取尚不完全，超聲45 min與60 min處理的藍布正多酚有效成分均可完全溶出，且重復性均較好，二種處理時間無明顯差異，為了減少處理時間，提高效率，最終選取超聲45 min。

4.3不同干燥方法的效果評價中藥材的干燥對于其保存和使用具有重要意義。貴州省天氣多雨常陰，采取適宜的干燥方法對于防止藍布正的吸潮、發(fā)霉、變質(zhì)等尤為重要。本研究通過紫外掃描沒食子酸的紫外光譜，確定了543 nm為檢測波長, 陰性對照樣品無干擾。該方法用于3種干燥方法的評價，結(jié)果表明，綜合2批次樣品，烘干法處理樣品的多酚含量高于晾干法，但烘干法與陰干法之間的差異不大，提示室外陽光可能對多酚有一定的破壞。再者，烘干法的干燥時間最短(19 h)，優(yōu)于晾干法(5 d)與陰干法(5 d)，干燥速度快，便于工業(yè)化生產(chǎn)。

綜上所述，通過對比3種方法得出烘干法不但可有效保護酚類成分損失，同時又減少了干燥時間，有利于藥材的快速干燥和防霉變，因此烘干法可為藍布正的干燥加工提供實驗依據(jù)。

[參考文獻]

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[收稿2015-10-14;修回2015-11-14]

(編輯：王福軍)

Effects of different drying methods on the content of total polyphenols components ofGeumJaponicumThunb.var.Chinese F.bolle in Guizhou

ZhangJianyong1,YangXiaowei1,DuanCancan1，NieXuqiang1,PeiXian1,ZhouQingdi2

(1.Deparment of Pharmacy， Zunyi Medical University， Zunyi Guizhou 563099, China; 2. School of Chemistry,The University of Sydney，NSW2006，Australia)

[Abstract]Objective To investigate the effect of different drying methods on the active components ofGeumjaponicumThunb.var.chineseF.bolle (Chinese name lanbuzheng, LBZ) in Guizhou by the determination of total polyphenols.Methods The method for the detection of total polyphenols in LBZ by UV was established, the effects of oven drying, drying in the sun and drying in the shade on the content were examined.Results This method was reliable, quick and had good repeatability. Different contents of total polyphenols were observed by three drying methods, the contents of total polyphenols from oven drying, drying in the sun, drying in the shade were 6.53%, 5.84%, 6.58% for first batch, 5.76% 5.37%, 5.70% for second batch, respectively. The time of oven drying was shorter than drying in the sun or drying in the shade.Conclusion LBZ is suitable for oven drying in the production place.

[Key words]GeumjaponicumThunb.var.chineseF.bolle；drying method; total polyphenols； content determination

[中圖法分類號]R282.4

[文獻標志碼]A

[文章編號]1000-2715(2015)06-0646-03

[基金項目]國家自然科學基金資助項目(NO: 81560736)；教育部春暉計劃項目(NO: Z2014096)；貴州省科學技術(shù)基金項目(NO: 黔科合J字[2014]2182)。