蔡璇，許菁，徐姣，潘鄧記

腦梗死病理生理機(jī)制復(fù)雜，目前臨床上普遍認(rèn)為電針對(duì)腦梗死有治療作用，但缺乏基礎(chǔ)研究方面的論證。本研究觀察電針治療腦梗死的可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料 ①實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：14～18周的雄性昆明小鼠48只，購自華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物房，體質(zhì)量(30.0±3.0)g。②儀器：G6805-2A型低頻電子脈沖治療儀(上海醫(yī)療電子儀器有限公司)，健衛(wèi)仕牌一次性無菌針灸針(上海泰成科技發(fā)展有限公司)。

1.2 方法 ①造模:通過頸內(nèi)動(dòng)脈線栓法建立小鼠大腦中動(dòng)脈阻塞模型[1],術(shù)后室溫恒定在25℃。②分組：將造模后小鼠隨機(jī)分為電針組和針刺組各24只。③干預(yù):電針組,造模術(shù)后第1天開始治療，參照全國針灸學(xué)會(huì)實(shí)驗(yàn)針灸研究會(huì)制定的“實(shí)驗(yàn)動(dòng)物針灸穴位圖譜”，選取百會(huì)穴，φ0.32×15mm毫針刺入，接電針儀。采用連續(xù)波，頻率3次/s，強(qiáng)度以針柄顫動(dòng)，但動(dòng)物能保持安靜為度。每日1次，每次15min。針刺組，造模術(shù)后第1天開始針刺小鼠相同穴位,不予通電，每日1次，每次15min。

1.3 評(píng)定標(biāo)準(zhǔn) ①神經(jīng)功能評(píng)分[2]：術(shù)后4周，采用5分制評(píng)分法分別對(duì)2組小鼠進(jìn)行評(píng)分。②梗死體積：從2組小鼠中各隨機(jī)選擇18只小鼠，斷頭取腦，冷凍后固定；選擇每一切片的尾側(cè)面用HPIAS-1000高清晰度圖像處理系統(tǒng)進(jìn)行分析，測(cè)量梗死體積。③免疫組化檢測(cè)Bcl-xl蛋白表達(dá)：將2組各剩余的6只小鼠的腦組織進(jìn)行檢測(cè)。④腦片與膜片鉗：2組各18只小鼠予以麻醉，開顱取腦，冷卻固定，保持低溫狀態(tài)并持續(xù)通氣。用振動(dòng)切片機(jī)切成300μm厚的切片， 腦片放于5% CO2和95% O2飽和的Krebs堿性緩沖液5ml，在37℃下孵育30min平衡，然后上機(jī)記錄神經(jīng)元電活動(dòng)。

2 結(jié)果

治療4周后，電針組神經(jīng)功能評(píng)分明顯低于針刺組(P<0.01)，梗死體積明顯小于針刺組(P<0.01)，Bcl-xl的表達(dá)量明顯高于針刺組(P<0.01)。膜片鉗結(jié)果顯示，電針組BK-channel的寬度明顯窄于針刺組(P<0.01)。見表1,圖1a～b。

組別神經(jīng)功能(分)腦梗死體積(mm3)Bcl?xl蛋白表達(dá)(個(gè))動(dòng)作電位寬度(ms)針刺組3．61±0．9227．28±2．59233．41±11．571．82±0．44電針組1．82±0．73a17．84±1．81a367．07±16．76a1．60±0．25a

與針刺組比較,aP<0.01

a.針刺組 b.電針組

圖1a～b 2組小鼠Bcl-xl蛋白表達(dá)的免疫組織化學(xué)染色(×400)(箭頭所示為Bcl-xl蛋白表達(dá)陽性細(xì)胞)

3 討論

本研究結(jié)果顯示，電針組小鼠的腦梗死體積及神經(jīng)功能評(píng)分均明顯低于針刺組，表明電針組小鼠大腦功能區(qū)損傷后的恢復(fù)程度好于針刺組小鼠。本研究發(fā)現(xiàn)電針組小鼠Bcl-xl的表達(dá)較針刺組明顯增加。研究表明Bcl-xl參與多種蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用而發(fā)揮其抑制凋亡功能[3]。 在內(nèi)源性凋亡途徑中，Bcl-xl通過阻斷Bax對(duì)線粒體外膜的破壞發(fā)揮抗凋亡作用[3]。Bcl-xl通過干擾Caspase-3的活性阻止凋亡，也可以通過維持線粒體膜電位和控制活性氧(ROS)的毒性發(fā)揮其抗凋亡的作用[4]。大電導(dǎo)鉀通道(BK-channel)被認(rèn)為是可以起到保護(hù)神經(jīng)元免受缺血再灌注損傷的作用[5]。本研究結(jié)果顯示，電針組BK-channel的寬度明顯窄于針刺組，提示電針組存在BK-channel的功能改善，電針可能通過加強(qiáng)了BK-channel的功能而達(dá)到了神經(jīng)保護(hù)的作用。

文獻(xiàn)提示電針百會(huì)穴可抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡，減輕腦缺血再灌注損傷，為本實(shí)驗(yàn)提供了用穴依據(jù)[6-7]。在本實(shí)驗(yàn)中，電針百會(huì)穴可上調(diào)Bcl-xl蛋白表達(dá)，并出現(xiàn)電針小鼠梗塞體積的減小及神經(jīng)功能評(píng)分的改善，有可能是通過阻斷Bax對(duì)線粒體外膜的破壞或通過干擾死亡誘導(dǎo)信號(hào)復(fù)合體的組裝，抑制Caspase-8、干擾Caspase-3的活性阻止凋亡而實(shí)現(xiàn)的。另外，BK-channel的功能改善也在電針組得到證實(shí)，說明在離子通道水平，電針也通過改善BK-channel的功能，抑制了鈣超載，保護(hù)了神經(jīng)元。

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