陳少華，鄧 芳，孫永梅，李 明，張 揚(yáng)

(安徽省腫瘤醫(yī)院，合肥 230031)

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·論 著·

兩種肌鈣蛋白檢測(cè)方法對(duì)脂血、黃疸和溶血的抗干擾評(píng)價(jià)

陳少華，鄧 芳△，孫永梅，李 明，張 揚(yáng)

(安徽省腫瘤醫(yī)院，合肥 230031)

目的 評(píng)價(jià)電化學(xué)發(fā)光法和免疫比濁法檢測(cè)肌鈣蛋白時(shí)對(duì)脂血、黃疸和溶血的影響。方法 采用已知范圍內(nèi)的肌鈣蛋白標(biāo)本與不同濃度的脂血、黃疸和溶血標(biāo)本以一定比例混合，用ROCH E601電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀和貝克曼DXC800生化分析儀分別檢測(cè)標(biāo)本中的肌鈣蛋白濃度，觀察脂血、黃疸和溶血對(duì)肌鈣蛋白檢測(cè)結(jié)果的影響。結(jié)果 以偏差小于10.00%為可接受標(biāo)準(zhǔn)，脂血小于4.45 mmol/L對(duì)電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)肌鈣蛋白影響不大，而免疫比濁法在三酰甘油僅為1.03 mmol/L時(shí)即有537.04%的偏差；而黃疸在376 μmol/L時(shí)，電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)肌鈣蛋白的偏差小于10.00%，而免疫比濁法在總膽紅素為0.76 μmol/L時(shí)即有26.67%的偏差，遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于說(shuō)明書(shū)中1 020 μmol/L的聲明；溶血在血紅蛋白低于10 g/L時(shí)，電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)肌鈣蛋白沒(méi)有偏差，而免疫比濁法在血紅蛋白僅為1.5 g/L時(shí)即有537.04%的負(fù)偏差，小于說(shuō)明書(shū)4.5 g/L的聲明。結(jié)論 在肌鈣蛋白處于正常參考值范圍內(nèi)，脂血、黃疸和溶血對(duì)電化學(xué)發(fā)光方法檢測(cè)結(jié)果影響較小，基本和說(shuō)明書(shū)一致；而使用免疫比濁的檢測(cè)方法，要盡量避免脂血、黃疸和溶血等因素干擾。

肌鈣蛋白； 干擾； 電化學(xué)發(fā)光測(cè)定法

肌鈣蛋白檢測(cè)對(duì)于急性心肌梗死的早期診斷有著重要的作用，據(jù)2007年美國(guó)臨床化學(xué)學(xué)會(huì)醫(yī)療實(shí)踐指南中，關(guān)于肌鈣蛋白的最大濃度至少有1次超過(guò)正常參考人群數(shù)值的第99百分位數(shù)作為心肌梗死的判斷標(biāo)準(zhǔn)，以總變異系數(shù)小于10%定義為最佳精密度[1-2]。但有數(shù)據(jù)提示其檢測(cè)結(jié)果受脂血、黃疸和溶血等因素的干擾，雖然不同的說(shuō)明書(shū)對(duì)其抗干擾的數(shù)值進(jìn)行了規(guī)定，但來(lái)自臨床的評(píng)價(jià)比較有限[3]。本研究評(píng)價(jià)電化學(xué)發(fā)光法和免疫比濁法檢測(cè)正常范圍內(nèi)肌鈣蛋白時(shí)對(duì)脂血、黃疸和溶血的影響，現(xiàn)將相關(guān)情況報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 儀器分別為羅氏Cobas E601 電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，校準(zhǔn)液(批號(hào)174584)、試劑(批號(hào)179491)、質(zhì)控物(批號(hào)175009)由羅氏公司提供；貝克曼DXC800全自動(dòng)生化分析儀，試劑為川至(批號(hào)140311)、校準(zhǔn)液(批號(hào)140717)、質(zhì)控物(批號(hào)140005)。

1.2 標(biāo)本來(lái)源及制備 收集臨床患者和健康體檢者全血樣本，均無(wú)脂血、黃疸、溶血，并分別收集三酰甘油35.0 mmol/L、黃疸752 μmol/L和血紅蛋白40 g/L的臨床標(biāo)本，通過(guò)生理鹽水稀釋，最終分別配為三酰甘油0、1.03、0.45、11.03、16.00、17.50 mmol/L，黃疸0、50、150、200、300、376 μmol/L和血紅蛋白0、1.5、4.0、5.0、10.0、20.0 g/L的濃度梯度，待測(cè)。

1.3 檢測(cè)方法 混合標(biāo)本分別用羅氏Cobas E601電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀和貝克曼DXC800全自動(dòng)生化分析儀重復(fù)檢測(cè)肌鈣蛋白3次并取平均值。計(jì)算干擾造成的偏差：偏差(%)=(干擾)/基礎(chǔ)濃度×100%。若偏差大于10.00%有影響，10.00%以內(nèi)無(wú)影響。

2 結(jié) 果

2.1 三酰甘油對(duì)兩種方法檢測(cè)肌鈣蛋白的影響 三酰甘油濃度小于4.45 mmol/L對(duì)電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)肌鈣蛋白影響不大，而免疫比濁法在三酰甘油僅為1.03 mmol/L時(shí)即有536.67%的偏差。見(jiàn)表1。

表1 三酰甘油對(duì)兩種方法檢測(cè)肌鈣蛋白的影響

2.2 黃疸對(duì)兩種方法檢測(cè)肌鈣蛋白的影響 總膽紅素濃度376 μmol/L時(shí)，電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)肌鈣蛋白的偏差小于10.00%，而免疫比濁法在總膽紅素0.76 μmol/L時(shí)即有26.67%的偏差，遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于說(shuō)明書(shū)中1 020 μmol/L的聲明。見(jiàn)表2。

表2 黃疸對(duì)兩種方法檢測(cè)肌鈣蛋白的影響

2.3 溶血對(duì)兩種方法檢測(cè)肌鈣蛋白的影響 血紅蛋白低于10 g/L時(shí)，電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)肌鈣蛋白沒(méi)有偏差，而免疫比濁法在血紅蛋白僅為1.5 g/L時(shí)即有537.04%的負(fù)偏差，小于說(shuō)明書(shū)4.5 g/L的聲明。見(jiàn)表3。

表3 溶血對(duì)兩種方法檢測(cè)肌鈣蛋白的影響

3 討 論

2007年公布的“歐洲心臟病學(xué)會(huì)-美國(guó)心臟病學(xué)會(huì)基金會(huì)-美國(guó)心臟病協(xié)會(huì)-世界心臟聯(lián)合會(huì)”心肌梗死重新定義和美國(guó)臨床生化學(xué)會(huì)的心肌標(biāo)志物在急性冠狀動(dòng)脈綜合征中應(yīng)用的臨床實(shí)驗(yàn)室醫(yī)學(xué)實(shí)踐指南，均建議用心肌肌鈣蛋白I或T(cTnI或cTnT)作為急性心肌梗死的診斷標(biāo)準(zhǔn)生物標(biāo)志物。肌鈣蛋白濃度升高或降低，必須至少1個(gè)濃度大于參考人群的第99百分位值，并且必須結(jié)合臨床、心電圖和影像學(xué)診斷結(jié)果[4]。電化學(xué)發(fā)光法和免疫比濁法是比較常見(jiàn)的方法，電化學(xué)發(fā)光法有較高的特異性和敏感性，但由于發(fā)光試劑使用配套產(chǎn)品，價(jià)格高，操作復(fù)雜，在很多急診檢測(cè)中使用開(kāi)放系統(tǒng)、價(jià)格便宜和操作簡(jiǎn)單的生化免疫比濁法[5]；同時(shí)，由于肌鈣蛋白的檢測(cè)在臨床上常常作為急診項(xiàng)目，那么標(biāo)本的狀態(tài)往往不可控制，脂血、黃疸和溶血標(biāo)本是臨床最常見(jiàn)的不合格類型；再者由于肌鈣蛋白濃度隨病情進(jìn)展有改變，標(biāo)本重抽復(fù)檢也有一定的風(fēng)險(xiǎn)和困難，那么合理評(píng)估脂血、黃疸和溶血對(duì)檢測(cè)的偏差，對(duì)保證檢驗(yàn)結(jié)果的快速準(zhǔn)確有著重要的作用。

脂血是臨床實(shí)驗(yàn)室急診標(biāo)本最常見(jiàn)的干擾因素，患者由于進(jìn)食高脂飲食或者本身的高脂血癥，血漿或血清常呈現(xiàn)渾濁狀，若乳糜微粒過(guò)多可呈乳白色，所以也稱“乳糜血”。由于乳糜微粒的影響可使入射光產(chǎn)生散射，故對(duì)免疫比濁原理的方法學(xué)產(chǎn)生一定偏差[6-7]。本研究采用臨床常見(jiàn)的濃度梯度，結(jié)果表明脂血對(duì)兩種肌鈣蛋白檢測(cè)方法有較大的差異，電化學(xué)發(fā)光法在三酰甘油4.45 mmol/L濃度時(shí)偏差小于預(yù)定目標(biāo)10.00%，可以接受，但在11.03 mmol/L時(shí)檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)25.00%的正偏差，小于試劑說(shuō)明書(shū)上聲明的16.95 mmol/L(1 500 mg/dL)，而免疫比濁法在三酰甘油1.03 mmol/L時(shí)，即出現(xiàn)高達(dá)536.67%的正偏差，提示脂血對(duì)此方法影響非常大，分析免疫比濁法是通過(guò)光學(xué)比濁法進(jìn)行計(jì)算，而標(biāo)本中的脂肪加大了濁度，對(duì)檢測(cè)結(jié)果形成了正偏差，故用此方法要避免脂血。

健康人血漿里膽紅素的含量為1.71～17.10 μmol/L，但在很多病理狀態(tài)下如紅細(xì)胞破壞過(guò)多、肝臟疾病或者膽道梗阻時(shí)，膽紅素水平超過(guò)正常值出現(xiàn)黃疸血清，血中膽紅素越高，黃疸越重。本研究通過(guò)加入不同濃度臨床常見(jiàn)膽紅素形成不同程度的黃疸血清，檢測(cè)結(jié)果顯示，兩種方法檢測(cè)的肌鈣蛋白的結(jié)果隨著黃疸嚴(yán)重程度增加出現(xiàn)非線性變化，在0～376 μmol/L濃度范圍內(nèi)電發(fā)光檢測(cè)方法的影響勉強(qiáng)可以接受，與試劑說(shuō)明書(shū)一致(<0.01 ng/mL時(shí)偏差小于20.00%)，但偏差正負(fù)不定，在50 μmol/L偏差最大為10.50%；而比濁法呈現(xiàn)隨血中總膽紅素濃度升高而正偏差越來(lái)越大的現(xiàn)象，在50 μmol/L偏差就達(dá)到25.60%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于廠家說(shuō)明書(shū)中在1 020 mmol/L時(shí)偏差10.00%的性能。

溶血是臨床最常見(jiàn)的不合格標(biāo)本原因，有各種原因造成，本研究結(jié)果表明隨著溶血程度的增加兩種方法對(duì)肌鈣蛋白檢測(cè)結(jié)果逐步下降，故存在著不同程度的負(fù)偏差，比濁法受溶血影響較大，在血紅蛋白稍微升高1.5 g/L即可出現(xiàn)-98.33%的偏差，與其說(shuō)明書(shū)中抗干擾為4.5 g/L有較大的差距；而電發(fā)光的結(jié)果在1.5 g/L時(shí)偏差為0.00，說(shuō)明結(jié)果沒(méi)有影響,而在血紅蛋白濃度達(dá)到10 g/L檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生了超過(guò)20.00%的負(fù)偏差，與其說(shuō)明書(shū)中抗溶血濃度為小于10 g/L一致,和文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[8]。試驗(yàn)結(jié)果提示，在實(shí)際工作中如果因?yàn)槿苎斐刹缓细駱?biāo)本檢測(cè)出現(xiàn)高值結(jié)果，可能提示臨床結(jié)果陽(yáng)性。

綜上所述，電化學(xué)發(fā)光法和免疫比濁法檢測(cè)肌鈣蛋白對(duì)脂血、黃疸和溶血的干擾有一定的抵抗能力，其中，電化學(xué)發(fā)光法對(duì)三酰甘油小于4.45mmol/L的脂血、總膽紅素小于376μmol/L的黃疸和血紅蛋白小于10g/L的標(biāo)本沒(méi)有影響，與其說(shuō)明書(shū)基本一致；而免疫比濁法抗干擾能力較弱，盡量避免脂血、黃疸和溶血。

本試驗(yàn)中羅氏Cobas E601電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀和貝克曼DXC800全自動(dòng)生化分析儀分別檢測(cè)的是肌鈣蛋白的T和I亞基，可能對(duì)結(jié)果有一定的影響。但有研究證實(shí)，兩者檢測(cè)有良好的一致性，方法上電化學(xué)發(fā)光法用的基本原理是雙抗夾心法，而生化分析儀上是免疫比濁法，有學(xué)者建議對(duì)不同方法學(xué)檢測(cè)不同位點(diǎn)的檢測(cè)方法不建議進(jìn)行比對(duì)。但在實(shí)際工作中，不同的檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)的結(jié)果在臨床診療有一定的延續(xù)性，作者認(rèn)為臨床實(shí)驗(yàn)室有義務(wù)主動(dòng)對(duì)結(jié)果差異進(jìn)行評(píng)估，以更好地對(duì)其檢測(cè)性能全面評(píng)價(jià)，為實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)在臨床應(yīng)用作出合理的指導(dǎo)。

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Evaluation on anti-interference of two kinds of troponin detection method on lipoidemia jaundice and hemolysis

CHENShao-hua，DENGFang△,SUNYong-mei,LIMing,ZHANGYang

(AnhuiProvincialTumorHospital,Hefei,Anhui230031,China)

Objective To evaluate the influence of chemiluminescence and immune turbidimetry on lipoidemia,jaundice and hemolysis in detecting troponin.Methods The troponin samples with known range and different concentrations of lipoidemia,jaundice and hemolytic samples were mixed in a certain proportion.The ROCH E601 electrochemiluminescence immunoassay analyzer and and the Backman DX800 biochemical analyzer were adopted to detect the troponin concentration.The influence of lipoidemia,jaundice and hemolysis on the troponin detection result was observed.Results With a deviation of less than 10.00% as the acceptance criteria,lipoidemia <4.45 mmol/L had little influence on the troponin detection by the electrochemiluminescence immunoassay,but triglyceride only was 1.03 mmol/L by immune turbidimetry,the deviation was 537.04%;while jaundice was 376 μmol/L,the troponin deviation by electrochemiluminescence immunoassay was less than 10.00%,while jaundice was 0.76 μmol/L by the immune turbidimetry,the deviation was 26.67%,which was much less than 1 020 μmol/L in the statement of the instruction;the hemoglobin was less than 10 g/L in hemolysis,the troponin detected by the electrochemiluminescence had no deviation,but hemoglobin was only 1.5 g/L by the immune turbidimetry,the negative deviation was 537.04%,which was less than 4.5 g/L in the statement of the instruction.Conclusion In troponin normal reference value range,lipoidemia,jaundice and hemolysis have little influence on the results detected by the electrochemiluminescence,which is basically consistent with the instruction;while conducting troponin detection by using the immune turbidimetry should avoid the interference of factors such as lipoidemia,jaundice and hemolysis.

troponin; interference; electrochemiluminescence assay

陳少華，男,大專,檢驗(yàn)師，主要從事臨床生化和質(zhì)量控制工作研究?！?/p>

，E-mail:Dengfanger@sina.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.17.031

A

1672-9455(2015)17-2563-02

2015-03-10

2015-03-15)