唐 瑛，王慶敏，劉李娜，陳文彬

近代研究表明，黃芪多糖具有抗氧化作用，其作用機(jī)制可能與提高機(jī)體免疫功能、清除自由基及抗脂質(zhì)過氧化有關(guān)［1］。原花青素是由不同數(shù)量的兒茶素或表兒茶素縮合而成的一大類多酚類化合物的總稱，是一種很強(qiáng)的自由基清除劑和脂質(zhì)過氧化抑制劑，具有抗氧化、抗衰老、抗癌等多種生物活性［2］。而黃酮類化合物具有廣泛的藥理活性，特別是抗氧化、抗輻射作用，是天然活性成分中極具應(yīng)用潛力的資源之一。由刺五加黃酮、黃芪多糖和原花青素組成的復(fù)方芪加口服液具有很好的抗輻射作用。本研究擬以60Co γ輻射所致造血機(jī)能損傷模型小鼠為研究對象，觀察芪加口服液對輻射損傷小鼠造血功能的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 動物 昆明種小鼠50只，雌雄各半，體質(zhì)量22～24 g，由復(fù)旦大學(xué)實驗動物中心提供，并經(jīng)倫理委員會許可，許可證號:SCXK(滬)2007-0002。

1.2 主要試劑 芪加口服液由刺五加黃酮、黃芪多糖和原花青素組成，由湖北省中醫(yī)藥研究院新藥研究室提供，批號0050215。

1.3 分組及給藥 按數(shù)字表法隨機(jī)將小鼠分為5組，即對照組、模型組和芪加口服液高(400 mg/kg)、中(200 mg/kg)、低(100 mg/kg)劑量給藥組，每組10只。給藥組按設(shè)定劑量照前灌胃2周，照后灌胃1周，對照組和模型組給予等體積生理鹽水。

1.4 照射條件 采用BJ-6B醫(yī)用電子直線加速器(北京)，60Co γ射線一次全身照射。模型組和給藥組小鼠置于自制有機(jī)玻璃盒中(20cm×20cm，深3.5cm)照射，照射距離10cm，小鼠吸收劑量為6.0 Gy。對照組設(shè)置相應(yīng)環(huán)境，佯照射。

1.5 觀察指標(biāo) (1)白細(xì)胞數(shù)(white blood cell，WBC):照射后第9天尾部取血，計數(shù)WBC數(shù)。(2)骨髓有核細(xì)胞數(shù):照射后第9天將小鼠頸椎脫臼處死，取左側(cè)股骨，白細(xì)胞稀釋液沖洗骨髓細(xì)胞，顯微鏡下計數(shù)骨髓有核細(xì)胞數(shù)。(3)骨髓DNA含量:測定方法參照文獻(xiàn)［3］。(4)脾指數(shù):取脾臟稱重，按下式計算脾指數(shù):脾指數(shù)=脾質(zhì)量(mg)/鼠體質(zhì)量(g)。(5)內(nèi)源性脾結(jié)節(jié):測定方法參照文獻(xiàn)［4］。

2 結(jié)果

2.1 芪加口服液對受照射小鼠外周血白細(xì)胞的影響 見圖1。與對照組相比較，在接受60Coγ射線一次全身照射后，模型組的小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)均明顯減少，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);與模型組比較，芪加口服液給藥組小鼠的白細(xì)胞數(shù)較模型組增加，其中給予高、中劑量芪加口服液小鼠，白細(xì)胞數(shù)增加明顯，且與劑量呈正相關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01或＜0.05)。

2.2 芪加口服液對受照射小鼠脾指數(shù)和脾結(jié)節(jié)的影響 與模型組比較，芪加口服液給藥組小鼠的脾指數(shù)和脾結(jié)節(jié)數(shù)較模型組增加，其中高、中劑量組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

圖1 芪加口服液對60Co γ射線照射小鼠外周血白細(xì)胞的影響(±s，每組 n=10)

表1 芪加口服液對60Coγ射線照射小鼠造血系統(tǒng)的影響(±s)

表1 芪加口服液對60Coγ射線照射小鼠造血系統(tǒng)的影響(±s)

注:與對照組比較aP＜0.05;與模型組比較bP＜0.05

組別 鼠數(shù) 劑量(mg/kg) 脾指數(shù)(mg/g) 脾結(jié)節(jié)(個)對照組10 3.55±0.01模型組 10 2.23±0.01a 1.29±0.32高劑量組 10 400 3.27±0.01b 2.32±0.96b中劑量組 10 200 3.40±0.01b 2.24±0.21b低劑量組10 100 2.85±0.01 1.84±1.01

2.3 芪加口服液對受照射小鼠骨髓有核細(xì)胞數(shù)和DNA含量的影響 與模型組比較，芪加口服液各給藥組小鼠的骨髓有核細(xì)胞數(shù)增加，骨髓DNA含量明顯增高，高、中劑量組與模型組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01或P＜0.05)，說明芪加口服液能保護(hù)受照射小鼠造血功能。見表2。

表2 芪加口服液對60Co γ射線照射小鼠造血功能的影響(±s)

表2 芪加口服液對60Co γ射線照射小鼠造血功能的影響(±s)

注:與對照組比較aP＜0.01;與模型組比較bP＜0.05，cP＜0.01

組別 鼠數(shù) 劑量(mg/kg) DNA(A268/根股骨)骨髓有核細(xì)胞(×106/根股骨)對照組10 0.16±0.02 7.45±1.11模型組 10 0.02±0.004a 0.81±0.21a高劑量組 10 400 0.04±0.02c 1.31±0.21b中劑量組 10 200 0.05±0.01c 1.15±0.21b低劑量組10 100 0.03±0.021 1.03±0.13

3 討論

造血器官是射線的敏感器官，受照射后造血組織損傷產(chǎn)生一系列病理變化，造血功能的恢復(fù)是預(yù)后的關(guān)鍵因素。本研究采用BJ-6B醫(yī)用電子直線加速器(北京)，60Co γ射線一次全身照射，骨髓有核細(xì)胞數(shù)和DNA含量含量明顯降低，說明復(fù)制輻射損傷小鼠模型是成功的。小鼠受照射后數(shù)日內(nèi)造血功能損傷較大，在第9天時，造血功能開始恢復(fù)，因此本研究觀察了第9天時的各項指標(biāo)［5］。

芪加口服液由刺五加黃酮、黃芪多糖和原花青素組成，是湖北省中醫(yī)藥研究院新藥研究室研究的新型復(fù)方抗輻射藥。本研究探討了其對輻射照射小鼠造血系統(tǒng)的影響。實驗結(jié)果說明與模型組比較，芪加口服液能提高骨髓有核細(xì)胞數(shù)、增加骨髓DNA含量和提升白細(xì)胞數(shù)，其中高、中劑量的影響差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。這說明芪加口服液對主要造血器官骨髓具有保護(hù)作用，能減輕射線對骨髓有核細(xì)胞的損傷，促進(jìn)造血功能的恢復(fù)。本研究采用內(nèi)源性脾結(jié)節(jié)法研究CFU-S多能造血干細(xì)胞的功能和相對數(shù)量。研究結(jié)果表明，芪加口服液高、中2個劑量能提高脾臟指數(shù)，顯著增加內(nèi)源性脾結(jié)節(jié)數(shù)，保護(hù)造血干細(xì)胞，提示芪加口服液對脾臟代償造血功能有促進(jìn)作用。

［1］王慶蓉，馬麗，雷呈祥.多糖抗輻射作用的研究進(jìn)展［J］.海軍醫(yī)學(xué)雜志，2009，30(3):273-276.

［2］Moini H，Rimbach G，Packer L.Molecular aspects of procyanidin biological activity:disease preventative and therapeutic potentials［J］.Drug Metabol Drug Interact，2000，17:237-259.

［3］吳萬征，李朝暉，梁球.西藏紅景天對小鼠輻射損傷的保護(hù)作用及其抗高原反應(yīng)與低溫環(huán)境的作用［J］.中藥材，2005，28(2):128-130.

［4］陳乾，晉進(jìn)，郭宏舉，等.褐藻糖膠對60Co-γ射線照射小鼠造血系統(tǒng)的輻射防護(hù)作用研究［J］.解放軍藥學(xué)學(xué)報，2014，30(1):10-13.

［5］周永，麋漫天，楊鎮(zhèn)洲.三羥異黃酮對照射小鼠造血系統(tǒng)損傷的防護(hù)作用［J］.中華放射醫(yī)學(xué)與防護(hù)雜志，2002，25(1):21-24.